Protocolo bacteriano del aislamiento de la DNA de Genomic

Aislamiento de la DNA de Genomic del protocolo de Bateria

Método de la preparación para el aislamiento de la DNA geneomic de bacterias usando la purificación de tritón

• Crezca a varias colonias - culturas grandes de scale-15ml.
• Coseche las células en un solo tubo del eppendorf o un tubo disponible de 15 ml dependiendo del volumen.
• Suspenda de nuevo la pelotilla con el almacenador intermediario de 300ul STET (900ul).
• Después de suspender de nuevo agregue la mezcla de la ARNasa 30ul/de la lisozima (100ul).
• Hierva la pelotilla para 1 minuto 15 segundos (un minuto 45 segundos).
• Haga girar en el microfuge por 15 minutos.
• Tome el extracto del sobrenadante y del fenol con el fenol saturado STET- 150ul (500ul).
• Haga girar y tome el sobrenadante. Agregue el cloruro del litio de 1/10 volumen los 4M (esterilizado). Deje para sentarse en el hielo por 5-10 minutos.
• Haga girar y tome el sobrenadante. Agregue el isopropanol igual del volumen. RT por 5 minutos.
• Vuelta. No hay pelotilla visible. No se atierra, la DNA se pega para echar a un lado hasta el final encima del tubo.
• Importante: Colada con etanol del 80% (el 95% harán la residual Tritón precipitarse)
• Suspenda de nuevo la pelotilla en 50-200ul.
• Almacén Tris-Ácido clorhídrico pH8.0 de la ARNasa de la lisozima 1mg/ml de la mezcla 10mg/ml de la ARNasa de la lisozima (grado barato del uso (BMB) algo que la ARNasa A, que es demasiado costosa) 50mM en -20oC en pequeñas partes alícuotas. No recongele después de deshelar.
• El EDTA pH 8.0 de Tris-Ácido clorhídrico de la sucrosa el 5% Tritón X-100 50mM de STET el 8% (pH8.0) 50mM estiriliza con filtro por filtración. Almacén en 4oC