Flujo Cytometry

El flujo cytometry (también llamado FCM) es un método de la biología molecular que es de uso general contar, las células rápidamente examina, analiza y de la clase o aún las partículas microscópicas suspendidas en líquido. Los cytometers del flujo permiten un análisis multiparametric simultáneo de las características físicas y/o químicas de las células o de las partículas que fluyen más allá de un aparato óptico y/o electrónico de la detección, en una secuencia flúida usando un haz de luz láser.

El término cytometry deriva de las palabras griegas para la medida (metry), y de la célula (cyto) que da a “flujo cytometry” la medida de células mientras que fluyen más allá de un detector.

El flujo o la clasificación de la célula es otra capacidad funcional del flujo cytometry permitiendo la separación de tipos de células con el uso de fuerzas eléctricas o mecánicas de recoger las poblaciones de células con una o más característica física o del producto químico fijada por el utilizador.

El flujo cytometry es de uso general en el análisis del ciclo celular, detección y análisis del apoptosis o necrosis, clasificación de la célula, la detección superficial del antígeno de la célula para la inmunología, y análisis de la célula de vástago.

Medidas de Cytometry del flujo

El flujo Cytomers se puede utilizar para medir los parámetros siguientes, dependiendo de la máquina, fluoróforo y de otra:

• volumen de células
• características morfológicas de células
• antígenos superficiales de la célula (racimo de etiquetas de plástico (CD) de la diferenciación)
• detección de pigmentos de la célula (es decir clorofila o ficoeritrina)
• apoptosis (cuantificación, medida de la degradación de la DNA, potencial mitocondrial de la membrana, cambios de la permeabilidad, actividad del caspase)
• análisis de la viabilidad de la célula
• evalúe la DNA (e.g en análisis del ciclo celular, cinética de la célula, la proliferación)
• evalúe el ARN
• análisis y clasificación cromosómicos (para la construcción de la biblioteca de la DNA o la pintura del cromosoma)
• evalúe para la expresión y la localización de la proteína
• productos transgénicos in vivo, determinado la proteína fluorescente verde o las proteínas fluorescentes relacionadas
• actividad enzimática
• y muchos otros parámetros

¿Cómo trabajo de Cytometers del flujo?

Un haz de luz (luz generalmente laser) de una sola longitud de onda se dirige sobre una secuencia hidrodinámico enfocada del líquido. Un número de detectores se dirigen la punta donde la secuencia pasa a través del haz luminoso; uno conforme al haz luminoso (dispersión frontal o FSC) y vario perpendicular a él (dispersión lateral (SSC) y uno o más detectores fluorescentes). Cada partícula suspendida que pasa a través de la viga dispersa la luz de cierta manera, y los productos químicos fluorescentes encontrados en la partícula o asociados a la partícula pueden ser emocionados en la emisión de la luz en una frecuencia más baja que la fuente de luz. Esta combinación de luz dispersada y fluorescente es cogida por los detectores, y analizando fluctuaciones en brillo en cada detector (uno para cada pico fluorescente de la emisión) es entonces posible extrapolar varios tipos de información sobre la estructura física y química de cada partícula individual. El FSC correlaciona con el volumen de la célula y SSC depende de la complejidad interna de la partícula (es decir dimensión de una variable del núcleo, de la cantidad y del tipo de gránulos citoplásmicos o de la aspereza de la membrana). Algunos fluyen los cytometers en el mercado han eliminado la necesidad de la fluorescencia y utilizan solamente la dispersión ligera para la medida. Otro fluye las imágenes de la forma de los cytometers de la fluorescencia de cada célula, de la luz dispersada, y de la luz transmitida.