Conexión del miembro
Conexión del miembro
Estación molecular de los derechos reservados 2007
El borrar meridional es una técnica nombrada después de su inventor y revelador, el biólogo británico Edwin M. meridional en 1975. El borrar meridional es una técnica que permite la detección de una secuencia específica de la DNA (gene u otro) en una muestra grande, compleja de la DNA (e.g. DNA celular).
“Antes de la polimerización en cadena y barato ayuna ordenando cambió nuestra opinión del universo que es genéticas, la mancha blanca /negra meridional era un caballo de labranza universal. No había un experimento en la genética molecular que en una determinada etapa no empleó una mancha blanca /negra meridional. Sigue siendo una herramienta útil y usted necesita saber sobre ella de modo que usted pueda interpretar datos históricos.”
Diagrama de la técnica meridional de la mancha blanca /negra. La figura es derechos reservados. Si usted quisiera utilizarla para un proyecto de la conferencia o de la ciencia, éntrenos en contacto con por favor para el permiso.
En el paso de progresión 1, la DNA se digiere con los endonucleases de la restricción. La DNA de peso molecular elevado se digiere en fragmentos más pequeños.
En el paso de progresión 2, La DNA entonces es separada hacia fuera por talla por electroforesis en un gel de la agarosa.
En el paso de progresión 3, una hoja de la membrana del nilón o de la nitrocelulosa (púrpura) se coloca encima del gel de la agarosa en una solución tampón. Se considera esto la etapa el borrar o de transferencia. La presión es aplicada uniformemente al gel usando la succión o colocando una pila de las toallas de papel y un peso encima de la membrana y del gel para asegurar incluso el contacto entre el gel y la membrana. La transferencia del almacenador intermediario por la acción capilar de una región de potencial del apogeo a una región de potencial del agua baja (generalmente papel de filtro y los tejidos del papel) entonces se utiliza para mover la DNA desde el gel encendido a la membrana. Positivamente - la membrana cargada (púrpura) se utiliza generalmente que permite que la DNA ate con alta afinidad a la membrana con interacciones del ion entre negativamente - DNA cargada y positivamente - membrana cargada.
En el paso de progresión 4, las membranas de la nitrocelulosa son cocidas al horno por la exposición a las temperaturas altas (a partir el °C) el 60 a 100. Las membranas de nylon se exponen a la radiación ULTRAVIOLETA. Estos pasos de progresión se utilizan para asegurar la reticulación permanente y covalente de la DNA presente en las vendas a las membranas.
En el paso de progresión 5, la membrana se expone a una punta de prueba radiactiva. Esta punta de prueba es un fragmento de una sola fila de la DNA que tiene su secuencia de interés que usted quiera detectar. Esta punta de prueba se incuba con la membrana y se permite cruzar por hibridación con la DNA en la membrana. Las puntas de prueba son generalmente radiactivas para poderlas detectar en la película, no obstante más nuevas puntas de prueba también se utilizan que son no radiactivas por ejemplo los tintes fluorescentes o cromogénicos. Después del hibridación, exceso de la punta de prueba desatada se lava lejos de la membrana, saliendo de la punta de prueba específicamente limitada.
En el paso de progresión 6, el modelo del hibridación es detectado por la visualización en la película de radiografía de la autoradiografía en el caso de puntas de prueba radiactivas o fluorescentes, o del desarrollo del color en la membrana si se utiliza un método de detección cromogénico.
(Notas para el paso de progresión 3: Si los fragmentos grandes de la DNA están presentes mayor el kb de 15 de tamaño puede ser para entonces ácido diluído depurinated del ácido clorhídrico antes de borrar que rompa la DNA en pedazos más pequeños, así permitiendo una transferencia más eficiente del gel a la membrana. Si se utilizan los métodos alcalinos de la transferencia, el gel de la DNA se coloca en una solución alcalina (que contiene típicamente el hidróxido de sodio) para desnaturalizar la DNA double-stranded. La desnaturalización en un ambiente alcalino preve el atascamiento mejorado negativamente - DNA cargada a a positivamente - de la membrana cargada, la separa en los solos hilos de la DNA para el hibridación posterior a la punta de prueba (véase abajo), y destruye cualquier ARN residual que pueda todavía estar presente en la DNA.
AUDIO: ¡Escuche una explicación meridional detallada de la mancha blanca /negra! Cortesía: Instituto de investigación humano nacional del genoma.
Según lo mencionado, la mancha blanca /negra meridional es una técnica usada para identificar y para localizar las secuencias de la DNA que son complementarias a otro pedazo de DNA llamado una punta de prueba.
La separación en un gel electroforético de las secuencias o de los fragmentos de la DNA genomic o complementaria, digeridos parcialmente por los endonucleases, los fragmentos después “se borra” sobre una membrana y se permite cruzar por hibridación con un específico, etiquetado punta de prueba para detectar qué vendas contienen el fragmento o el gene del interés. La mancha blanca /negra meridional es determinado útil en la detección de los cambios de gene/de las cancelacínes grandes y de las extensiones grandes de la repetición del trinucleotide.
Una mancha blanca /negra meridional es un método usado rutinario en biología molecular para controlar para saber si hay la presencia de una secuencia de la DNA en una muestra de la DNA. El borrar meridional combina la electroforesis del gel de la agarosa para la separación de talla de DNA con métodos para transferir la DNA talla-separada a una membrana del filtro para el hibridación de la punta de prueba. Otros métodos que borraban (es decir, mancha blanca /negra occidental, mancha blanca /negra norteña, mancha blanca /negra al sudoeste) que emplea principios similares, solamente usar el ARN o la proteína, se han nombrado más adelante en referencia al nombre meridional. Pues la técnica epónimo fue nombrada, la mancha blanca /negra meridional debe ser capitalizada, mientras que no deben las manchas blancas /negras norteñas y occidentales.
También se utiliza para determinar el peso molecular de un fragmento de la restricción y para medir cantidades relativas en diversas muestras.
Las manchas blancas /negras son técnicas para transferir las proteínas de la DNA y del ARN sobre un portador así que pueden ser separadas, y siguen a menudo el uso de una electroforesis del gel. La mancha blanca /negra meridional se utiliza para transferir la DNA.
El hibridación de la punta de prueba a un fragmento específico de la DNA en la membrana del filtro indica que este fragmento contiene la secuencia de la DNA que es complementaria a la punta de prueba.
Las manchas blancas /negras meridionales se utilizan en varias áreas principales incluyendo descubrimiento y el asociar del gene, los estudios de la evolución y del desarrollo, los diagnósticos y medecina legal.
Bajo condiciones óptimas, el borrar meridional detecta la paginación del ~ 0.1 de la DNA del interés
Para hacer 1 litro de almacenador intermediario de 20X SSC, agregue el siguiente:
¡Para los problemas y borrar meridional de la localización de averías, fije una nueva cuerda de rosca para discutirla en el foro el borrar meridional!
Guía de la reproducción de la DNA
Electroforesis del gel de la DNA
¡Digestión de la enzima de la restricción - todos lo que usted necesita saber!
Protocolo del aislamiento de la DNA de Genomic
Aislamiento de la DNA de Baceteria
Resultados en la infección temprana de la TB Nueva evidencia genética de los primeros americanos Riesgo de cáncer reducido de Colorectral con terapia de la hormona Conexión y riesgo del trauma de la niñez para el síndrome crónico de la fatiga El gene bivalente hace la parte en cánceres de pecho con pronóstico pobre Penetración en cáncer agresivo de la niñez Nuevas etiquetas de plástico genéticas para la colitis ulcerosa Modelo nuevo del ratón de Glioblastoma Nueva manera de fundir las células Continuación del crecimiento de la acuaculturaPara más haga clic aquí: Noticias de la ciencia
