Análisis de ELISA

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¿Cuál es un ELISA?

El análisis Enzima-Conectado del inmunosorbente, o ELISA, es una técnica bioquímica usada principalmente en inmunología para detectar la presencia de un anticuerpo o de un antígeno en una muestra. El ELISA se ha utilizado como herramienta de diagnóstico en medicina y la fitopatología, así como un control de calidad llega varias industrias. En términos simples, en ELISA a la cantidad desconocida de antígeno se pone a una superficie, y entonces un anticuerpo específico se lava sobre la superficie de modo que pueda atar al antígeno. Este anticuerpo se conecta a una enzima, y en el paso de progresión final se agrega una sustancia que la enzima puede convertir a una cierta señal perceptible. Así en el caso de la fluorescencia ELISA, cuando la luz se brilla sobre la muestra, cualquier complejo del antígeno/del anticuerpo será fluorescente para poder medir la cantidad de antígeno en la muestra.

La ejecución de un ELISA implica por lo menos un anticuerpo con la especificidad para un antígeno determinado. La muestra con una cantidad desconocida de antígeno se inmoviliza en una ayuda sólida (generalmente una placa de microtítulo del poliestireno) no específico (vía la adsorción a la superficie) o específicamente (vía captura por otro específico del anticuerpo al mismo antígeno, en un “emparedado” ELISA). Después de que se inmovilice el antígeno el anticuerpo de la detección se agrega, formando un complejo con el antígeno. El anticuerpo de la detección se puede covalente conectar a una enzima, o se puede sí mismo detectar por un anticuerpo secundario que se conecte a una enzima con el bioconjugation. Entre cada paso de progresión la placa se lava típicamente con una solución detergente suave para quitar cualesquiera proteínas o anticuerpo que no estén limitados específicamente. Después de que el paso de progresión final de la colada la placa sea desarrollado agregando un substrato enzimático para producir una señal visible, que indica la cantidad de antígeno en la muestra. Un ELISAs más viejo utiliza los substratos cromogénicos, aunque más nuevos análisis emplean los substratos fluorogenic con una sensibilidad mucho más alta.

Aplicaciones del análisis de ELISA

Porque el ELISA se puede realizar para evaluar la presencia de antígeno o la presencia de anticuerpo en una muestra, es una herramienta útil para determinar concentraciones del anticuerpo del suero (por ejemplo con la prueba del VIH [1] o virus de West Nile) y también para detectar la presencia de antígeno. También ha encontrado aplicaciones en la industria alimentaria en la detección de los alergénicos potenciales del alimento tales como leche, cacahuetes, nueces, almendras, y huevos. [2] ELISA se puede también utilizar en toxicología como pantalla presunta rápida para ciertas clases de drogas.

La prueba de ELISA, o el immunoensayo de la enzima (EIA), era la primera prueba de cribado empleada comúnmente para el VIH. Tiene una alta sensibilidad. En una prueba de ELISA, el suero de una persona es el doblez diluido 400 y aplicado a una placa a la cual se han asociado los antígenos del VIH. Si los anticuerpos al VIH están presentes en el suero, pueden atar a estos antígenos del VIH. La placa entonces se lava para quitar el resto de los componentes del suero. Un “anticuerpo secundario especialmente preparado” - un anticuerpo que ata a los anticuerpos humanos - entonces se aplica a la placa, seguida por otro Washington. Este anticuerpo secundario químicamente se conecta por adelantado a una enzima. Así la placa contendrá la enzima en proporción con la cantidad de anticuerpo secundario limitada a la placa. Un substrato para la enzima es aplicado, y la catálisis por la enzima lleva a un cambio en color o fluorescencia. Los resultados de ELISA están señalados como número; el aspecto más polémico de esta prueba está determinando la punta del “atajo” entre un resultado positivo y negativo.

Un método de determinar una punta de atajo está por la comparación con un estándar sabido. Por ejemplo, si una prueba de ELISA es utilizada en la investigación de la droga del lugar de trabajo, una concentración del atajo (e.g., 50 ng/mL de la droga) será establecida y una muestra será preparada que contenga esa concentración de analito. Los desconocido que generan una señal que sea más positiva que la muestra sabida se llaman “positivo” y los que generen un positivo de la señal menos que la muestra sabida se llama “negativa.

ELISA

Antes del desarrollo del EIA/ELISA, la única opción para conducir un immunoensayo era radioinmunoanálisis, una técnica usando los antígenos radiactivo-etiquetados o anticuerpos. En radioinmunoanálisis, la radiactividad proporciona a la señal que indica si un antígeno o un anticuerpo específico está presente en la muestra. El radioinmunoanálisis primero fue descrito en un papel por Rosalyn Sussman Yalow y Solomon Berson publicado en 1960 [3].

Porque la radiactividad plantea una amenaza de la salud, una alternativa más segura fue buscada. Una alternativa conveniente al radioinmunoanálisis substituiría una señal no radiactiva en lugar de la señal radiactiva. Cuando ciertas enzimas (tales como peroxidasa) reaccionan con los substratos apropiados (tales como ABTS o 3.3 ', 5.5 ' - Tetramethylbenzidine), pueden dar lugar a cambios en el color, que se puede utilizar como señal. Sin embargo, la señal tiene que ser asociada a la presencia de anticuerpo o de antígeno, que es porqué la enzima tiene que ser conectada a un anticuerpo apropiado. Este proceso de conexión fue desarrollado independientemente por Stratis Avrameas y G.B. Pierce [4]. Puesto que es necesario quitar cualquier anticuerpo o antígeno desatado lavándose, el anticuerpo o el antígeno tiene que ser fijado a la superficie del envase, es decir el inmunosorbente tiene que ser preparado. Una técnica para lograr esto fue publicada cerca de par en par y Porath en 1966 [5]

En 1971, Peter Perlmann y Eva Engvall en la universidad de Estocolmo en Suecia, tan bien como Antón Schuurs y Bauke van Weemen en los Países Bajos, publicaron independientemente los papeles que sintetizaron este conocimiento en métodos para realizar EIA/ELISA [6] [7]

Protocolo de ELISA

Vídeos del análisis de Elisa

Vídeo del análisis de ELISA

Vídeo del análisis de ELISA. La determinación de Chlorpyriphos metilo en muestras del trigo por la enzima conectó el análisis ELISA del inmunosorbente de zuhaitz77.

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Etiquetas: inmunosorbente conectado enzima elisay del análisis
Fecha: 2008-05-04

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