Θρεπτικός βακτηριακός πολιτισμός μέσων

Πληροφορίες για την αύξηση των βακτηριακών πολιτισμών που χρησιμοποιούν τους θρεπτικούς ζωμούς MEDIA και τα πιάτα πολιτισμού

Πίνακας περιεχομένων:

Βακτηριακά θέματα ανίχνευσης λαθών και φόρουμ πολιτισμού

Σχετικά άρθρα μικροβιολογίας

Ενώστε το ενημερωτικό δελτίο μικροβιολογίασ!

Τι είναι θρεπτικά μέσα - καθορισμός;

"Χημικά, όπως όλα τα άλλα ζωντανά κύτταρα, οι μικροοργανισμοί αποτελούνται από το οργανικό και ανόργανο άζωτο και τα ορυκτά άλατα είναι επομένως απαραίτητο προκειμένου να αυξηθεί ένας μικροοργανισμός, ότι αυτές οι τρεις κλάσεις των ουσιών παρέχονται, μαζί με το οξυγόνο, το οποίο είναι ένα ουσιαστικό στη ζωή όλων των δομών διαβίωσης. Τελικά ένα ορισμένο ποσό υγρασίας είναι απολύτως απαραίτητο." (Besson.)

Σε τρόφιμα που προετοιμάζονται μέσο για την αύξηση των μικροοργανισμών δίνεται το γενικού όρου θρεπτικό. Ένας μεγάλος αριθμός μικροοργανισμών θα αυξηθεί εύκολα σε ή επάνω στα εύκολα διαθέσιμα θρεπτικά μέσα, ως γάλα, σούπα, κ.λπ.... Μερικά microorgan isms έχουν τις ευρέως διαφορετικές απαιτήσεις και την ανάγκη τροφίμων για τα θρεπτικά μέσα αύξησης που διαφέρουν ευρέως στη σύνθεσή τους.

Εντούτοις, υπάρχουν μερικοί γενικοί κανόνες που πρέπει να εφαρμοστούν κατά την προετοιμασία όλων των θρεπτικών μέσων για τη χρήση των μικροοργανισμών. Αυτοί είναι εν συντομία, οι οποίοι:

Κάθε μέσο πολιτισμού πρέπει

1. Περιέχετε τις ουσίες απαραίτητες για την αύξηση.
2. Να είστε της κατάλληλης αντίδρασης.
3. Περιλαμβάνεται στα σκάφη που αντέχουν οικονομικά την προστασία από τη μόλυνση από τις εξωτερικές πηγές.

Ταξινόμηση των θρεπτικών μέσων

Τα μέσα πολιτισμού μπορούν να ταξινομηθούν όπως:

Ι. Φυσικό MEDIA όπως εμφανιμένος στη φύση, π.χ., το γάλα, την πατάτα και άλλο λαχανικά, κρέας και προϊόντα κρέατος, αίμα και τον ορό αίματος, το αυγό, το χώμα, κ.λπ....

ΙΙ. Έτοιμα μέσα, δηλ., που γίνονται στο εργαστήριο. Αυτοί είναι:

(α) Της άγνωστης χημικής σύνθεσης e.g., θρεπτικές αγάρ, ζελατίνη, κ.λπ....

(6) Συνθετικός i.e., χημική σύνθεση γνωστή, π.χ., λύση Giltay για την αφαίρεση του νίτρου των οργανισμών.

Ή όπως:

Ι. Υγρά μέσα. Αυτοί περιλαμβάνουν:

Το MEDIA Α. έκανε από το ζωικό ιστό και τα ρευστά, π.χ., το θρεπτικό ζωμό, ζωμός ορών, ζωμοί υδατανθράκων, γάλα, αίμα, peptone νιτρικών αλάτων λύση, λύση Dunham.

MEDIA Β. που γίνεται από το φυτικό ιστό. Μεταξύ αυτών είναι: Εκχύλισμα βύνης (βλαστημένο κριθάρι), wort μπύρας, εκχύλισμα ζύμης, έγχυση σανού, φυσικοί χυμοί φρούτων, κρασιά (ζυμωνομμένοι χυμοί φρούτων).

Γ. Συνθετικά μέσα.

ΙΙ. Στερεά μέσα. Αυτό το mav είναι ταξινομημένο όπως:

Α. Ρευστοποιήσιμος, π.χ., θρεπτικό αγάρ, θρεπτική ζελατίνη.

Β. Μη-ρευστοποιήσιμος, συμπεριλαμβάνων: 1. Υγρό MEDIA σε ένα φυσικό κράτος αλλά που, μόλις σταθεροποιηθεί, δεν μπορεί να υγροποιηθεί με τα φυσικά μέσα, π.χ., τα μέσα που προετοιμάζονται από τα λευκωματοειδείς ρευστά και τους ιστούς όπως το αυγό, ο ορός αίματος, κ.λπ., ή τα συνθετικά μέσα που σταθεροποιούνται με το πυριτικό άλας νατρίου.

2. MEDIA που είναι στερεό στο φυσικό κράτος, π.χ., φυτικά μέσα όπως η πατάτα, το καρότο, η μπανάνα, κ.λπ....

ΑΣΚΗΣΗ 3. ΤΙΤΛΟΔΟΤΗΣΗ ΤΟΥ MEDIA

Η τιτλοδότηση των βακτηριολογικών μέσων που γίνονται από το κρέας είναι ένα σημαντικό βήμα κατά την προετοιμασία τους, δεδομένου ότι οι μικροοργανισμοί είναι ευαίσθητοι στην αντίδραση του θρεπτικού υποστρώματος.

Διαδικασία. Η ακόλουθη μέθοδος χρησιμοποιείται για τα εργαστηριακά μέσα, με εξαίρεση το γάλα, wort, μηλίτης, ξίδι, χυμοί φρούτων, κ.λπ. Βλέπουνε το σελ. 22.

1. Τεθειμένα 5 c.c. του μέσου που εξετάζεται και 45 c.c. του αποσταγμένου ύδατος σε ένα εξατμίζοντας πιάτο.

2. Βράστε κοφτά ένα λεπτό με το σταθερό ανακάτωμα (για να διώξει όλο το διαλυμένο CO2 που καταχωρεί ως οξύτητα).

$. Προσθέστε 1 c.c. phenolphthalein λύση για το δείκτη.

4. Τιτλοδοτήστε ενώ καυτός, κατά προτίμηση βράζοντας, με N/20 το υδροξείδιο νατρίου, ή N/20 το υδροχλωρικό οξύ ως περίπτωση de μανδς. "Εξασθενημένος αλλά ευδιάκριτος ένας μόνιμος αυξήθηκε χρώμα χαρακτηρίζει το τελικό σημείο. Αυτό το χρώμα πρέπει να παραμείνει μόνιμο για πέντε λεπτά.

5. Υπολογίστε και καταγράψτε την αντίδραση του μέσου στους βαθμούς πληρέστερης κλίμακας, η οποία είναι ο αριθμός κυβικών μετρητών centi του κανονικού * όξινου ή αλκαλικού παρόντος το 1000 κυβικού

* Μια λύση λέγεται ότι είναι κανονική όταν περιέχει 1 γραμμάριο equiv alent ενός οξέος ή μιας βάσης σε 1 λίτρο.

Ένα γραμμάριο ισοδύναμο ενός οξέος ή μιας βάσης είναι ότι ποσότητα που είναι ισοδύναμη με ή θα εξουδετερώσει το μόριο 1 γραμμαρίου ενός mono-basic οξέος ή μιας μον-όξινης βάσης.

Το πλεονέκτημα του συστήματος είναι ότι 1 c.c. οποιασδήποτε κανονικής λύσης θα εξουδετερώσει ακριβώς ή θα είναι ακριβώς ισοδύναμο το equiva 1 χιλιοστογράμμου που παραχωρεί με οποιασδήποτε οξέος ή βάσης. (Noyes, Wm. Α., εγχειρίδιο της χημείας, 1913, σελ. 184.)

ΤΙΤΛΟΔΟΤΗΣΗ ΤΟΥ MEDIA 21

εκατοστόμετρα του μέσου, που χρησιμοποιεί phenolphthalein ως cator indi.

6. Τα αλκαλικά μέσα δείχνονται με την τοποθέτηση του α μείον () το σημάδι πριν από τον αριθμό βαθμών αλκαλικότητας κατά συνέπεια, 15 θα έδειχναν ότι το μέσο ήταν 15 αλκαλικά, ή ότι c.c. το κανονικό οξύ 15 πρέπει να το προστεθεί ανά λίτρο στο ουδέτερο ize.

Τα όξινα μέσα δείχνονται με την τοποθέτηση του α συν (+) το σημάδι πριν από τον αριθμό βαθμών οξύτητας κατά συνέπεια, + 15 θα έδειχναν ότι το μέσο ήταν 15 όξινα ή ότι 15 c.c. του κανονικού αλκαλίου πρέπει να προστεθούν ανά λίτρο στο neu αυτό.

Παράδειγμα.

Ανάγνωση προχοϊ'δων μετά από να τιτλοδοτήσει 5,4 c.c.

Ανάγνωση προχοϊ'δων πρίν τιτλοδοτεί 2,0 c.c.

Αριθμός c.c. N/20 του NaOH που απαιτείται

για να εξουδετερώσουν το οξύ σε 5 c.c.

μέσο 4 c.c.

Εάν 5 c.c. του μέσου (που είναι 1/20 100 c.c.) απαιτούν

3.,4 c.c. 1/20 κανονικού NaOH για να εξουδετερώσουν όξινο pres τον ωτορινολαρυγγολογικό, 100 c.c. του μέσου θα απαιτούσαν 20X3.4 c.c. ή 68 c.c. 1/20 κανονικού NaOH.

Δεδομένου ότι μια κανονική λύση είναι 20 φορές η δύναμη μιας 1/20 κανονικής λύσης, 100 c.c. του μέσου θα απαιτούσαν το 1/20 68 c.c. ή 3.4 c.c. κανονικού NaOH για την ουδετεροποίηση και ένα λίτρο ή 1000 c.c. του μέσου θα απαιτούσε 10X3.4

γ. γ. ή 34 c.c. N/l NaOH για την ουδετεροποίηση i.e., το μέσο είναι οξύ 34. Πληρέστερη κλίμακα. Αυτό είναι το λίτρο του μέσου.

Όταν N/20 το οξύ ή το αλκάλιο και μια 5 c.c. μερίδα του μέσου (σε 45 c.c. του αποσταγμένου νερού) χρησιμοποιούνται, κάθε 1/10 1 c.c. αντιστοιχεί σε 1 πληρέστερη κλίμακα.

Ρύθμιση της αντίδρασης. Εάν επιδιώκεται να αφήσει το μέσο με το α, π.χ., + αντίδραση 15, έχουμε:

22 ΓΕΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑ

Οξύτητα του μέσου

(+ 34) 3,4 c.c. ανά 100 c.c. του μέσου

Επιθυμητή οξύτητα (+ 15). . 1,5 c.c. ανά 100 c.c. του μέσου ποσού κανονικού αλκαλίου

για να προστεθεί 1,9 c.c. ανά 100 c.c. του μέσου

ή 10X1.9 c.c. = 19 c.c. N/l NaOH ανά 1000 c.c. του μέσου

Δεδομένου ότι οι κανονικές λύσεις είναι ίσης δύναμης από την ένταση του ήχου, δηλαδή 1 c.c. του οξέος N/l θα εξουδετερώσει ακριβώς 1 c.c. του αλκαλίου N/l, θα δει εύκολα που εάν 15 c.c. N/l NaOH πρέπει για να εξουδετερώσουν το οξύ παρόν σε 1 λίτρο του μέσου, κατόπιν πρέπει εκεί να είναι παρόν σε εκείνο το λίτρο ακριβώς 15 c.c. του οξέος N/l, ή πρέπει να πούμε ότι η αντίδραση είναι (+ 15) δεκαπέντε βαθμοί οξέος. Για οποιοδήποτε άλλο βαθμό οξύτητας προσθέστε αρκετό κανονικό αλκάλιο για να μειώσετε την οξύτητα στο σημείο επιθυμητό.

Η αντίδραση ενός μέσου αλλάζει κάπως μετά από την ουδετεροποίησή της, ειδικά κατά τη διάρκεια της αποστείρωσης, αλλά και επάνω να σταθεί κατόπιν στη συνηθισμένη θερμοκρασία. Αυτή η αλλαγή είναι προς μια αυξανόμενη οξύτητα, και είναι χαρακτηρισμένη στα μέσα πλούσια σε δεξτρόζη. Συνεπώς είναι απαραίτητο να καθοριστεί ο τίτλος ενός μέσου στο χρόνο που χρησιμοποιείται παρά για να αναφέρει τους αριθμούς που λαμβάνονται πριν από την αποστείρωση.

ΓΑΛΑ, ΜΗΛΙΤΗΣ, ΞΙΔΙ, WORT, ΚΑΙ ΧΥΜΟΙ ΦΡΟΥΤΩΝ

Διαδικασία. 1. Σε ένα μέτρο πιάτων εξάτμισης 5 c.c. του μέσου που εξετάζεται, με τη βοήθεια του κατάλληλου σιφωνίου. Κάνετε μέχρι 50 c.c. με το αποσταγμένο νερό.

Μην θερμάνετε. Τα ανωτέρω μέσα δεν πρέπει να θερμαθούν πριν από την τιτλοδότηση, δεδομένου ότι περιέχουν τα πτητικά οξέα ή άλλες οργανικές ουσίες που μπορούν να καταχωρήσουν ως οξύ και που μπορούν να διωχτούν με να βράσουν,

2. Προσθέστε 1 c.c. phenolphthalein λύση.

3. Προσθέστε, βαθμιαία, από μια ακριβή προχοϊ'δα, IN/20 NaOH έως ότου εμφανίζεται το πρώτο μόνιμο ροζ.

4. Σημειώστε το ποσό του NaOH που απαιτείται για την τιτλοδότηση.

5. Πάντα τρέξτε τα αντίγραφα.

ΓΑΛΑ 23

6. Καταγράψτε ως βαθμούς οξύτητας τον αριθμό c.c. του N/l NaOH που θα απαιτούταν για να εξουδετερώσει ένα λίτρο του μέσου.

ΓΑΛΑ

Το γάλα είναι πολύτιμο ως θρεπτικό μέσο για τους μικροοργανισμούς επειδή: Είναι μια φυσική τροφή και σχεδόν ιδανικό για έναν μεγάλο αριθμό μικροοργανισμών. Η σύνθεσή της, averag ing λίπος 3,40%, καζεϊ'νη 3,50% και albumen, ζάχαρη γάλακτος 4,50%, τέφρα 0,75%, ύδωρ 87,75%, είναι στοιχεία ότι εφοδιάζει τα τρόφιμα σε μια άριστη μορφή για τους περισσότερους μικροοργανισμούς.

Οι βιοχημικές δραστηριότητες πολλών βακτηριδίων τους αποκαλύπτουν selves σίγουρα στις αλλαγές που αρμέγουν, ειδικά litmus γάλα, υποβάλλονται. Πολλές από αυτές τις αλλαγές είναι βλέπω μακροεντολή scopically. Μερικοί από αυτούς είναι:

(α) Όξινη παραγωγή. Η λακτόζη, C^IfeOn (ζάχαρη γάλακτος), είναι πρώτα, διαμορφώνοντας δύο hexose μόρια, 1 μορ. δεξτρόζης και 1 μορ. galactose.

Και κάθε μόριο hexose παράγει δύο μόρια του γαλακτικού οξέος:

hexose = γαλακτικό οξύ.

Γ 6 χ 12.6 = 2CH 3 CH(OH)COOH.

Μπλε litmus γίνεται κόκκινο.

(β) Παραγωγή AlKali. Litmus γίνεται σκοτεινότερο μπλε. Αυτή η αλλαγή πολύ συχνά συνοδεύει το peptonization.

(γ) Μείωση (decolorization litmus). Αυτό οφείλεται στη μείωση του θέματος χρωματισμού (litmus). Πολλοί μικροοργανισμοί εκκρίνουν τα ένζυμα που παράγουν το υδρογόνο. Το υδρογόνο συνδυάζει με litmus, που μειώνει το στην λεuθο-ένωσή του (άχρωμη). (Το μπλε Methylen γίνεται χρώμα λιγότερο κάτω όπως τους όρους.) Ότι αυτό είναι μια μείωση και όχι μια καταστροφή μπορεί να καταδειχθεί με το τίναγμα του αποχρωματισμένου πολιτισμού με μερικά κυβικά εκατοστόμετρα του υδρο GEN peroxid. Τα βακτηρίδια που αποχρωματίζουν litmus επίσης

24 ΓΕΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑ

μειώστε το υδρογόνο peroxid σε E^O και το δημιουργούμενο οξυγόνο που ξαναοξειδώνει μειωμένο litmus (που εμφανίζει από το reac tion του γάλακτος τον τύπο παρόντος μικροοργανισμών). Η επαν οξείδωση πραγματοποιείται αργά υπό τους φυσικούς όρους. Η μείωση μπορεί να πραγματοποιηθεί όταν το γάλα είναι όξινο, αλκαλικό ή ουδέτερο.

(δ) Να πήξει μέσω της όξινης παραγωγής. Η καζεϊ'νη, όπως τις περισσότερες πρωτεϊ'νες, είναι επαμφοτερίζουσα, δηλ., αυτό είναι ικανή και οι δύο αντίδρασης ως ασθενές οξύ και ασθενή βάση. Η ειδάλλως αδιάλυτη καζεϊ'νη βρίσκεται για να είναι στο γάλα σε ένα μερικώς διαλυμένο κράτος (κολλοειδές), λόγω στο συνδυασμό της με τα άλατα ασβεστίου: το ασβέστιο που συνδυάστηκε στο παρελθόν με την καζεϊ'νη, μέσω της παραγωγής του οξέος από ορισμένους οργανισμούς μικροϋπολογιστών, συνδυάζει τώρα με το γαλακτικό οξύ κατά συνέπεια τα ιζήματα καζεϊ'νης, που προκαλούν να πήξει (πήξη). Το LIT mus είναι γυρισμένο οριστικά κόκκινο. Το γάλα που έχει μια όξινη στάρπη θα τιτλοδοτήσει επάνω από + 50.

(ε) Rennet στάρπη. Η πήξη μπορεί επίσης να πραγματοποιηθεί όταν το μέσο είναι ουδέτερο ή slightly^ μόνο οξύ. Αυτό το υπέρ duction της στάρπης οφείλεται σε ένα ρεννετ-όπως ένζυμο που παράγεται από τους μικροοργανισμούς, και είναι παρόμοιο με την ενέργεια rennet που χρησιμοποιείται για να πήξει το γάλα στα εργοστάσια τυριών.

Πολλά spore-forming είδη βρίσκονται κάτω από την ομάδα ρεννετ-παραγωγής των οργανισμών. Rennet η στάρπη ακολουθείται συνήθως από το peptonization.

() Peptonization. Η στάρπη που παράγεται από το οξύ ή ren καθαρός-διαμόρφωση των μικροοργανισμών μπορεί βαθμιαία να εξαφανιστεί, leav ing μόνο ένα ορρός γάλακτος-όπως υγρό. Αυτό προκαλείται από ορισμένα βακτηρίδια που παράγουν τα proteolytic ένζυμα που αφομοιώνουν τη στάρπη και την καθιστούν διαλυτή. Αυτή η ρευστοποίηση των στερεών υπέρ teins όπως τη ζελατίνη, τη φιβρίνη, το βρασμένο ασπράδι, τη στάρπη γάλακτος, κ.λπ., οφείλεται σε δύο ομάδες ενζύμων, pepsin και trypsin.

Pepsin του ζωικού σώματος ενεργεί μόνο σε ένα όξινο μέσο (παρόν στο στομάχι).

Trypsin του ζωικού σώματος ενεργεί μόνο στο αλκαλικό μέσο (παρόν στο έντερο).

ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ LITMUS ΤΟΥ ΓΑΛΑΚΤΟΣ 25

Τα τρυπσην-όπως ένζυμα pepsinand που παράγονται από τους οργανισμούς μικροϋπολογιστών δεν μπορούν να χωριστούν έτσι από τη δραστηριότητά τους σε ένα μέσο ορισμένης αντίδρασης αυτό ποικίλλει με τα είδη μικροοργανισμού και με τις περιβαλλοντικές συνθήκες. Το tonization Pep του γάλακτος πραγματοποιείται συνήθως σε μια ουδέτερη, ελαφρώς αλκαλική, ή πιό σπάνια ελαφρώς όξινη αντίδραση.

Μερικοί οργανισμοί peptonize το γάλα χωρίς διαμόρφωση μιας rennet στάρπης.

(ζ) Αέριο παραγωγή. Αυτό χαρακτηρίζεται από γιατί το mation βράζει αέριο στο γάλα, και είναι accom γενικά από το σχηματισμό της όξινης στάρπης. Πολύ συνήθως η στάρπη στενεύει, προκαλώντας την εξώθηση του ορρού γάλακτος.

ΑΣΚΗΣΗ 4. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ LITMUS ΤΟΥ ΓΑΛΑΚΤΟΣ

Συσκευές. Φρέσκο χωρισμένος ή αποβουτυρωμένο γάλα συσκευές titra tion N/20 NaOH phenolphthalein (δείκτης) 5 c.c. σιφώνιο azolitmin, λύση 2% γεμίζοντας χοάνη κόκκορας τσιμπήματος αποστειρωμένοι σωλήνες δοκιμής συσκευές για το zation sterili ατμού.

Μέθοδος. 1. Φρέσκο χωρισμένος ή το αποβουτυρωμένο γάλα πρέπει να χρησιμοποιηθεί. Ολόκληρο το γάλα είναι ανεπιθύμητο εξ αιτίας της περιεκτικότητας σε λίπος του.

2. Τιτλοδοτήστε και καταγράψτε την αντίδραση του γάλακτος. Εάν το γάλα τιτλοδοτεί επάνω από το οξύ 17, η αντίδραση πρέπει να προσαρμοστεί + σε 15, ξινά, πηγμένος ή το γάλα, μετά από το zation neutrali, δεν κάνει ένα επιθυμητό θρεπτικό μέσο για τους μικροοργανισμούς, επομένως, το γάλα ο του οποίου τίτλος είναι επάνω από το οξύ 20-25 πρέπει να απορριφθεί.

Το φρέσκο γάλα ποικίλλει στην οξύτητα από 12 έως το γάλα 18, με μια οξύτητα επάνω από 18 phenolphthalein δεν θα δώσει ένα ικανοποιητικό μπλε χρώμα με το azolitmin, δεδομένου ότι σε 18 αρχίζει να εμφανίζει όξινο χρωματισμό.

3. Προσθέστε 2% μιας πρότυπης λύσης του αζωτούχου litmin Kahlbaum. Litmus ή το azolitmin προστίθεται μόνο ως cator indi και πρέπει να είναι της ικανοποιητικής δύναμης ώστε να μη αραιωθεί το γάλα σε οποιαδήποτε έκταση.

26 ΓΕΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑ

4. Αναμίξτε το γάλα και το azolitmin λεπτομερώς και το σωλήνα, χρησιμοποιώντας περίπου 8 c.c. του litmus γάλακτος σε κάθε σωλήνα.

Σημείωση. Η προσοχή πρέπει να ληφθεί για να αποτρέψει το γάλα από τον ερχομό σε επαφή με την κορυφή των σωλήνων, δεδομένου ότι θα αναγκάσει τις ίνες βαμβακιού για να εμμείνει στο σωλήνα. Αυτό μπορεί να αποφευχθεί με την χρήση μιας "χοάνης πλήρωσης."

5, αποστειρώνουν με τη θέρμανση στο ρέοντας ατμό για είκοσι λεπτά τέσσερις διαδοχικές ημέρες. Το γάλα είναι δύσκολο να αποστειρωθεί, εξ αιτίας των ανθεκτικών σπορίων που είναι συχνά παρόντα. Εάν επιδιώκεται να αποστειρωθεί ένας μεγαλύτερος όγκος απ'ό,τι στους σωλήνες, ο χρόνος της θέρμανσης πρέπει να.

Προσοχή: Η υπερθέρμανση τείνει να αλλάξει () τη ζάχαρη γάλακτος. Το χρώμα του azolitmin μπορεί επίσης να καταστραφεί. Αυτές οι αλλαγές δεν είναι επιθυμητές.

ΑΣΚΗΣΗ 5. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΠΑΤΑΤΑΣ ΓΛΥΚΕΡΙΝΗΣ

Διάφοροι χρωμογενείς και παθογόνοι οργανισμοί αναπτύσσονται ιδιαίτερα καλά στα μέσα που περιέχουν τη γλυκερίνη. Ο τρόπος με τον οποίο η γλυκερίνη ευνοεί την αύξηση αυτού του οργάνου isms δεν είναι γνωστός, αλλά σε μερικές περιπτώσεις φαίνεται να χρησιμοποιείται άμεσα για την κατασκευή του λίπους (bact. Tubercu losis).

Συσκευές. Μεγάλες υγιείς πατάτες κυλινδρικό μαχαίρι πατατών, ή borer φελλού συνηθισμένο μαχαίρι ανατροπέας αυτοκίνητο νατρίου bonate, 1: λύση 1000 γλυκερίνη, λύση 5% μεγάλοι αποστειρωμένοι σωλήνες δοκιμής, ή σωλήνες πατατών ROUX απορροφητικό βαμβάκι ή κοντή ράβδος γυαλιού 1 c.c. σιφώνιο αποσταγμένο νερό συσκευές για την αποστείρωση ατμού.

Μέθοδος. 1. Προσεκτικά καθαρίστε μια ή δύο μεγάλες πατάτες.

2. Με τη βοήθεια κυλινδρικός borer μαχαιριών ή φελλού πατατών, κύλινδροι αποκοπών της πατάτας, 4 έως 6 εκατ.. Πολύ και 1,5 έως 1,8 εκατ.. Στη διάμετρο. Με ένα συνηθισμένο μαχαίρι, διχοτομήστε κάθε κύλινδρο από μια διαγώνια αποκοπή έτσι ώστε κάθε κομμάτι μοιάζει με στη μορφή ένα ράπισμα αγάρ. Αφαιρέστε οποιεσδήποτε μερίδες του δέρματος σε αυτά τα κομμάτια.

3. Τοποθετήστε σε έναν ανατροπέα και ενυδατώστε σε έναν αραιό (1: 1000) λύση του ανθρακικού άλατος νατρίου * για εικοσιτέσσερις ώρες μόνο.

* Το ανθρακικό άλας νατρίου χρησιμοποιείται για να εξουδετερώσει τα φυσικά οξέα της πατάτας.

ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΠΑΤΑΤΑΣ ΓΛΥΚΕΡΙΝΗΣ

27

4. Μεταφέρετε τα κομμάτια σε μια λύση 5% της γλυκερίνης στο ύδωρ για περαιτέρω εικοσιτέσσερις ώρες μόνο.

5. Τοποθετήστε στους αποστειρωμένους σωλήνες που προετοιμάζονται ως εξής: Επιλέξτε τους πρόσθετους μεγάλους σωλήνες δοκιμής 1,5 έως 2 εκατ.. Στη διάμετρο και καθαρός και ξηρός αυτοί. Τοποθετήστε ένα μικρό κομμάτι της απορροφητικής ράβδου 0,5 εκατ. X2.5 εκατ. βαμβακιού ή γυαλιού. Στο κατώτατο σημείο κάθε ένα. Το βύσμα με το βαμβάκι και αποστειρώνει όπως συνήθως. (Οι σωλήνες ROUX πρέπει μόνο να καθαριστούν και να αποστειρωθούν.)

Αμέσως πρίν εισάγει τα κομμάτια της πατάτας, προσθέστε περίπου 1 c.c. του αποσταγμένου νερού σε κάθε σωλήνα, χρησιμοποιώντας ένα pi pette. Η πατάτα δεν πρέπει να αγγίξει το ύδωρ.

6. Αποστειρώστε με τη θέρμανση σε 100 Γ. σε τέσσερα διαδοχικά

ημέρες για είκοσι λεπτά κάθε ημέρα.

Σχέδιο σωλήνες πατατών 8.. (Orig. Northrup.)

Προσοχή: Ο χρόνος που δηλώνεται σε 3 και 4 πρέπει να υιοθετηθεί αυστηρά, αλλιώς οι πατάτες θα πρέπει να απορριφθούν εξ αιτίας contamina tion με τους ανθεκτικούς spore-forming οργανισμούς.

ΑΝΑΦΟΡΑ

SMIRNOW, Μ. Ρ.: Η αξία της γλυκερινούχου πατάτας ως μέσο πολιτισμού. Σεντ. Φ. Bakt., ΙΙ Abt., BD 41, σελ. 303.

28 ΓΕΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑ

ΑΣΚΗΣΗ 6. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΕΓΧΥΣΗΣ ΚΡΕΑΤΟΣ

Η έγχυση κρέατος είναι το ίδρυμα των συνηθισμένων θρεπτικών μέσων, ως ζωμός, ζελατίνη και αγάρ, και επίσης ενός μεγάλου αριθμού ειδικών θρεπτικών μέσων, ως ζωμοί ζάχαρης, κ.λπ....

Υπό αυτές τις καθοδηγήσεις η ικανοποιητική έγχυση κρέατος είναι προ καθαρισμένη για να κάνει 1 λίτρο κάθε του θρεπτικών ζωμού, της ζελατίνης και του αγάρ.

Συσκευές. 1,5 χιλιόγραμμα (3 Ibs.) Λεπτά τεμαχισμένο φρέσκο αδύνατο βόειο κρέας 1500 c.c. ύδωρ βρυσών κάδος 3,5 λίτρου agateware μεγάλη χοάνη στάση δαχτυλιδιών καθαρό ύφασμα 1 λίτρο που μετρά το φλυτζάνι τρεις αποστειρωμένες 1 erlenmeyer λίτρου φιάλες ψυγείο συσκευές για την αποστείρωση ατμού (autoclav προτιμητέος).

Μέθοδος. 1. Έως 1,5 χιλιόγραμμα του λεπτά τεμαχισμένου, φρέσκου αδύνατου βόειου κρέατος σε έναν κάδο 3,5 λίτρου agateware, προσθέτουν 1500 c.c. του ύδατος βρυσών, * μίγμα λεπτομερώς και επιτρέπουν να αντιπροσωπεύσουν σε μια δροσερή θέση (ψυγείο που προτιμάται) δέκα έξι έως εικοσιτέσσερις ώρες μόνο.

2. Ιδρύστε μια μεγάλη χοάνη σε μια στάση δαχτυλιδιών και τοποθετήστε ένα κομμάτι του καθαρού υφάσματος στη χοάνη. Τοποθετήστε ένα μετρώντας φλυτζάνι κάτω από τη χοάνη.

3. Τεντώστε την έγχυση κρέατος μέσω καθαρό cheesecloth, πατώντας λεπτομερώς έξω όλο το χυμό. 1,5 λίτρα πρέπει να ανακτηθούν. Εάν οποιαδήποτε απώλεια εμφανίζεται κάνετε μέχρι 1500 c.c., χρησιμοποιώντας το ύδωρ βρυσών.

Αυτό το προκύπτον αιματώδες ρευστό περιέχει τις διαλυτές λευκωματίνες του κρέατος, των διαλυτών αλάτων, των εκχυλισματικών ουσιών και του χρωματίζοντας θέματος, κυρίως αιμογλοβίνη.

4. Θέση 500 c.c. της έγχυσης κρέατος σε κάθε μια από τρεις αποστειρωμένες 1 erlenmeyer λίτρου φιάλες. Αντικαταστήστε τα βύσματα, και τη θερμότητα στο autoclav σε 120 Γ. για τριάντα λεπτά. Αυτό είναι μια ασφαλέστερη διαδικασία από θερμαίνοντας για έναν πιό μακροχρόνιο χρόνο στο ρέοντας ατμό.

Κατά τη διάρκεια αυτής της θέρμανσης οι λευκωματίνες coagulable από τη θερμότητα κατακρημνίζονται.

Έχει βρεθεί απαραίτητο και επίσης καταλληλότερο να προετοιμαστεί και να αποστειρωθεί η έγχυση κρέατος πρίν συνεχίζει με την προετοιμασία των διαφορετικών μέσων στα οποία χρησιμοποιείται,

* Περίπου 500 c.c. του ύδατος σε κάθε λίβρα του κρέατος.

ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΟΥ ΘΡΕΠΤΙΚΟΥ ΖΩΜΟΥ 29

εξ αιτίας των ανθεκτικών spore-forming οργανισμών που είναι σχεδόν παγκοσμίως παρόντες στο τεμαχισμένο κρέας η οικονομία του χρόνου είναι επίσης μια εκτίμηση. Εκτός αν αποστειρωμένη το immedi ately, η έγχυση κρέατος αποσυνθέτει γρήγορα εξ αιτίας της αφθονίας και της ποικιλομορφίας της μικροχλωρίδας που αποκτιέται κατά τη διάρκεια των διάφορων διαδικασιών της προετοιμασίας για την αγορά.

Η έγχυση που γίνεται από το πρόσφατα τεμαχισμένο αδύνατο βόειο κρέας θα ποικίλει στην οξύτητα μεταξύ + 15 και + πληρέστερη κλίμακα 25. Εάν η αντίδραση είναι εμφανώς χαμηλότερη ή υψηλότερη, η μικροβιακή ενέργεια πραγματοποιείται, που είναι, ή μπορεί να είναι, επιβλαβής στην αξία τροφίμων του μέσου στο οποίο η έγχυση κρέατος χρησιμοποιείται.

Η έγχυση περιέχει πολύ λίγο λευκωματοειδές θέμα και αποτελείται κυρίως από τα διαλυτά άλατα του μυός, ορισμένων εκχυλισματικών ουσιών, και των αλλαγμένων θεμάτων χρωματισμού μαζί με τα μικρά ίχνη πρωτεϊ'νης που δεν πήζονται από τη θερμότητα.

ΑΣΚΗΣΗ 7. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΟΥ ΘΡΕΠΤΙΚΟΥ ΖΩΜΟΥ

Ο θρεπτικός ζωμός είναι το πρότυπο υγρό που χρησιμοποιείται για τους tivating μικροοργανισμούς cul. Είναι ουσιαστικά taining peptone τσαγιού βόειου κρέατος con. Peptone, μια διαλυτή πρωτεϊ'νη μη coagulable από τη θερμότητα, προστίθεται για να αντικαταστήσει τις πηγμένες λευκωματοειδείς ουσίες που κατακρημνίζουν πότε η έγχυση κρέατος αποστειρώνεται. Το άλας προστίθεται για να πάρει τη θέση των φωσφορικών αλάτων και των ανθρακικών αλάτων, μερικά από τα οποία κατακρημνίζονται στη ρύθμιση της οξύτητας του μέσου από το υδροξείδιο νατρίου.

Η αντίδραση των συνηθισμένων θρεπτικών μέσων ρυθμίζεται σε περίπου + 15 με phenolphthalein ως δείκτης, δεδομένου ότι διαπιστώνεται ότι οι περισσότεροι μικροοργανισμοί αυξάνονται καλύτερα μέσος ουδέτερος ή ελαφρώς αλκαλικός litmus.

Όταν απαιτείται ότι τα θρεπτικά μέσα είναι σαφή, albumen αυγών που μειώνεται σε μια ομαλή συρραφή με το ύδωρ (ή το καλά κτυπημένο λευκό ενός αυγού) προστίθεται. Από την πήξη, albumen αυγών αφαιρεί μηχανικά όλα τα μικρά μόρια μέσα sion που ειδάλλως θα περνούσαν μέσω του εγγράφου φίλτρων.

30 ΓΕΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑ

Αυτή η διαδικασία είναι η αποδοτικότερη όταν το albumen αυγών coagu lates αργά.

Δεδομένου ότι albumen αυγών αρχίζει να πήζει σε περίπου 57 Γ. είναι απολύτως επιτακτικό για τα καλά αποτελέσματα ότι το μέσο δροσίζεται σε 40-50 Γ. πριν από την προσθήκη albumen αυγών.

Αν και albumen αυγών περιέχει τα μικρά ποσά θέματος κολλοειδούς διαλύματος uble μη coagulable από τη θερμότητα, ως ζάχαρη, τις εκχυλισματικές ουσίες και ορυκτό θέμα, το οποίο θα χρησιμεύσει ως τα μικροβιακά τρόφιμα, ο σκοπός του στα θρεπτικά μέσα είναι πρώτιστα για την fying ενέργεια clari του.

Συσκευές. 500 c.c. αποστειρωμένη έγχυση κρέατος 500 c.c. ύδωρ βρυσών 10 gms. Peptone, Witte 5 gms. Αλας 10 gms. Albumen αυγών (ή ένα αυγό) κάδος 3,5 αχάτης-εμπορευμάτων λίτρου συσκευές τιτλοδότησης N/20 NaOH N/l NaOH phenolphthalein (δείκτης) αποσταγμένο νερό 5 c.c. σιφώνιο μεγάλη ράβδος ανακατώματος χονδροειδείς ισορροπίες μεγάλος αέριο καυστήρας μεγάλη χοάνη πλεγμένο έγγραφο φίλτρων γεμίζοντας χοάνη αποστειρωμένοι σωλήνες δοκιμής αποστειρωμένη φιάλη 1 λίτρου συσκευές για την αποστείρωση ατμού -.

Μέθοδος. 1. Βάλτε το περιεχόμενο μιας φιάλης της έγχυσης κρέατος (500 c.c.) σε έναν κάδο αχατών και προσθέστε 500 c.c. του ύδατος βρυσών.

2. Προσθέστε 1% peptone Witte και 0,5% του άλατος.

3. Προσθέστε 10 gms. Από albumen αυγών που έχει αναμιχθεί καλά με 100 c.c. του ύδατος βρυσών. (Βαλμένος το αυγό albumen σε έναν ανατροπέα και προσθέτει αρκετό ύδωρ για να διαμορφώσει μια συρραφή. Ανακατώστε μέχρι ομαλό. Κατόπιν προσθέστε το υπόλοιπο ύδωρ. Ένα αυγό * που κτυπιέται καλά μπορεί να αντικατασταθεί.) Αναμίξτε όλων λεπτομερώς.

4. Θερμότητα στο ρέοντας ατμό για σαράντα πέντε λεπτά ή στο autoclav σε 120 Γ. για τριάντα λεπτά.

5. Τιτλοδοτήστε με N/20 NaOH.

6. Ρυθμίστε την αντίδραση του μέσου + σε 15 με κανονικό NaOH ή κανονικό HC1. Το Retitrate και ρυθμίζει πάλι εάν είναι απαραίτητο.

7. Το αντίβαρο και σημειώνει το βάρος.

8. Βράστε δεκαπέντε λεπτά πέρα από μια ελεύθερη φλόγα, που ανακατώνουν con stantly.

* Δεν είναι απαραίτητο να προστεθεί το ύδωρ στο αυγό.

ΖΕΛΑΤΙΝΗ 31

9. Το αντίβαρο και αποκαθιστά οποιαδήποτε απώλεια από την εξάτμιση με το αποσταγμένο νερό.

10. Φίλτρο ενώ να βράσει καυτό μέσω του πλεγμένου εγγράφου φίλτρων ακριβώς προηγουμένως έπλυνε με το 1/2 λίτρο του βράζοντας ύδατος.

11, Περάστε το διήθημα μέσω του ίδιου εγγράφου μέχρης ότου είναι φωτεινό και σαφές.

12. Γεμίστε τριάντα αποστειρωμένους σωλήνες δοκιμής, χρησιμοποιώντας περίπου 8 c.c. αυτού του μέσου για κάθε σωλήνα. Βάλτε τον υπόλοιπο ζωμό σε μια μεγάλη, αποστειρωμένη φιάλη.

13. Θερμάνετε τους σωλήνες δοκιμής και το περιεχόμενο στο ρέοντας ατμό είκοσι λεπτά τρεις διαδοχικές ημέρες.

14. Για να αποστειρώσετε μια μεγάλη φιάλη του ζωμού, θερμάνετε για είκοσι λεπτά τέσσερις ημέρες στη διαδοχή.

ΖΕΛΑΤΙΝΗ

Η ζελατίνη είναι ένα από τα εργαλεία του μικροβιολόγου. Υπό αυτήν τη μορφή, εξυπηρετεί δύο σκοπούς: σαν στερεό μέσο πολιτισμού, μια τεχνική συσκευή από την οποία η απομόνωση ενός ενιαίου είδους μικροοργανισμού γίνεται πιθανή, και, σε εκείνους τους οργανισμούς που εκκρίνουν τα proteolytic ένζυμα, αυτό χρησιμεύει ως ένα αζωτούχο υλικό τροφίμων.

Η ζελατίνη αντέχει τη διάκριση της ύπαρξης η πρώτη ουσία που χρησιμοποιείται για ένα στερεό μέσο πολιτισμού. Αυτό το μέσο ήταν origi το 1882 από Robert Koch και έχει ξεσηκώσει από τότε την επιστήμη της μικροβιολογίας. Πριν από την εισαγωγή των στερεών μέσων, η απομόνωση ενός ενιαίου είδους μικροοργανισμού περιέλαβε πολλή δυσκολία και σχεδόν πάντα ένα ορισμένο μέτρο της αβεβαιότητας. Για να αναφέρει την Ιορδανία: "Δεν μπορεί να είναι μια μόνη σύμπτωση ότι οι μεγάλες ανακαλύψεις στη βακτηριολογία που συνεχίζεται γρήγορα τα τακούνια αυτής της σημαντικής τεχνικής βελτίωσης, και αυτό δεν είναι ίσως πάρα πολύ για να υποστηρίξουν ότι η άνοδος της βακτηριολογίας από μια σωρεία ελλιπούς αν και οι σημαντικές παρατηρήσεις στη θέση μιας σύγχρονης βιολογικής επιστήμης πρέπει να χρονολογηθούν από για αυτήν την περίοδο (1882)."

Τα πρώτα πιάτα του Koch έγιναν με την έκχυση υγροποιημένης

32 ΓΕΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑ

θρεπτική ζελατίνη επάνω στα αποστειρωμένα, επίπεδα κομμάτια του γυαλιού. Ο σπουδαστής να γίνει εξοικειωμένος με τις δυσκολίες προ τα ικανοποιητικά πιάτα με τη χρήση του "petri πιάτου" θα εκτιμήσει εκείνους που συναντιούνται με πιάτα ζελατίνης Koch στα πρώτα.

Η ζελατίνη είναι μια πρωτεϊ'νη, δηλ., ένα αζωτούχο υλικό τροφίμων. Περιέχει ως απαραίτητα στοιχεία του τον άνθρακα, το υδρογόνο, το οξυγόνο, και το άζωτο (άλλα στοιχεία, εντούτοις, όπως το θείο, ο φώσφορος, κ.λπ., μπορούν να είναι παρόντα). Ο εμπειρικός τύπος του σύμφωνα με Schiitzenberger και τους αστούς είναι C7eHi24N24O29, αλλά ένας τέτοιος τύπος δίνει μόνο τις πληροφορίες των προϊστάμενος συστατικών και επιτρέπει σε ένα για να διαμορφώσει κάποια ιδέα του τεράστιου μεγέθους του μορίου καμία ιδέα της δομής του μορίου δεν δίνεται. Εντούτοις, με την αφομοίωση με το αραιό θειικό οξύ, η ζελατίνη χωρίζει με τον ίδιο τρόπο όπως οι πρωτεϊ'νες, που παράγουν το glycin, το leucin και άλλα λιπαρά amino-acids.

Η ζελατίνη είναι μια ζωική πρωτεϊ'νη, αλλά κάνει καυτό εμφανίζεται ως ζελατίνη στους ζωικούς ιστούς. Υπάρχει εκεί ως κολλαγόνο minoid albu που είναι το κύριο στερεό συστατικό του ινώδους συνδετικού ιστού, που βρίσκεται επίσης, αλλά στο μικρότερο ποσοστό, στο χόνδρο, το κόκκαλο και το σύνδεσμο. Το κολλαγόνο από αυτές τις διάφορες πηγές δεν είναι ίδιο στη σύνθεση και η ζελατίνη ποικίλλει αντίστοιχα, π.χ., τη ζελατίνη από το χόνδρο διαφέρει από αυτήν άλλων πηγών δεδομένου ότι περιέχει ένα χαμηλότερο ποσοστό του αζώτου.

Η ζελατίνη, το σώμα ως αποτέλεσμα της υδρόλυσης του κολλαγόνου, είναι επίσης albuminoid. (Hofmeister θεωρεί αυτήν την υδρόλυση όπως προχωρώντας σύμφωνα με την εξίσωση:

κολλαγόνο + ύδωρ = ζελατίνη

αλλά όσον αφορά στις ουσίες τέτοιας μεταβλητής σύνθεσης,

οι εμπειρικοί τύποι αυτού του είδους δεν έχουν καμία μεγάλη σημασία).

Εμπορικά, προετοιμάζεται από ορισμένα είδη κόκκαλων

και μέρη του δέρματος. Αυτοί επιλέγονται, πλένονται και εξάγονται

ΖΕΛΑΤΙΝΗ 33

από το ύδωρ και με ένα αραιό οξύ (υδροχλωρικό), με το rela tively λίγη έκθεση στη θερμότητα, έτσι ώστε μόνο πιθανά της ρευστής αποσύνθεσης τα προϊόντα του αποθέματος διαμορφώνονται και η να ζελατινοποιήσουν δύναμη της επακόλουθης λύσης δεν καταστρέφεται.

Η ζελατίνη όρου προέρχεται από το λατινικό ρήμα gelare, για να καταψύξει, και τις κλήσεις για να απασχολήσει τις κύριες ιδιότητες αυτής της ουσίας, αυτή της σκληραίνοντας ή ζελατινοποιώντας ιδιοκτησίας της.

Η ζελατίνη ανήκει σε εκείνη την ενδιαφέρουσα κλάση των ουσιών αποκαλούμενων κολλοειδή. Είναι ένα χαρακτηριστικό παράδειγμα της κλάσης, και εκθέτει τις χαρακτηριστικές ιδιότητες της κλάσης. Τα κολλοειδή, στη χαρακτηρισμένη αντίθεση στα crystalloids, δεν κρυσταλλώνουν, δεν διασκορπίζουν εύκολα και είναι στεγανά το ένα στο άλλο. Τα τελευταία μόρια των κολλοειδών είναι πολύ μικρότερα από τι θα καλούσαμε συνήθως μια φυσική υποδιαίρεση, αλλά μάλλον μεγαλύτερος από τα χημικά μόρια η διάμετρος των μικρότερων μορίων σε μια κολλοειδή λύση, π.χ., κόκκινος κολλοειδής χρυσός, που έχουν μετρηθεί με τη βοήθεια του πεδίου εξαιρετικά-μικροϋπολογιστών, είναι 6 millimicrons ή 6 thousandths ενός μικρού. Ένα μικρό είναι ένα χιλιοστό ενός χιλιοστόμετρου. (Τα βακτηρίδια είναι πολύ μεγαλύτερα, μικρότερος ο ορατός με τη βοήθεια του συνηθισμένου μικροσκοπίου που είναι από 0,3 έως 1,0 μικρό στη διάμετρο.) Συνεπώς οι αντιδράσεις τους στέκονται μεσοστρατίς μεταξύ των φυσικών και χημικών αλλαγών του θέματος, όπως μπορεί να δει με την εξέταση των ιδιοτήτων της ζελατίνης.

Η ζελατίνη θα απορροφήσει μια σημαντική ποσότητα θερμού ύδατος (είναι σχεδόν αδιάλυτη στο κρύο νερό) και πρήζεται επάνω, παράγοντας μια ζελατίνα που, επάνω στην εφαρμογή της θερμότητας, λειώνει σε μια ιξώδη, κολλώδη λύση που ζελατινοποιεί πάλι επάνω στην ψύξη. Το όνομα hydrogel εφαρμόζεται στα κολλοειδή που εμφανίζουν αυτήν την ιδιοκτησία. Τα συνηθισμένα μέσα ζελατίνης για τη μικροβιολογική εργασία περιέχουν τη ζελατίνη 12% 15%. Όταν ξηρά στα μέσα peratures tem, η ζελατίνη μπορεί πάλι να ξαναδιαλυθεί και σίγουρα. Από αυτήν την ιδιοκτησία καλείται αντιστρέψιμο κολλοειδές για να το διακρίνει από άλλα κολλοειδή που, όταν αλλάζουν μιά φορά το φυσικό κράτος τους, είναι αδιάλυτα, π.χ., καζεϊ'νη και silicic οξύ.

34 ΓΕΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑ

Εάν σε περίπου 130 Γ., ή υπερθέρμανε πότε στο ζελατινούχο κράτος είτε για έναν σύντομο χρόνο σε μια θερμοκρασία επάνω από 100 Γ., είτε για πολύ σε 100 Γ., όπως στη διά mittent αποστείρωση, η ζελατίνη έτσι τροποποιείται ότι η ξαναδιαλύοντας ή resolidifying δύναμή της αντίστοιχα χάνεται. , Την απώλεια της ξαναδιαλύοντας ιδιοκτησίας τοποθετούνται στην πάρα πολύ στενή επαφή των ιδρυτικών μορίων, μια αλλαγή στο φυσικό κράτος στη superheated ζελατίνη, η απώλεια της resolidifying δύναμης οφείλεται πιθανώς στο disintegra tion του μορίου ζελατίνης, ένα πιό καθαρώς χημικό φαινόμενο. Αυτή η απώλεια της ζελατινοποιώντας ιδιοκτησίας προκαλείται επίσης από τις ενζυμικές δραστηριότητες πολλών μικροοργανισμών και είναι επίσης μια διαδικασία αποσύνθεσης.

Η ζελατίνη κατέχει ένα σημείο ρευστοποίησης που, εντούτοις, ποικίλλει αρκετά υπό τους διαφορετικούς όρους. Συνήθως, τα μέσα που περιέχουν τη ζελατίνη 12% 15% θα υγροποιήσουν ή θα λειώσουν σε μια θερμοκρασία κοντά σε 24 έως 26 Γ., να σταθεροποιήσουν ing πάλι σε 8 έως 10 Γ. σε μια σαφή, διαφανή ζελατίνα. Κατά συνέπεια, τα μέσα ζελατίνης μπορούν να χρησιμοποιηθούν μόνο για τους οργανισμούς που δεν απαιτούν μια υψηλότερη θερμοκρασία από 22 έως 24 Γ. για την ανάπτυξη. Η υπερθέρμανση στο στάδιο της προετοιμασίας ή της αποστείρωσης θα προκαλέσει ένα ιδιαίτερο χαμήλωμα του σημείου ρευστοποίησης, ίσως τελικά τόσο χαμηλός που το μέσο θα είναι υγρό στη θερμοκρασία δωματίου (20 έως 21 γ.) Θα δει εύκολα πώς το τελευταίο μέσο ζελατίνης δεν θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί handily για το isola tion των οργανισμών. Ένα λίγο στοιχείο θα βοηθήσει στον καθορισμό αυτού στο μυαλό.

Η σταθεροποιώντας ιδιοκτησία της ζελατίνης ποικίλλει στην αντίστροφη αναλογία με το χρόνο της θέρμανσης κατά τη διάρκεια της διαδικασίας της αποστείρωσης το υγροποιώντας σημείο του χαμηλώνουν σε έναν μέσο όρο 2 Γ. για κάθε ώρα της θέρμανσης σε 100 γ. Αυτό καθιστά σαφές γιατί τέτοια προσοχή πρέπει να ληφθεί κατά την προετοιμασία ενός μέσου ζελατίνης, στην κλασματική αποστείρωση αυτού του μέσου στο ρέοντας ατμό, και γιατί η άμεση ψύξη είναι απαραίτητο aftei κάθε fractionation στο στάδιο της προετοιμασίας του.

ΖΕΛΑΤΙΝΗ 35

Αν και οι θερμοκρασίες επάνω από 100 Γ. είναι πιό καταστρεπτικές στη σταθεροποιώντας ιδιοκτησία από αυτό 100 Γ., είναι δυνατό να αποστειρωθεί ένα μέσο που περιέχει 12% 15% της ζελατίνης στο autoclav (7 έως 8 Ibs. Πίεση) σε 112 έως 113 Γ. για είκοσι λεπτά ή σε 15 Ibs. Πίεση (120 Γ. για πέντε λεπτά) χωρίς εξασθένιση της χρησιμότητάς του ως στερεό μέσο πολιτισμού.

Αυτή η χρήση του ατμού διά πίεση (ξηρός ατμός) είναι σχεδόν απαραίτητη στην περίπτωση ενός μέσου ζελατίνης για να επηρεάσει το zation sterili, δεδομένου ότι η ζελατίνη, από την πηγή της, τη μέθοδο προετοιμασίας, και τα πιό πρόσφατα στοιχεία του παθητικού στη μόλυνση, σχεδόν να περιέχει ή θα φέρει επάνω στην επιφάνειά της έναν μεγάλο αριθμό πολύ ανθεκτικών σπορίων. Η θέρμανση σε 100 Γ. για τριάντα λεπτά τρεις ή ακόμα και τέσσερις ή πέντε διαδοχικές ημέρες είναι όχι πάντα αποδοτική, όπως αυτά τα σπόρια όχι πάντα βλασταίνουν μέσα σε εικοσιτέσσερις ώρες μετά από να θερμάνουν και, να αναφερθεί ανωτέρω τα στοιχεία, τα εύκολα βλέπει ότι το χαμήλωμα του σημείου φατρίας lique δεν πρόκειται να θεωρηθεί ως αμελητέος στο στάδιο της διαλείπουσας αποστείρωσης.

Η ζελατίνη κατέχει μια άλλη ιδιοκτησία που τον καθιστά πολύτιμο για τη βακτηριολογική εργασία: i.e., στους πολιτισμούς πιάτων ζελατίνης κανένα ύδωρ της συμπύκνωσης δεν συλλέγει συνήθως στην κάλυψη του petri πιάτου (όπως με το αγάρ) αργότερα που πέφτει στην επιφάνεια της ζελατίνης και που εξαλείφει έτσι τις μορφές των αποικιών και που αναγκάζει τις απομονωμένες αποικίες για να γίνει μολυσμένες με γειτονικές. Η καταχώρηση αυτού του μέσου είτε στους σωλήνες δοκιμής είτε στα πιάτα, αποστειρωμένος είτε εμβολιασμένος, καθίσταται έτσι απλούστερη απ'ό,τι με το αγάρ.

ΑΝΑΦΟΡΑ

VAN DERHEIDE, C.C.: Gelatinose Losungen und Verflussigungspunkt der Nahrgelatine, αψίδα. Φ. Hyg., BD 30 ..1897, Σ. 82-115.

36 ΓΕΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑ

ΑΣΚΗΣΗ 8. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΘΡΕΠΤΙΚΗΣ ΖΕΛΑΤΙΝΗΣ

Συσκευές. 500 c.c. αποστειρωμένη έγχυση κρέατος 500 c.c. ύδωρ βρυσών 150 gms. Ζελατίνη 10 gms. Peptone, Witte 5 gms. Αλας 10 gms. Albumen αυγών (ή ένα αυγό) λουτρό ύδατος θερμόμετρο κάδος 3,5 λίτρου εμπορευμάτων αχατών μακριά βαριά ράβδος ανακατώματος συσκευές τιτλοδότησης N/20 NaOH N/l NaOH phenolphthalein (δείκτης) αποσταγμένο νερό χονδροειδές bal ances μεγάλος αέριο καυστήρας μεγάλη χοάνη πλεγμένο έγγραφο φίλτρων γεμίζοντας χοάνη αποστειρωμένοι σωλήνες δοκιμής αποστειρωμένες 500 c.c. erlenmeyer φιάλες συσκευές για την αποστείρωση ατμού λουτρό ή ψυγείο τρέχω-ύδατος.

Μέθοδος. 1. Βάλτε το περιεχόμενο μιας φιάλης της έγχυσης κρέατος (500 c.c.) σε έναν κάδο αχατών και προσθέστε 500 c.c. του ύδατος βρυσών.

2. Προσθέστε τη ζελατίνη 15%, peptone 1% Witte, και το άλας 0,5% στο μίγμα.

3. Θερμάνετε αυτό το μίγμα σε ένα λουτρό ύδατος για να διαλύσετε τη ζελατίνη, peptone και το άλας, ανακατώνοντας περιστασιακά.

4. Δροσίστε σε 40-50 γ. Αυτό είναι επιτακτικό.

5. Κατόπιν προσθέστε 10 gms. Από albumen αυγών που έχει αναμιχθεί καλά με 100 c.c. του ύδατος βρυσών. (Βαλμένος το αυγό albumen σε έναν ανατροπέα, προσθέτει αρκετό ύδωρ για να διαμορφώσει μια συρραφή και να ανακατώσει μέχρι ομαλό έπειτα προσθέστε το υπόλοιπο ύδωρ. Ένα αυγό που κτυπιέται καλά μπορεί να αντικατασταθεί.) Αναμίξτε όλων λεπτομερώς.

6. Θερμότητα στο ρέοντας ατμό για σαράντα πέντε λεπτά ή στο autoclav σε 105 Γ. για τριάντα λεπτά.

7. Τιτλοδοτήστε με N/20 NaOH.

8. Ρυθμίστε την αντίδραση του μέσου + σε 15 με κανονικό NaOH ή κανονικό HC1. Επαν τιτλοδοτήστε και ρυθμίστε πάλι εάν είναι απαραίτητο.

9. Το αντίβαρο και σημειώνει το βάρος.

10. Βράστε δεκαπέντε λεπτά πέρα από την ελεύθερη φλόγα, που ανακατώνουν con stantly.

11, Το αντίβαρο και αποκαθιστά οποιαδήποτε απώλεια από την εξάτμιση με το αποσταγμένο νερό.

12. Φίλτρο βράζοντας καυτός μέσω του πλεγμένου εγγράφου φίλτρων

ΑΓΑΡ 37

ακριβώς προηγουμένως πλυμένος με το βράζοντας ύδωρ 1/2 λίτρου. Περάστε το διήθημα μέσω του ίδιου εγγράφου έως ότου είναι φωτεινό και σαφές.

13. Γεμίστε τριάντα αποστειρωμένους σωλήνες δοκιμής, χρησιμοποιώντας περίπου 8 c.c. του μέσου για κάθε σωλήνα. Διαιρέστε το υπόλοιπο σε δύο ίσες μερίδες και τοποθετήστε στις αποστειρωμένες erlenmeyer 1/2 λίτρου φιάλες.

14. Θερμάνετε στο ρέοντας ατμό είκοσι λεπτά τρεις διαδοχικές ημέρες.

15. Δροσίστε τη ζελατίνη σε ένα λουτρό τρέχω-ύδατος, αμέσως μετά από κάθε θέρμανση. Η προσοχή πρέπει να ληφθεί για να θερμάνει τη ζελατίνη το λιγότερο δυνατόν, δεδομένου ότι μέρος της δύναμης σταθεροποίησης της ζελατίνης χάνεται με κάθε εφαρμογή της θερμότητας.

16. Για να αποστειρώσει μια μεγάλη φιάλη της θρεπτικής ζελατίνης, θερμότητα για είκοσι λεπτά τέσσερις ημέρες στη διαδοχή.

ΑΓΑΡ

Το αγάρ ή το αγάρ-αγάρ (από μια της Μαλαισίας λέξη που σημαίνει "vege τον πίνακα"), η ουσία που χρησιμοποιείται στην προετοιμασία ενός είδους στερεού μέσου πολιτισμού για τη βακτηριολογική εργασία, είναι ένας υπέρ αγωγός που προετοιμάζεται από τα διάφορα φύκια βρήκε κοντά στον Ινδικό Ωκεανό και στα κινεζικά και ιαπωνικά ύδατα. Αυτός ο τύπος φυκιού έχει διάφορα κοινά ονόματα, όπως η Κεϋλάνη ή. βρύο Jaffna, isinglass της Βεγγάλης, διάφορα είδη κ.λπ. χρησιμοποιείται για τα τρόφιμα και το εμπόριο είναι ιδιαίτερο.

Το Payen, ένας γαλλικός φαρμακοποιός -(αψοuτ 1859), έλαβε τη ζελατίνα αγάρ από το φύκι, gelidium corneum, με το lowing τρόπο fol: Το φύκι επιτράπηκε για να αντιπροσωπεύσει κάποιο χρόνο σε μια κρύα αραιή λύση του υδροχλωρικού οξέος το οξύ αφαιρέθηκε με να ξεπλύνει αρκετές φορές με το ύδωρ, κατόπιν το φύκι τοποθετήθηκε σε μια κρύα αραιή λύση της αμμωνίας έπειτα η αμμωνία αφαιρέθηκε με το επαναλαμβανόμενο ξέπλυμα με το κρύο νερό. Κατά τη διάρκεια αυτής της διαδικασίας, το φύκι έχασε 53% του βάρους του στα ορυκτά άλατα, θέμα χρωματισμού, και τα οργανικά συστατικά. Η υπόλοιπη μερίδα βράστηκε στο ύδωρ,

38 ΓΕΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑ

κατά τη διάρκεια ποιας διαδικασίας η φυτική ζελατίνα εξήχθη. Η λύση αποκτηθείσα έτσι χύθηκε μακριά, αφήνοντας το άχρηστο ίζημα πίσω. Αυτή η ζελατίνα είναι η ίδια στη σύνθεση με αυτήν που υπάρχει στους φυτικούς ιστούς το δεν έχουν αλλάξει χημικά, όπως είναι το κολλαγόνο κατά την προετοιμασία της ζελατίνης. Το εμπορικό αγάρ προετοιμάζεται πιθανότατα με να εξατμίσει αυτήν την λύση ώσπου να ξεραθεί με τα διαφορετικά μέσα.

Το αγάρ μπαίνει συνήθως στα χέρια του bacteriologist όπως μακροχρόνιες, λεπτές, γκριζωπός-άσπρες λουρίδες, ή όπως ομάδες δεδομένων, ή πιό ιδιαίτερα τα τελευταία χρόνια, υπό μορφή γκριζόλευκου pow der της ευρωπαϊκής κατασκευής.

Το αγάρ, σε αντίθεση με τη ζελατίνη, είναι ένας υδατάνθρακας, δηλ., αυτό αποτελείται από έναν συνδυασμό άνθρακα, υδρογόνου και οξυγόνου μόνο. Τα ίχνη αζώτου είναι παρόντα ως ακαθαρσίες. Οι ανωτέρω ποιοτικοί προσδιορισμοί του στοιχειώδους constit του uents έγιναν από Payen, από Parumbaru και από Hueppe, το οποίο έκανε τους προσδιορισμούς τους στο αγάρ από τις διαφορετικές πηγές. Όσο το δοχείο εξακριβώνεται, ο εμπειρικός τύπος του δεν έχει ερευνηθεί ακόμα σε οποιαδήποτε έκταση.

Όπως τη ζελατίνη, εντούτοις, το αγάρ είναι ένα αντιστρέψιμο κολλοειδές. Ενυδατώνει επάνω στο κρύο νερό, διαλύει στο καυτό ύδωρ μετά από μακροχρόνιος να βράσει σε μια tasteless και odorless σαφή λύση, και το στερεό ifies επάνω στην ψύξη σε μια λίγο πολύ αδιαφανή ζελατίνα. Η υδατώδης λύση της είναι ουδέτερη ή σχεδόν ουδέτερη phthalein φαινολών ακόμα, μια απελευθέρωση ή δύο από την εικοστή κανονική ένυδρη ουσία νατρίου είναι επαρκής για να καταστήσει το ρόδινο χρώμα αντιληπτό.

Οι κολλοειδείς ιδιότητες του αγάρ δεν καταστρέφονται με μια μακρύς-συνεχισμένη θέρμανση σε μια υψηλή θερμοκρασία, ούτε από την ενέργεια των συνηθισμένων μικροοργανισμών όπως είναι εκείνοι της ζελατίνης. Τις ανωτέρω ιδιότητες, εντούτοις, επηρεάζονται και μπορούν να εξασθενίσουν πλήρως από η αντίδραση του υγρού στο οποίο το αγάρ διαλύεται.

Η αντίδραση του υγρού, δηλ., εάν είναι όξινο ή αλκαλικό, επηρεάζει το αγάρ ως προς τη διαλυτότητα, τη στερεότητα, το χρώμα, τη διαφάνεια, filterability και το ποσό της ύδατος condensa tion. Εάν το αγάρ διαλύεται σε ένα υγρό μιας οξύτητας

ΑΓΑΡ 39

το αντίτιμο με 0,1% HC1, το αγάρ διαλύει πολύ εύκολα, φίλτρα γρήγορα, το επακόλουθο διήθημα που είναι μια ανοικτό κίτρινο, διαφανής, ολισθηρή, υδατώδης λύση που δεν σταθεροποιεί επάνω στην ψύξη. Εάν ένα μικρότερο ποσοστό του υδρο χλωρικού οξέος χρησιμοποιείται, η στερεοποίηση εμφανίζεται (κάτω από 40 γ.) αλλά η ζελατίνα "δεν θα σταθεί επάνω" και είναι επομένως άχρηστη για τους πολιτισμούς ραπίσματος αγάρ ή πιάτων. Ένα μεγάλο ποσό ύδατος densation con είναι παρόν επίσης.

Εάν το αγάρ διαλύεται σε έναν αδύνατο αλκαλικό ή ουδέτερο ζωμό, ένα παχύ, καφεκόκκινο, ιξώδες υγρό λαμβάνεται που τα φίλτρα αργά και σταθεροποιούν γρήγορα σε 40 Γ., σε μια πολύ στερεά, αδιαφανή, ξηρά ζελατίνα, κατοχή αλλά λίγο ύδωρ συμπύκνωσης διατηρεί τη μορφή του καλά στα ραπίσματα και στα πιάτα. Κατά συνέπεια την αξία του αγάρ ως στερεό μέσο πολιτισμού αυξάνεται ή χαμηλώνουν σύμφωνα με το cjegree της αλκαλικότητας ή της οξύτητας.

Πρέπει να σημειωθεί επιπλέον, εντούτοις, ότι όταν μόλις καταστραφεί η σταθεροποιώντας ιδιοκτησία του αγάρ από την παρουσία μιας υπερβολής του οξέος στη λύση της, δεν μπορεί αυτή η ιδιοκτησία ποτέ να επανακτηθεί από την ουδετεροποίηση με το αλκάλιο το οξύ ανά καταστρέφει manently την αντιστρεψιμότητα του κολλοειδούς.

Το λειώνω-σημείο του αγάρ (1,5% στην ουδέτερη λύση) είναι 97 Γ. και αν και το σταθεροποιώντας σημείο του είναι σε 40 Γ., όταν μόλις σταθεροποιήσει αυτό θα σταθεί επάνω στη θερμοστάτη σε μια θερμοκρασία 50 γ. Για βακτηριολογικούς λόγους, που μόνο η μορφή του αγάρ μπορεί να χρησιμοποιηθεί που παραμένει ρευστή από 38 έως 40 Γ. Agar που παραμένει ρευστό μόνο σε μια θερμοκρασία επάνω από αυτό το σημείο θα ήταν πάρα πολύ καυτός όταν είναι σε ένα ρευστό κράτος για τη χρήση τη ζωτικότητα των οργανισμών που εισάγονται θα εξασθένιζαν ή θα καταστρεφόταν από την υψηλή θερμοκρασία.

Οι δυσκολίες συναντιούνται κατά την προετοιμασία ενός στερεού μέσου πολιτισμού από το αγάρ, λόγω στην αργή διαλυτότητα, vis το cosity και επακόλουθο αργό filterability της. Η λύση της (πέψη) επηρεάζεται, όπως αναφέρεται ανωτέρω, με μια μακροχρόνια θέρμανση water-bath, αποστειρωτής ατμού, autoclav, ή πέρα από μια ελεύθερη φλόγα. Το χρονικό διάστημα που απαιτείται για την πλήρη πέψη εξαρτάται από τρία πράγματα: Η αντίδραση

40 ΓΕΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑ

υγρό στο οποίο το αγάρ διαλύεται, το περιεχόμενο τοις εκατό του αγάρ, και η μέθοδος. Η επιρροή της αντίδρασης των λύσεων αγάρ έχει αντιμετωπιστεί ανωτέρω. Για τη γενική χρήση πολιτισμού, εντούτοις, το συνηθισμένο αγάρ γίνεται + την πληρέστερη κλίμακα 15 (το αγάρ σταθεροποιεί με τη δυσκολία επάνω από + την πληρέστερη κλίμακα 30).

Το αγάρ ενός τοις εκατό είναι πολύ περισσότερο εύκολα διαλυτό υπό τους ίσους όρους από ένα υψηλότερο τοις εκατό. Ένα και ένα μισό τοις εκατό είναι το ποσό που χρησιμοποιείται στα συνηθισμένα μέσα αγάρ, που δίνουν μια κάπως πιό δύσκαμπτη και έτσι πιό επιθυμητή ζελατίνα.

Το αγάρ αφομοιώνεται ο πιό πάρα πολύ γρήγορα πέρα από μια ελεύθερη φλόγα. Εάν δεν θερμαίνεται αρκετά, μετά από τη διήθηση και την αποστείρωση του αγάρ με τη διαλείπουσα μέθοδο, ένα flocculent precip itate συχνά εμφανίζεται στο προηγουμένως σαφές μέσο. Αυτό μπορεί να γίνει για να εξαφανιστεί στις περισσότερες περιπτώσεις με την υποβολή στη θερμοκρασία του autoclav (120 Γ. 15 Ibs.).

Το αγάρ για τα μέσα πολιτισμού πρέπει να είναι εξ ολοκλήρου σαφές όταν υγρό, και ομοιογενώς αδιαφανής-διαφανής όταν στερεό πρέπει να έχει translucence επαρκές για να επιτρέψει στις βαθιές αποικίες στα πιάτα ή τους πολιτισμούς πληγμάτων για να παρατηρηθεί εύκολα δεν πρέπει να περιέχει το flocculent υλικό, το ίζημα, ή τα κομμάτια του χαρτί βαμβακιού ή φίλτρων, όπως αυτά εμποδίζουν τη χαρακτηριστική ανάπτυξη αποικιών των μικροοργανισμών και, στον άπειρο, μπορούν μερικοί χρόνοι να μπερδευτούν με τις αποικίες.

Στις πρώτες μεθόδους που χρησιμοποιήθηκαν πάντα για την παραγωγή των μέσων πολιτισμού αγάρ, αντί του φιλτραρίσματος του καυτού αγάρ μέσω του εγγράφου φίλτρων, του απορροφητικού βαμβακιού, ή του αμιάντου, επιτράπηκε για να δροσίσει, dur ing που επεξεργάζονται το ίζημα που εγκαθίσταται στο κατώτατο σημείο όταν το στερεό το ίζημα κόπηκε. Αυτή η μέθοδος δεν ήταν επιθυμητή, δεδομένου ότι η καθαρότητα του επακόλουθου αγάρ θα εξαρτώταν από το ποσοστό όσο πιό αργή η ψύξη, τόσο πιό εντελώς η ιζηματογένεση θα πραγματοποιούταν.

Το αγάρ δεν είναι τρόφιμα για τους μικροοργανισμούς γενικά, δηλ., αυτό δεν επηρεάζεται από τα χωνευτικά ένζυμα των περισσότερων βακτηριδίων, όπως είναι η ζελατίνη. Εντούτοις, μερικά βακτηρίδια είναι γνωστά που έχουν τη δύναμη της υγροποίησης του αγάρ, μεταξύ του οποίου είναι β.

ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΟΥ ΘΡΕΠΤΙΚΟΥ ΑΓΑΡ 41

sp. gelaticus ν. (gran) και κακός. Το Nenckii, και τα δύο από το οποίο βρίσκονται, όπως θα αναμενόταν, στο θαλάσσιο νερό. Αυτή η αδράνεια compara tive του αγάρ το καθιστά πολύτιμο για την προετοιμασία, των στερεών συνθετικών μέσων, η αξία των οποίων μπορεί να είναι EN με την υποβολή του εμπορικού αγάρ στη φυσική ζύμωση κατά τη διάρκεια ποιας διαδικασίας οποιαδήποτε ίχνη ικανών ουσιών τροφίμων οφέλους καταναλώνονται από τους μικροοργανισμούς παρόντες. (Beijerinck.)

Το αγάρ είναι ειδικής χρήσης στη βακτηριολογική εργασία στην οποία η καλλιέργεια των μικροοργανισμών πρέπει να διευθυνθεί σε μια θερμοκρασία επάνω από το λειώνω-σημείο της ζελατίνης. Αυτό το χαρακτηριστικό γνώρισμα έχει καταστήσει πιθανούς τους μεγάλους διασκελισμούς που έχουν λήφθουν στην ιατρική βακτηριολογία, δεδομένου ότι πολλά παθογόνα βακτηρίδια μπορούν να απομονωθούν και να αυξηθούν μόνο με τη δυσκολία στο tempera tures κάτω από αυτό του σώματος.

ΑΝΑΦΟΡΕΣ

SMITH, ERWIN F.: Βακτηρίδια σε σχέση με τις ασθένειες εγκαταστάσεων. Εντάσεις I,

Σ. 31-36. Διάφορες απεικονίσεις. SCHULTZ, Ν. Κ.: Zur Frage βον δερ Bereitung einiger Nahrsubstrate.

Σεντ. Φ. Bakt. Ι. Orig., BD 10 ..1891, σελ. 57.

ΑΣΚΗΣΗ 9. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΟΥ ΘΡΕΠΤΙΚΟΥ ΑΓΑΡ

Συσκευές. κάδος 3,5 αχάτης-εμπορευμάτων λίτρου 15 gms. Αγάρ 10 gms. Peptone 5 gms. Αλας 10 gms. Albumen αυγών (ή ένα αυγό) 500 c.c. αποστειρωμένη έγχυση κρέατος 500 c.c. ύδωρ βρυσών συσκευές τιτλοδότησης N/20 NaOH N/l NaOH phthalein φαινολών (δείκτης) αποσταγμένο νερό μεγάλη χοάνη πλεγμένο έγγραφο φίλτρων γεμίζοντας χοάνη αποστειρωμένοι σωλήνες δοκιμής αποστειρωμένη φιάλη λίτρου χονδροειδείς ισορροπίες μεγάλος αέριο καυστήρας 1 λίτρο που μετρά το φλυτζάνι συσκευές για την αποστείρωση ατμού.

Μέθοδος. 1. Σε μια θέση 15 κάδων 3 λίτρου εμπορευμάτων αχατών gms. Από το αγάρ σε 500 c.c. του ύδατος βρυσών.

2. Πλύντε το αγάρ καλά, που χωρίζει τα αποκόμματα και squeez ing το μέσω των χεριών.

3. Μεταγγίστε το βρώμικο ύδωρ, που μετρά το ποσό που χύνεται

42

ΓΕΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑ

από αντικαταστήστε με το ίδιο ποσό καθαρού ύδατος βρυσών.

Επαναλάβετε.

4. Διαλύστε πέρα από μια ελεύθερη φλόγα και βράστε για πέντε λεπτά, που ανακατώνουν συνεχώς. Το solu tion πρέπει να είναι εξ ολοκλήρου απαλλαγμένο από τα κομμάτια του αγάρ.

5. Προσθέστε peptone 1% Witte και το άλας 0,5% στο βράζοντας αγάρ.

6. Έως 500 c.c. του κρέατος στην τήξη προσθέστε 10 gms. Από το αυγό το Al που έχει αναμιχθεί καλά με 100 c.c. του ύδατος βρυσών. (Βαλμένος το αυγό albumen σε έναν ανατροπέα και προσθέτει αρκετό ύδωρ για να διαμορφώσει μια συρραφή. Ανακατώστε μέχρι ομαλό και προσθέστε έπειτα ότι παραμείνετε ing ύδωρ. Ένα αυγό καλά κτυπημένος,

Το σχέδιο χοάνη καυτού ύδατος 9. για μπορεί να αντικατασταθεί.) Αναμίξτε όλη το φιλτράροντας αγάρ ή τη ζελατίνη. Λεπτομερώς

7. Χύστε το λειωμένο μίγμα αγάρ αργά στην έγχυση κρέατος, που ανακατώνει συνεχώς. Θερμότητα στο autoclav σε 120 Γ. για σαράντα πέντε λεπτά ή για μια ώρα στο ρέοντας ατμό.

Σημείωση. Το χρόνο για αυτήν την θέρμανση δεν μπορεί να στο πλεονέκτημα, αλλά ποτέ να κονταίνουν. Εάν το αγάρ δεν έχει θερμαθεί αρκετά πριν από τη διήθηση, ένα flocculent ίζημα θα διαμορφώσει στους σωλήνες επάνω στη θέρμανση στο ρέοντας ατμό. Στις περισσότερες περιπτώσεις αυτό μπορεί να προκληθεί για να εξαφανιστεί με τη θέρμανση για έναν σύντομο χρόνο στο autoclav σε 15 Ibs.

8. Τιτλοδοτήστε με N/20 NaOH.

9. Ρυθμίστε την αντίδραση του μέσου + σε 15 με κανονικό NaOH ή κανονικό HC1. Το Retitrate και αναδιαρρυθμίζει την αντίδραση εάν είναι απαραίτητο.

10. Το αντίβαρο και σημειώνει το βάρος.

11, Βράστε δεκαπέντε λεπτά πέρα από μια ελεύθερη φλόγα, που ανακατώνουν con stantly,

PEPTONE DUNHAM ΛΎΣΗ 43

12. Το αντίβαρο και υφίσταται επάνω οποιαδήποτε απώλεια σε βάρος με το βράζοντας αποσταγμένο νερό.

13. Να βράσει φίλτρων καυτό μέσω του πλεγμένου εγγράφου φίλτρων ακριβώς που πλένεται προηγουμένως με το βράζοντας ύδωρ. Περάστε το διήθημα μέσω του ίδιου εγγράφου μέχρι σαφή.

14. Γεμίστε 60 έως 70 αποστειρωμένους σωλήνες δοκιμής, χρησιμοποιώντας περίπου 8 c.c. του μέσου για κάθε σωλήνα.

15. Θερμάνετε στο ρέοντας ατμό είκοσι λεπτά τρεις cessive ημέρες suc.

16. Στο τέλος της τελικής θέρμανσης, τοποθετήστε τους σωλήνες του αγάρ σε μια κεκλιμένη θέση να σταθεροποιήσει (μην επιτρέψτε στο μέσο για να αγγίξετε το βύσμα) έτσι ώστε μια μεγάλη επιφάνεια είναι προ για την καλλιέργεια των μικροοργανισμών. Αυτοί καλούνται ραπίσματα αγάρ.

Σημείωση. Εάν οι σωλήνες αγάρ πρόκειται να χρησιμοποιηθούν μόνο για τα ραπίσματα αγάρ, λιγότερος του μέσου απαιτείται στο σωλήνα από όταν πρόκειται να χρησιμοποιηθούν για την επένδυση.

17. Για να αποστειρώσουν μια μεγάλη φιάλη του αγάρ, θερμότητα για τριάντα λεπτά τέσσερις διαδοχικές ημέρες.