¡Recepción a la estación molecular!

Usted tiene que colocarse antes de que usted pueda fijar en nuestros foros o utilizar nuestras características avanzadas. ¡Registro Ahora! ¡Su libre y rápido!

¿Colocado ya? Conexión ahora abajo.

Nombre Del Utilizador:

Palabra de paso:

¿Recuérdeme?

¿Colocado ya y se olvidó de su palabra de paso? Tecleo abajo para recuperarla.

Recupere La Palabra de paso Perdida

¡Ahora ensamble - está rápida y libre!

¡La estación molecular es la red más grande de investigadores, de científicos y de amantes de la ciencia dondequiera!

Postes Recientes Del Foro

 

Protocolos de la DNA

Enciclopedia de la DNA

DNA Bioinformatics

Foro de la DNA

DNA Blog

Noticias de la DNA

Libros de la DNA

 

Protocolo Del Aislamiento de la DNA De Genomic

Seleccionar un método de la purificación de la DNA de Genomic

La meta del aislamiento genomic de la DNA depende de lo que las aplicaciones de la DNA después del aislamiento. La pureza, la fuente, la cantidad y la calidad de la DNA son todas las ediciones que necesitan ser tratadas antes de la extracción genomic de la DNA. Un ordenador principal entero de diversos métodos, las tecnologías y los kits están disponibles ahora para los investigadores para aislar la DNA genomic de las células.

• Cantidad de DNA necesitada
• Peso molecular y talla de la DNA
• Pureza de la DNA requerida
• Aplicaciones enes sentido descendiente de la DNA
• Tiempo disponible
• Facilidad de la técnica o del método de la extracción de la DNA
• Costo o dinero disponible

Los métodos específicos de cosecha propia o del laboratorio de la DNA de la extracción para los laboratorios que los han desarrollado y utilizan a menudo absolutamente bien regularmente estos protocolos.

Observe sin embargo la estandardización de la carencia de estos métodos. También la producción de la DNA y la calidad de la DNA no son siempre reproductivas a partir de una persona al siguiente.

Fondo en el aislamiento y la purificación de la DNA de Genomic

Generalmente, todos los métodos implican la interrupción y el lysis de células. Esto es seguida a veces por el retiro del RNA (por RNAses, la sal u otros métodos). Eligiendo incluyendo qué método dependerá utilizar de muchos factores de la selección:

La DNA es aislada de las proteínas con varios métodos incluyendo la digestión de proteínas con el proteinase K. Proteins de la enzima es quitada posteriormente salazón, la extracción orgánica, o atando de la DNA a una ayuda solid-phase (tal como una tecnología de la columna o de la silicona del intercambio aniónico).

La DNA finalmente es recuperada por la precipitación del etanol o la precipitación del isopropanol.

En general, la separación de la DNA de las células y los componentes celulares se pueden dividir en cuatro etapas:

1. Interrupción de la célula
2. Lysis de la célula
3. Retiro de proteínas y de contaminantes
4. Recuperación de la DNA

En algunos protocolos genomic del aislamiento de la DNA, se combinan las etapas 1 y 2.

Los materiales necesitaron para el método de la extracción de la DNA de Genomic

Almacenador intermediario del lysis para la receta de la DNA de Genomic:

50 milímetros Tris-HCl, pH 8.0
EDTA de los 50mM
el 1% SDS
NaCl del 10mM

Método de la purificación de la DNA de Genomic de muestras del tejido fino

1. Seleccione la muestra del tejido fino para utilizar. Cerciórese de que la muestra esté preparada y que guardada correctamente en el hielo. Si la muestra no es utilizada inmediatamente para la extracción de la DNA, entonces las muestras se deben salvar correctamente en el congelador de -20°C para más a largo plazo o 4°C para el uso a corto plazo (pocas horas).
2. Corte el tejido fino en pedazos más pequeños. Para el hígado o el otro tejido fino suave, no se preocupe de hacer pedazos finos.
3. Agregue el tejido fino a un mortero prerefrigerado (del hielo seco), agregue inmediatamente el n2 del nitrógeno líquido.
4. Comience a moler el tejido fino en polvo fino. Agregue a más Liq. N2 según lo necesitado. Transfiera el polvo frío al tubo de 30 ml, licencia destapada así que el n2 puede evaporarse.
5. Agregue 9 ml de almacenador intermediario por-calentado del lysis (5°C) y suspenda de nuevo suavemente el polvo.
6. Agregue UL 100 de 10mg/ml del proteinase K, (es decir, 100 ug en la solución). Incube 55°C 1-18 horas. Mézclese suavemente periódicamente. Agregue UL 100 del proteinase K después de las primeras 2 horas, grado óptimo: 3 horas que agregan el proteinase K en 1.5 horas.
7. Muestra del convite muy suavemente. Agregue 1 ml de los 3M Na0Ac (pH 4.0), 10 ml del fenol caliente (55°C), mézclese suavemente pero throughly por 5-10 minutos.
8. Centrifugue las muestras por 15 minutos.
9. Relance la extracción caliente del fenol.
10. Extracto con el fenol igual del volumen (10ml): Cia (pieza Cia de 1 porción phenol:1: Cia = 23 porciones de chloroform:1 de alcohol isoamílico de la pieza)
11. Extracto con la extracción igual del volumen (10ml) Cia
12. La fase superior debe estar relativamente clara, si contiene golpes blancos grandes, o es muy lechosa, (i) incuba en 68°C 15 min., y el extracto del re-fenol, (ii) comienzo otra vez, pero incuba más de largo con P-K.
13. Fase superior de la transferencia al tubo nuevo. Agregue 2 volúmenes de etanol frío y mézclese suavemente (sal: Na0Ac está ya en la solución). Con un gancho y un pasteur sellado mida con una pipeta el carrete fuera de la DNA. Limpie apagado exceso del etanol en la cara de los tubos. Suspenda de nuevo en 2-5 mls de TE. Cerciórese de que la DNA esté disuelta totalmente (licencia en la coctelera apacible.)
14. Agregue la mezcla del rNase (100 ug del rNase A, 10U de RNaseT1). Incube 30 37°C mínimos. ** usted podría agregar el rNase antes del proteinase K, incuba en 37°C para 1 hora y después comienza la digestión del proteinase. Usted podría entonces saltar el paso de progresión 15 -.
15. Agregue 100 ug del proteinase K, incubae 37°C 30 minutos.
16. Agregue 1/10 vol. los 3M Na0Ac, extracto del fenol una vez, extracto de Phenol:CIA dos veces, extracto de la Cia una vez.
17. Agregue 2.5 volúmenes de EtOH, ponga en -20°C 30 minutos. Centrifugue 20 minutos.
18. Lávese bien con el 70%, quite todo el EtOH. Si usted se seca, no el excedente SECO.
19. Suspenda de nuevo cuidadosamente, lentamente in1-2mls TE (almacenador intermediario del Tris-tris-EDTA). (1x o 0.1x).

Otros protocolos y métodos de la DNA

Guía De la Reproducción de la DNA

Electrophoresis Del Gel de la DNA

¡Digestión de la enzima de la restricción - todos lo que usted necesita saber!

Protocolo Del Aislamiento de la DNA De Genomic

Aislamiento de la DNA De Baceteria

Transformación de la DNA - contiene la historia de la DNA

Encuentre otros protocolos en nuestro directorio externo del recurso de los protocolos de la DNA o vea nuestros protocolos de la DNA.

Relacionado:

Protocolos de la DNA Microarray

Protocolos de PCR

DNA Bioinformatics

DNA Bioinformatics De la Visita.

Noticias DNA-Relacionadas

Noticias de la DNA