Fragmentos de la DNA De la Purificación Del Agarose

Purificación del fragmento de la DNA del protocolo del agarose

Ejecute la DNA en el gel del agarose del "derretimiento bajo".
Para los fragmentos de la DNA 600bp a 5kb el use1%; Para el agarose del uso 300- 700bp el 2%. Si usted necesita ejecutarse fragmentos más pequeños utilizan el 2% "Nusieve" el + 1% "bajo derriten".
Después de que las vendas se hayan separado, visualice la venda en un rectángulo UV (reduzca al mínimo la exposición de la DNA a UV)
Corte la venda hacia fuera (no rasguñe el filtro UV en el rectángulo ligero!).
Agregue UL 100 del almacenador intermediario de T.E. (el 10mM Tris-HCl pH EDTA de 7.6, del 1mM) a la venda, agolpamiento, calor a 65oC para aproximadamente. 5 minutos, agregan 200l del fenol, vórtice, calor 65°C por 3 min., vórtice.
Microfuge 5 minutos, quita supernant
Agregue 100 l de T.E. al fenol, vórtice, calor 65°C 3 min. de vórtice
Microfuge, supernants de la piscina.
Extracto del cloroformo (aproximadamente 400 UL), microfuge 3 minutos.
Precipitado de EtOH, agregando 1/10 vol. los 3M Na0Ac, 2.5 vol.. EtOH.
-20°C 1-2+hrs; la vuelta 30 min., se seca abajo, trae para arriba en vol. conveniente 0.1X T.E.

Fije el transporte-iluminador a la longitud de onda UV larga (o al de baja potencia). Esto es una gran manera de reducir al mínimo la cantidad de época y de energía de la exposición UV de la DNA. Esto reducirá al mínimo la mutagénesis UV de la DNA.
Ajuste apagado tanto de agarose de la venda como sea posible sin quitar la DNA. Esto ayuda en la contaminación de reducción al mínimo del agarose que realzará la purificación de la DNA.
Si usted está consiguiendo los kits comerciales del uso de los problemas tales como spin-columns.There son algunos kits excelentes para extraer la DNA si usted puede permitirse lo. Éstos incluyen kits de Qiagen, de la sigma, y de otras compañías.