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Electrophoresis Del Gel Del Agarose

Este sitio del electrophoresis del gel del agarose es su portal para todas las cosas relacionadas con la técnica del electrophoresis del gel del agarose y su análisis. ¡Proveemos de usted toda la información de fondo, protocolos, pasos de progresión del análisis, visualización y la información de localización de averías para los geles corrientes del agarose para la DNA, el RNA o la proteína para hacer el último experto en electrophoresis del gel del agarose!

Índice del electrophoresis del gel del agarose

• ¿Cuál es electrophoresis del gel del agarose?
• Fondo
• Aplicaciones
• Materiales
• Almacenadores intermediarios
• Migración
• Límites de resolución de los geles del agarose
  
• Preparación
• Protocolo
• Visualización
• Análisis Del Gel
• Electrophoresis Videos Del Gel Del Agarose
• Otros Protocolos Del Electrophoresis Del Gel Del Agarose
• Geles De Localización de averías Del Agarose
• Asuntos de la discusión para el electrophoresis del gel del agarose
• Consiga la ayuda en su problema del gel del agarose

¿Cuál es electrophoresis del gel del agarose?

El electrophoresis del gel del agarose es un método usado en bioquímica y biología molecular para separar la DNA, o las moléculas del RNA por las proteínas de la talla sin embargo se pueden también separar en los geles del agarose. La separación de las moléculas es alcanzada moviendo las moléculas negativamente cargadas del ácido nucleic a través de una matriz del agarose en un campo eléctrico (véase el electrophoresis). Moléculas más cortas se mueven más rápidamente y emigran más lejos que más de largo unas.

 

 

Aplicaciones del electrophoresis del gel del agarose

El electrophoresis del gel del agarose se utiliza principalmente en análisis o la separación de las moléculas de la DNA y del RNA (aunque las proteínas se pueden también separar en los geles del agarose), no obstante la separación también permite la purificación de tallas específicas de DNAs después de la digestión de la enzima de la restricción. Esto se utiliza generalmente en reproducirse para obtener los plasmids del corte, en los cuales el electrophoresis del gel del agarose separa vectores del corte los sin cortar.

Así los geles del agarose permiten:

1. La separación de la enzima de la restricción digirió la DNA incluyendo la DNA genomic, antes de la transferencia meridional de la mancha blanca /negra. También se utiliza a menudo para separar el RNA antes de la transferencia norteña.
2. Análisis de los productos de PCR después de la reacción en cadena de la polimerasa a evaluar para la amplificación de la DNA de la blanco.
3. Tiene en cuenta la valoración de la talla de las moléculas de la DNA usando una etiqueta de plástico o una escala de la DNA que contenga los fragmentos de la DNA de varias tallas sabidas.
4. Permite la valoración áspera de la cantidad y de la calidad de la DNA.
5. Se evalúa la cantidad usando la escala de la DNA de la lambda que contiene cantidades específicas de DNA en diversas vendas.
6. La calidad de la DNA es evaluada observando la ausencia de rayarse o de fragmentos (o de contaminar vendas de la DNA).
7. Otras técnicas confían en el electrophoresis del gel del agarose para la separación de la DNA incluyendo huella dactilar de la DNA.

Las ventajas y las desventajas del agarose se gelifican electrophoresis

Las ventajas son que el gel está vertido fácilmente, no desnaturalizan las muestras. Las muestras pueden también ser recuperadas.

Las desventajas son que los geles pueden derretir durante electrophoresis, el almacenador intermediario pueden agotarse, y diversas formas de material genético pueden ejecutarse en formas imprevisibles.

Migración en geles del agarose

El factor más importante es la longitud de la molécula de la DNA, moléculas más pequeñas viaja más lejos. Pero la conformación de la molécula de la DNA es también un factor. Para evitar las moléculas lineares de este problema se separan generalmente, generalmente los fragmentos de la DNA de un resumen de la restricción, los productos lineares de la DNA PCR, o RNAs.

El aumento de la concentración del agarose de un gel reduce la velocidad de la migración y permite la separación de moléculas más pequeñas de la DNA. Cuanto más alto es el voltaje, más rápidamente la DNA emigra. Pero el voltaje es limitado por el hecho de que calienta y hace en última instancia el gel derretir. Los altos voltajes también disminuyen la resolución (sobre cerca de 5 a 8 V/cm).[citation necesitados ]

Conformations de un plasmid de la DNA que no se ha cortado con una enzima de la restricción se moverá con diversas velocidades (más lentas a lo más rápidamente posible): marcado o abra la circular, linearised, o supercoiled el plasmid.

Límites de resolución de los geles del agarose

Los geles del agarose se pueden utilizar para la separación de los fragmentos de la DNA que se extienden a partir de 50 pares bajos a varios megabases (millones de bases) por el electrophoresis. Más comunmente sin embargo, el electrophoresis del gel del agarose se utiliza para separar la DNA de PCR y la reproducción en el rango de 100bp alrededor a los tiempos de pasada 15kb. es cerca de 30 minutos - 1 hora de largo.

DNAs o RNAs pequeño (más pequeño que 100bp) es separado mejor por los geles de polyacrylamide, no obstante 2-3% geles del agarose pueden ser adecuados separar los fragmentos uniformes 50bp de ácidos nucleic mucho más grandes.

Recientemente sin embargo, se ha mostrado que hasta una diferencia baja de la talla del par se podría resolver en un gel del agarose del 3% con un media extremadamente bajo de la conductividad tal como 1 milímetro de borato del litio (Brody JR, Calhoun ES, Gallmeier E, Creavalle TD, SE de Núcleo de condensación (2004). Electrophoresis de alta resolución ultrarrápido del agarose de la DNA y del RNA usando media conductores bajos-molarity. Biotechniques. 37:598-602.).

 

Vector del porcentaje del gel del agarose y del rango eficiente de la separación:

Como usted puede ver que los geles bajos del agarose del porcentaje son los mejores para la separación de las moléculas grandes de la DNA, mientras que es alto los geles del porcentaje son los mejores para un DNAs más pequeño.

 

Purificación de la DNA con la extracción del gel del agarose

Según lo mencionado antes, el electrophoresis del gel del agarose permite la separación y así la purificación de la DNA para la reproducción. Sin embargo, esto requiere generalmente agarose bajo del derretimiento de la pureza elevada si se va la DNA a ser extraída del gel.

Almacenadores intermediarios Del Electrophoresis Del Gel Del Agarose

Dependiendo de la talla de la DNA electrophoresed y la aplicación, diversos almacenadores intermediarios se puede utilizar para el electrophoresis del agarose. El almacenador intermediario de TAE (o el EDTA del acetato de Tris) es el almacenador intermediario usado más común del electrophoresis del gel del agarose. TAE tiene la capacidad tapón más baja de los almacenadores intermediarios, no obstante TAE ofrece la mejor resolución para una DNA más grande. Sin embargo, TAE requiere una tensión más baja y más tiempo.

Sin embargo el almacenador intermediario de TBE (Tris/Borate/EDTA) se utiliza a menudo para fragmentos más pequeños de la DNA (IE menos que 500bp).

 

El borato de sodio o el almacenador intermediario del SB es un nuevo almacenador intermediario, no obstante es ineficaz para los fragmentos de resolución más en gran parte de 5 KB. Sin embargo el SB tiene ventajas en su conductividad baja, permitiendo voltajes más altos (hasta 35 V/cm). Esto podía dar un plazo de una duración de análisis más corta para el electrophoresis rutinario.