biblioteca del cDNA

Aprenda sobre bibliotecas del cDNA.

bibliotecas del cDNA

las bibliotecas del cDNA o las bibliotecas complemantary de la DNA son una colección de fragmentos reproducidos del cDNA. las bibliotecas del cDNA son herramientas de gran alcance y útiles pues pueden contener toda la información de la codificación (el código genético que produce las proteínas) de una población dada de la célula.

generación de la biblioteca del cDNA

diagrama de las bibliotecas del cDNA de cómo generarlas

cuadro de la síntesis del cDNA

El ARN necesita primero ser aislado de una población de la célula. Varios métodos son de uso general para purificar el ARN, éstos incluyen métodos de columna basados kit del polyA y otros métodos químicos tales como extracción del trizol. Un polivinílico (A) la cola (que consiste en una secuencia que relanza larga de nucleótidos de la adenina) se utiliza en células eucarióticas como sitio de la cartilla para la transcripción reversa. el cDNA se crea del mRNA maduro usando la enzima reversa del transcriptase que genera la DNA complementaria del ARN. El esto también permite el oscurecimiento específico de mRNAs y el no otro RNAs mientras que los mRNAs contienen una cola de poly-A en el ' extremo sus 3. Una vez que se aísla el mRNA, oligo-despegue o las cartillas al azar se puede utilizar con transcriptase reverso para crear modelos del cDNA. Los endonucleases de la restricción y la ligasa de la DNA entonces se utilizan para reproducir las secuencias del cDNA en plásmidos bacterianos.

Después de que se sintetice el cDNA, se reproduce en vectores o plásmidos de la expresión. Estos plásmidos cada un cDNA que contiene se transforman en las células competentes bacterianas (hechas competente por una variedad el producto químico u otros métodos para permitir que tomen el plásmido con el cDNA). Estos plásmidos entonces se amplifican en las bacterias crecientes. Las copias de las bacterias entonces se seleccionan de modo que solamente las bacterias que contienen el plásmido sobrevivan. Esto se hace comúnmente con la selección antibiótico de la resistencia.

Una vez que se seleccionan las bacterias, la acción de las bacterias se crea que pueden ser crecidas y ser ordenadas más adelante para compilar una biblioteca del cDNA.