Electroforesis del gel de la agarosa

Este sitio de la electroforesis del gel de la agarosa es su portal para todas las cosas relacionadas con la técnica de la electroforesis del gel de la agarosa y su análisis. ¡Proveemos de usted toda la información de fondo, protocolos, pasos de progresión del análisis, visualización e información de localización de averías para los geles corrientes de la agarosa para que la DNA, el ARN o la proteína sientan bien al último experto en electroforesis del gel de la agarosa!

Índice de la electroforesis del gel de la agarosa

• ¿Cuál es electroforesis del gel de la agarosa?
• Fondo
• Aplicaciones
• Materiales
• Almacenadores intermediarios
• Migración
• Límites de resolución de geles de la agarosa
  
• Preparación
• Protocolo
• Visualización
• Análisis del gel
• Vídeos de la electroforesis del gel de la agarosa
• Otros protocolos de la electroforesis del gel de la agarosa
• Geles de la agarosa de la localización de averías
• Asuntos de la discusión para la electroforesis del gel de la agarosa
• Consiga la ayuda en su problema del gel de la agarosa

¿Cuál es electroforesis del gel de la agarosa?

La electroforesis del gel de la agarosa es un método usado en bioquímica y biología molecular para separar la DNA, o las moléculas del ARN por las proteínas de la talla sin embargo se pueden también separar en los geles de la agarosa. La separación de las moléculas es alcanzada moviendo negativamente - las moléculas cargadas del ácido nucléico a través de una matriz de la agarosa en un campo eléctrico (véase la electroforesis). Moléculas más cortas se mueven más rápidamente y emigran más lejos que más de largo unos.

Aplicaciones de la electroforesis del gel de la agarosa

Migración en geles de la agarosa

Límites de resolución de geles de la agarosa

Los geles de la agarosa se pueden utilizar para la separación de fragmentos de la DNA que se extienden a partir de 50 pares bajos a varios megabases (millones de bases) por la electroforesis. Más comunmente sin embargo, la electroforesis del gel de la agarosa se utiliza para separar la DNA de la polimerización en cadena y de la reproducción en el rango de 100bp alrededor a 15kb. Los tiempos de pasada son cerca de 30 minutos - 1 hora de largo.

Pequeño DNAs o RNAs (más pequeño que 100bp) es separado mejor por los geles de poliacrilamida, no obstante 2-3% geles de la agarosa pueden ser adecuados separar incluso los fragmentos 50bp de ácidos nucléicos mucho más grandes.

Recientemente sin embargo, se ha mostrado que hasta una diferencia baja de la talla de los pares podría ser resolved en un gel de la agarosa del 3% con extremadamente - media bajo de la conductividad tal como 1 milímetro de borato del litio (JR de Brody, Calhoun ES, Gallmeier E, Creavalle SE de TD, Núcleo de condensación (2004). Electroforesis de alta resolución ultrarrápida de la agarosa de la DNA y del ARN usando media conductores bajos-molarity. Biotechniques. 37:598 - 602.).

Vector del porcentaje del gel de la agarosa y del rango eficiente de la separación:

Como usted puede ver que los geles bajos de la agarosa del porcentaje son los mejores para la separación de moléculas grandes de la DNA, mientras que es alto los geles del porcentaje son los mejores para un DNAs más pequeño.

Purificación de la DNA con la extracción del gel de la agarosa

Según lo mencionado antes, la electroforesis del gel de la agarosa permite la separación y así la purificación de la DNA para la reproducción. Sin embargo, esto requiere generalmente agarosa baja del derretimiento de la pureza elevada si se va la DNA a ser extraída del gel.

Almacenadores intermediarios de la electroforesis del gel de la agarosa

Dependiendo de la talla de la DNA electrophoresed y la aplicación, diversos almacenadores intermediarios se puede utilizar para la electroforesis de la agarosa. El almacenador intermediario de TAE (o el EDTA del acetato de Tris) es el almacenador intermediario usado más común de la electroforesis del gel de la agarosa. TAE tiene la capacidad tapón más baja de los almacenadores intermediarios, no obstante TAE ofrece la mejor resolución para una DNA más grande. Sin embargo, TAE requiere un de tensión inferior y más tiempo.

Sin embargo el almacenador intermediario de TBE (Tris/Borate/EDTA) es de uso frecuente para fragmentos más pequeños de la DNA (IE menos que 500bp).

El borato de sodio o el almacenador intermediario del SB es un nuevo almacenador intermediario, no obstante es ineficaz para el kb más grande de resolución de 5 de los fragmentos. Sin embargo el SB tiene ventajas en su conductividad baja, permitiendo voltajes más altos (hasta 35 V/cm). Esto podía dar un plazo de una duración de análisis más corta para la electroforesis rutinaria.