Fragmentos de la DNA de la purificación de la agarosa

Purificación del fragmento de la DNA del protocolo de la agarosa

Funcione con la DNA en el gel de la agarosa del “derretimiento bajo”.
Para los fragmentos de la DNA 600bp a 5kb el use1%; Para 300 - 700bp agarosa del uso el 2%. Si usted necesita ejecutarse fragmentos más pequeños utilizan el 2% “Nusieve” el + 1% “bajo derriten”.
Después de que las vendas se hayan separado, visualice la venda en un rectángulo ULTRAVIOLETA (reduzca al mínimo la exposición de la DNA a ULTRAVIOLETA)
Recorte la venda (no rasguñe el filtro ULTRAVIOLETA en el rectángulo ligero!).
Agregue UL 100 del almacenador intermediario del T.E. (Tris-Ácido clorhídrico pH 10mM EDTA de 7.6, 1mM) a la venda, agolpamiento, calor a 65oC para el minuto aproximadamente 5, agregue 200l del fenol, vórtice, calor 65°C por 3 Min., vórtice.
Microfuge 5 minutos, quita supernant
Agregue 100 l del T.E. al fenol, vórtice, calor 65°C 3 Min. de vórtice
Microfuge, supernants de la piscina.
Extracto del cloroformo (aproximadamente 400 UL), microfuge 3 Min.
Precipitado de EtOH, agregando 1/10 vol. 3M Na0Ac, 2.5 vol. EtOH.
-20°C 1-2+hrs; la vuelta 30 Min., se seca abajo, trae para arriba en el T.e. conveniente del vol. 0.1X.

Fije el transporte-iluminador a la longitud de onda ULTRAVIOLETA larga (o al de baja potencia). Esto es una gran manera de reducir al mínimo la cantidad de época y de energía de la exposición ULTRAVIOLETA de la DNA. Esto reducirá al mínimo la mutagénesis ULTRAVIOLETA de la DNA.
Corte tanto de agarosa de la venda como sea posible sin la eliminación de la DNA. Esto ayuda en la contaminación de reducción al mínimo de la agarosa que realzará la purificación de la DNA.
Si usted está consiguiendo los problemas utilizan kits comerciales tales como hacer girar-columnas. Hay algunos kits excelentes para extraer la DNA si usted puede permitirse los. Éstos incluyen kits de Qiagen, de la sigma, y de otras compañías.