¡Pérdida del volumen durante PCR?!!

[halramin]

Ejecuto tan mis tubos de PCR para 30 ciclos con un volumen de 15ul. Todos capsulados firmemente, pero yo terminamos para arriba con el volumen de la UL 8-10 después de PCR. Intenté hacerlos girar abajo de pero nada cambió. ¿Ideas? ¿es el volumen apenas demasiado pequeño?

[danfive]

¿Yo ha visto esto, usted tiene condensación en la tapa del tubo, usando una máquina de la investigación de MJ por ocasión?
El arreglo está consiguiendo un ajuste mejor entre el thermocycler y la tapa de los tubos -- hechos fácilmente usando los tubos en forma de cúpula de PCR.

[halramin]

Sí, usando el mini thermocycler de MJ. Utilizo una tapa calentada que quepa firmemente en los tubos superiores del pf. Pero encontré que puedo reducir la pérdida del volumen por los tubos de centrifugación antes de la apertura ellos para arriba. Pero aún, hay una pérdida del volumen del combate 20-30% de un tubo 15ul.

[arammik]

hey halramin

Recomendaría siempre un volumen de la reacción de uL del atleast 20. Guarde una tapa calentada de 105oC y utilice los tubos planos del casquillo si usted está utilizando la tapa calentada. También, en algunas máquinas tenga gusto de los quanta, la presión de la tapa puede ser poco un demasiado alto, haciendo los tubos combarse cerca de las bocas, durante la reacción, quizás causando un respiradero para la evaporación. Si la presión de la tapa puede ser fijada manualmente, el that'd sea apenas grande. Pero aunque la gente dice 15 uL son aceptables, recomendaría 20, especialmente porque usted están teniendo cierto apuro.

¡El cuidado de la toma y espera que se resuelva OK!

[Brotec]

Para evitar la evaporación, agregue el aceite mineral de 10 µl a los receptores de papel. Eso no da problemas con las purificaciones con QiaQuick u otros kits. ¿Buena idea?

[admin]

ésas son gracias Brotec de las buenas puntas.