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Creando una subcultura Las Células - Cultura De Célula

Cultura De Célula

Protocolo Del Subcultivo De la Célula

CREAR UNA SUBCULTURA LAS CÉLULAS

 

Consiga los media 4C de DMEM; Trypsin-20C; BSA-20C;

Ponga en 36mL de DMEM en el plástico cónico del tubo

Agregue 4mL de los media de BSA a 36mL DMEM;

Consiga la jeringuilla y el filtro;

Aspire encima de media con la jeringuilla.  Agregue el filtro. 

Elimine los media a través del filtro en la jeringuilla.

Relance dos veces para conseguir todo el volumen. 

Ponga en el tubo plástico nuevo cónico. 

Quite los viejos media vaciando en el cubilete; NO UTILICE EL ASPIRADOR (consiga la contaminación!!)

Agregue el typsin 3mL a la cultura.  Trypsin con las células del tirón del envase de la cultura.

Ponga el envase en la incubadora.  Espere 2 minutos; Tome hacia fuera;  mire en el microscopio. 

Intente conseguir menos grupos.  Células más individuales.

Quite la mayoría de trypsin vaciando en el cubilete.

Ponga  nuevamente dentro de la incubadora. Controle con frecuencia.

Dé una palmada al envase en caras para controlar el fondo para saber si hay menos grupos; mire en el microscopio.

Cuando vea muchas células individuales el flotar adelante; ¡Grande!

Agregue los media a un envase más grande; dilusión 1:5/ de 1:3 (3-5 envases más grandes).

Agregue 10mL a (el envase de T75)large, 5mL a (envase de T25)small.

Aspire fuera de la mayoría (5mL de células de T25). Agregue a T75.

Deje algunas células en envase pequeño.  Agregue los media al envase pequeño.  Llegue el microscopio para las células;  Incube en la incubadora 37C. 

 

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