siRNA Transfection

siRNA Transfection πρωτόκολλο

 siRNA transfection πρωτόκολλο: Transfect 6 καλά πιάτα

1. εφαρμόστε πρώτα siRNA την επεξεργασία όταν τα κύτταρα είναι 60% συμβάλλοντα (confluency μέτρου με το βολτόμετρο) καλύψτε τα κύτταρα 1.5x10^6 την Παρασκευή, transfect την Τετάρτη. Για κάθε έναν καλά:

1. Αραιώστε 2.5 ug siRNA (20uM είναι περίπου 0.26ug/ul. 9.62 ul ανά καλά ενός καλά πιάτου 6) με τα μέσα πολιτισμού σε μια τελική ένταση του ήχου του ul 100. Άκρες σιφωνίων εμποδίων χρήσης. Μπορείτε να κάνετε ένα κύριο μίγμα εάν όλα τα φρεάτια θα είναι με το ίδιο siRNA. Κάνετε αυτό σε έναν αποστειρωμένο αποστειρωμένο πλαστικό σωλήνα.
2. Προσθέστε 12 το ul RNAiFect (Qiagen - ή οποιοδήποτε άλλοδήποτε transfection RNA αντιδραστήριο, βλέπει το πρωτόκολλο του κατασκευαστή) ανά το σωλήνα και μίγμα siRNA mastermix ήπια.
3. Επωάστε για 15 λεπτά στη θερμοκρασία δωματίου για να επιτρέψετε το σύνθετο σχηματισμό μεταξύ του siRNA και των λιπιδίων.
4. Απορροφήστε τα μέσα από τα κύτταρα και προσθέστε τα φρέσκα μέσα 900ul σε κάθε ένα καλά.
5. Προσθέστε siRNA το μίγμα (ul 112 ανά καλά) drop-wise ενώ ήπια στροβιλιμένος πιάτο.

• Εφαρμόστε τη δεύτερη siRNA επεξεργασία 2 ημέρες αργότερα, μετά από τα βήματα που περιγράφονται ανωτέρω. Δεύτερο transfection θα προσθέσει στην έκφραση μείωσης του γονιδίου ενδιαφέροντος.

Άλλα πρωτόκολλα siRNA

Επίσης δείτε το siRNA και τη σελίδα RNAi μας