Υποδοχή στο μοριακό σταθμό!

Πρέπει να καταχωρήσετε προτού να μπορέσετε να ταχυδρομήσετε στα φόρουμ μας ή να χρησιμοποιήσετε τα προηγμένα χαρακτηριστικά γνωρίσματά μας. Κατάλογος τώρα! Ελεύθερος και γρήγορος του!

Ήδη καταχωρημένος; Αδεια εισόδου τώρα κατωτέρω.

Όνομα χρηστών:

Κωδικός πρόσβασης:

Με θυμηθείτε;

Ήδη καταχωρημένος και ξέχασε τον κωδικό πρόσβασής σας; Χτυπήστε κατωτέρω για να το ανακτήσετε.

Ανακτήστε το χαμένο κωδικό πρόσβασης

Ενώστε τώρα - είναι γρήγορο και ελεύθερο!

Ο μοριακός σταθμός είναι το μεγαλύτερο δίκτυο ερευνητών, επιστημόνων και εραστών επιστήμης οπουδήποτε!

Πρόσφατες θέσεις φόρουμ

 

Πρωτεϊνικά πρωτόκολλα

Πρωτεϊνική εγκυκλοπαίδεια

Πρωτεϊνική βιοπληροφορική

Πρωτεϊνικό φόρουμ επιστήμης

Πρωτεϊνικό Blog

Ειδήσεις DNA

 

Πρωτεϊνικό πρωτόκολλο δοκιμής Lowry

Πρωτεϊνικός προσδιορισμός συγκέντρωσης από το πρωτόκολλο δοκιμής Lowry Prtoein

Υλικά

1. Σύνθετος-διαμόρφωση του αντιδραστηρίου: Προετοιμαστείτε αμέσως πριν από τη χρήση με τη μίξη των ακόλουθων λύσεων αποθεμάτων στην αναλογία 100:1:1 (από την ένταση), αντίστοιχα:
            Λύση Α: 2% (w/v) Na2CO3 στο αποσταγμένο νερό.
            Λύση β: 1% (w/v) CuSO4·5H2O στο αποσταγμένο νερό.
            Λύση γ: tartrate καλίου νατρίου 2% (w/v) στο αποσταγμένο νερό.

2. Προετοιμάστε 2 ν NaOH.

3. Αντιδραστήριο φολίνης (εμπορικά διαθέσιμο): Χρήση σε 1 συγκέντρωση ν.

4. Πρότυπα: Χρησιμοποιήστε μια λύση αποθεμάτων της πρότυπης πρωτεϊ'νης (π.χ., μέρος V) λευκωματίνης βοοειδών ορών που περιέχει 2 mg/$l*ml πρωτεϊ'νη στο αποσταγμένο νερό, που καταχωρείται παγωμένος –σε 20°C. Προετοιμάστε τα πρότυπα με να αραιώσει τη λύση αποθεμάτων με το αποσταγμένο νερό ως εξής:

Λύση (΅L)   0     2,5         5      12,5          25     50        125        250      500      αποθεμάτων

Ύδωρ                (΅L)     500      498     495      488      475      450      375      250      0
Πρωτεϊ'νη συμπυκνωμένη.    (΅g/$l*mL) 0          10       20        50        100      200      500      1000    2000

Μέθοδος

1. Έως 0,1 mL του δείγματος ή των προτύπων, προσθέστε 0,1 mL 2 ν NaOH. Υδρολύστε σε 100°C για 10 λ. σε μια ομάδα δεδομένων θέρμανσης ή ένα λουτρό βράζοντας ύδατος.

2. Δροσίστε hydrolysate στη θερμοκρασία δωματίου και προσθέστε 1 mL μικτός πρόσφατα σύνθετος-διαμορφώνοντας το αντιδραστήριο. Αφήστε τη λύση να αντιπροσωπεύσει στη θερμοκρασία δωματίου 10 λ..

3. Προσθέστε 0,1 mL του αντιδραστηρίου φολίνης, χρησιμοποιώντας έναν αναμίκτη δινών, και αφήστε τη στάση μιγμάτων στη θερμοκρασία δωματίου για 30–60 λ. (μην υπερβείτε 60 λ.).

4. Διαβάστε την απορροφητικότητα σε 750 NM εάν η πρωτεϊνική συγκέντρωση ήταν κάτω από 500 ΅g/$l*mL ή σε 550 NM εάν η πρωτεϊνική συγκέντρωση ήταν μεταξύ 100 και 2000 ΅g/$l*mL.

5. Σχεδιάστε μια πρότυπη καμπύλη της απορροφητικότητας ως λειτουργία της αρχικής πρωτεϊνικής συγκέντρωσης και την χρησιμοποιήστε για να καθορίσετε τις άγνωστες πρωτεϊνικές συγκεντρώσεις.

Αναφορές μεθόδου Lowry

Με βάση το πρωτόκολλο από το Jakob H. Waterborg.

Lowry και λοιποί. Θ*ι. Βιολ. Chem. 193: 265-275 (1951)

Σχετικά πρωτεϊνικά άρθρα συγκέντρωσης

Πρωτόκολλο μεθόδου Lowry

Πρωτεϊνική συγκέντρωση

Πρωτεϊνικό πρωτόκολλο συγκέντρωσης

Πρωτεϊνική δοκιμή Lowry

Δοκιμή του Μπράντφορντ

Πρωτόκολλο δοκιμής του Μπράντφορντ

Πρωτεϊνικά άρθρα:

Δυτική "Οικία" λεκέδων

Immunoprecipitation "Οικία"