Υποδοχή στο μοριακό σταθμό!

Πρέπει να καταχωρήσετε προτού να μπορέσετε να ταχυδρομήσετε στα φόρουμ μας ή να χρησιμοποιήσετε τα προηγμένα χαρακτηριστικά γνωρίσματά μας. Κατάλογος τώρα! Ελεύθερος και γρήγορος του!

Ήδη καταχωρημένος; Αδεια εισόδου τώρα κατωτέρω.

Όνομα χρηστών:

Κωδικός πρόσβασης:

Με θυμηθείτε;

Ήδη καταχωρημένος και ξέχασε τον κωδικό πρόσβασής σας; Χτυπήστε κατωτέρω για να το ανακτήσετε.

Ανακτήστε το χαμένο κωδικό πρόσβασης

Ενώστε τώρα - είναι γρήγορο και ελεύθερο!

Ο μοριακός σταθμός είναι το μεγαλύτερο δίκτυο ερευνητών, επιστημόνων και εραστών επιστήμης οπουδήποτε!

Πρόσφατες θέσεις φόρουμ

Υβριδοποίηση μεμβρανών για να καλύψει μια βιβλιοθήκη

Βιβλιοθήκες διαλογής που χρησιμοποιούν την υβριδοποίηση μεμβρανών

Υπό τους όρους της θερμοκρασίας και της ιονικής συγκέντρωσης που βρίσκονται στα κύτταρα, το DNA διατηρείται σε μια διπλή (δύο-προσαραγμένη) δομή από τους δεσμούς υδρογόνου που διαμορφώνουν οι βάσεις Α και τ και οι βάσεις γ και γ σε κάθε σκέλος. Τα ντούμπλεξ DNA μπορούν να μετουσιωθούν στα ενιαία σκέλη με τη θέρμανση τους, συνήθως σε μια αραιή αλατισμένη λύση (π.χ., 0,01 μ NaCl), ή με την αύξηση του pH επάνω από 11. Εάν τη θερμοκρασία χαμηλώνουν και η ιονική συγκέντρωση στη λύση αυξάνεται, ή εάν το pH χαμηλώνουν στη μεταρρύθμιση ζευγαριών βάσεων ουδετερότητας, και ΑΈΡΙΑΣ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΊΑΣ μεταξύ των συμπληρωματικών ενιαίων σκελών.

Αυτή η διαδικασία πηγαίνει από πολλά ονόματα: renaturation, reassociation, υβριδοποίηση, ανόπτηση. Σε ένα μίγμα νουκλεϊνικών οξέων, μόνο τα συμπληρωματικά ενιαία σκέλη (ή σκέλη που περιέχουν τις συμπληρωματικές περιοχές) θα επανενώσουν η έκταση reassociation τους είναι ουσιαστικά απρόσβλητη από την παρουσία noncomplementary σκελών. Τέτοια μοριακή υβριδοποίηση μπορεί να πραγματοποιηθεί μεταξύ δύο συμπληρωματικών σκελών είτε του DNA είτε του RNA, είτε μεταξύ ενός σκέλους RNA και ενός σκέλους DNA. Για να χρησιμοποιήσει τη μοριακή υβριδοποίηση στην ανίχνευση των συγκεκριμένων κλώνων DNA, το ενιαίο προσαραγμένο DNA από τα ανασυνδυαζόμενα μόρια DNA είναι συνδεμένο με μια στερεά υποστήριξη, συνήθως ένα nitrocellulose φίλτρο ή μια αντιμετωπισμένη νάυλον μεμβράνη. Όταν νουκλεϊνικά τα οξέα ένα η λύση που περιέχει single0stranded είναι ξηρά σε μια τέτοια μεμβράνη, τα ενιαία σκέλη γίνονται αμετάκλητα συνδεδεμένα στη στερεά υποστήριξη με έναν τρόπο που αφήνει τις περισσότερες από τις βάσεις διαθέσιμες για την υβριδοποίηση σε ένα συμπληρωματικό σκέλος. Αν και η χημεία εάν αυτός ο αμετάκλητος συσχετισμός δεν γίνεται κατανοητός καλά, η διαδικασία είναι πολύ χρήσιμη. Η μεμβράνη επωάζεται έπειτα σε μια λύση που περιέχει το από ραδιενέργεια επονομαζόμενο single-stranded DNA (ή το RNA) που συμπληρώνουν μερικά από το νουκλεϊνικό οξύ που δεσμεύεται στη μεμβράνη.

Υπό τους όρους υβριδοποίησης (κοντά στο ουδέτερο pH, 40-65 γ, 0.3-0.6 μ NaCl), αυτός ο επονομαζόμενος έλεγχος υβριδιοποιεί στο συμπληρωματικό νουκλεϊνικό οξύ που δεσμεύεται στη μεμβράνη. Οποιοσδήποτε υπερβολικός έλεγχος που δεν υβριδιοποιεί πλένεται μακριά, και τα επονομαζόμενα υβρίδια ανιχνεύονται από autoradiography του φίλτρου. Τα ανασυνδυαζόμενα virions lamda παρόντα στις πινακίδες ενός χορτοτάπητα του Ε. COLI μεταφέρονται σε μια νάυλον μεμβράνη με την τοποθέτηση της μεμβράνης στην επιφάνεια του petri πιάτου. Πολλά από τα προερχόμενα από ιό μόρια σε κάθε πινακίδα απορροφούν στην επιφάνεια της μεμβράνης, αλλά πολλά virions παραμένουν στις πινακίδες στην επιφάνεια του θρεπτικού αγάρ στο petri πιάτο που περιέχει έναν μεγάλο αριθμό μεμονωμένων κλώνων lamda αναπαράγονται στην επιφάνεια της μεμβράνης.

Το αρχικό petri πιάτο καταψύχεται για να καταχωρήσει τη συλλογή των κλώνων lamda. Η μεμβράνη επωάζεται έπειτα σε μια αλκαλική λύση, η οποία αναστατώνει τα virions, που εκδίδουν και που μετουσιώνουν το τοποθετημένο σε κάψα DNA. Η μεμβράνη είναι έπειτα ξηρά, καθορίζοντας το ανασυνδυαζόμενο DNA lamda στην επιφάνεια της μεμβράνης. Έπειτα, η μεμβράνη επωάζεται με έναν ραδιενεργό έλεγχο υπό τους όρους υβριδοποίησης. Ο έλεγχος Unhybridized πλένεται μακριά, και το φίλτρο υποβάλλεται autoradiography.

Το appearence ενός σημείου στο autoradiogram δείχνει την παρουσία ενός ανασυνδυαζόμενου κλώνου lamda που περιέχει το DNA συμπληρωματικό στον έλεγχο. Η θέση του σημείου στο autoradiogram αντιστοιχεί στη θέση στο αρχικό petri πιάτο όπου εκείνος ο ιδιαίτερος κλώνος διαμόρφωσε μια πινακίδα. Δεδομένου ότι το αρχικό petri πιάτο περιέχει ακόμα πολλά virions infectioua σε κάθε πινακίδα, τα προερχόμενα από ιό μόρια από τον προσδιορισμένο κλώνο μπορούν να ανακτηθούν για την αντικατάσταση με την ευθυγράμμιση του autoradiogram και του petri πιάτου και την αφαίρεση των προερχόμενων από ιό μορίων από τον κλώνο που αντιστοιχεί στο σημείο. Μια παρόμοια τεχνική μπορεί να εφαρμοστεί για τη διαλογή μιας βιβλιοθήκης πλασμιδίων στα κύτταρα E.coli.