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El phosphatase alcalino o la SAVIA del camarón, es una enzima que cataliza el dephosphorylation de 5’ fosfatos de extremos dephosphorylating del RNA o de la DNA del ácido nucleic.
¡Observe que los productos de PCR y también las cartillas no tienen phosphatases en sus extremos libres, y por lo tanto necesite ser phosphorylated antes de la reproducción si usted va a utilizar un vector de-de-phosphorylated!
La SAVIA es temperatura inestable es por lo tanto usted puede desactivar fácilmente esta enzima (comparada al CIP!). La SAVIA se desactiva con la incubación del baño de agua 65°C por 15 minutos.
Usted no consigue virtualmente ninguna reacción. La SAVIA requiere por lo menos el mgCl2 del 10mM (pero la actividad enzimática óptima del phosphatase alcalino del camarón está en el mgCl2 de los 20-25mM) y trabaja bien en pH 8.0.
Al pmol del dephosphorylate 1 de los extremos de la DNA (2.5 ug del plasmid de 3 KB), porque a 1hr en 37°C que usted necesita:
0.1 unidad de SAVIA para las proyecciones 5', 0.2 unidad
para embotado y 0.5 unidad para el excedente 3' cuelga.
La enzima viene 1 unidad por la UL, así ser seguro usted puede
utilizar las unidades approx.0.5 para 2 ug.
EXTREMIDADES: ¡La enzima de la SAVIA se puede agregar directamente al resumen de la restricción! Así el procedimiento entero incluyendo la digestión de la enzima de la restricción, el dephosphorylation, la inactivación enzimática, la ligadura o 5’ extremo-etiquetando se puede realizar en un solo tubo apenas agregando los reactivo apropiados. ¡Esto permitirá que usted salve tiempo y que sea eficiente!
¡Discuta y las preguntas del poste sobre él en el foro del phosphatase alcalino del camarón y de la reproducción de la DNA !
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