Υποδοχή στο μοριακό σταθμό!

Πρέπει να καταχωρήσετε προτού να μπορέσετε να ταχυδρομήσετε στα φόρουμ μας ή να χρησιμοποιήσετε τα προηγμένα χαρακτηριστικά γνωρίσματά μας. Κατάλογος τώρα! Ελεύθερος και γρήγορος του!

Ήδη καταχωρημένος; Αδεια εισόδου τώρα κατωτέρω.

Όνομα χρηστών:

Κωδικός πρόσβασης:

Με θυμηθείτε;

Ήδη καταχωρημένος και ξέχασε τον κωδικό πρόσβασής σας; Χτυπήστε κατωτέρω για να το ανακτήσετε.

Ανακτήστε το χαμένο κωδικό πρόσβασης

Ενώστε τώρα - είναι γρήγορο και ελεύθερο!

Ο μοριακός σταθμός είναι το μεγαλύτερο δίκτυο ερευνητών, επιστημόνων και εραστών επιστήμης οπουδήποτε!

Πρόσφατες θέσεις φόρουμ

Μαζική φασματομετρία

Τι είναι ένα μαζικό φασματόμετρο;

Ένα μαζικό φασματόμετρο είναι βασισμένο στο απλό γεγονός ότι οι διαφορετικές χημικές ουσίες έχουν τις διαφορετικές μάζες, και αυτό είναι τι καθορίζει ποιες χημικές ουσίες είναι παρούσες σε ένα δείγμα. Υπάρχουν πολλοί τύποι μαζικών φασματομέτρων που όχι μόνο αναλύουν τα ιόντα διαφορετικά αλλά τους διαφορετικούς τύπους προϊόντων ιόντων εντούτοις όλοι χρησιμοποιούν τα ηλεκτρικά και μαγνητικά πεδία για να αλλάξουν το μονοπάτι των ιόντων με κάποιο τρόπο.

Κατά τη διάρκεια της πρόσφατης δεκαετίας του '80 και της πρόωρης δεκαετίας του '90, δύο νέες μέθοδοι ιονισμού δειγμάτων ανάγκασαν τη μαζική φασματομετρία για να υποβληθούν σε μια επανάσταση biopolymer στην ανάλυση, δηλαδή ESI 38 και MALDI.39 ακριβώς πέρα από μια δεκαετία πριν, για πρώτη φορά, μαζικές spectrometric τεχνικές που θα μπορούσαν να μετρήσουν τις μοριακές μάζες των ποσοτήτων femtomole πρωτεϊνών παραπάνω από 100 kDa, συχνά καλύτερα από την ακρίβεια 0,01%, διατέθηκε ευρέως στους πρωτεϊνικούς φαρμακοποιούς. Αυτές οι μέθοδοι είναι και οι δύο επιτυχείς με διαμόρφωση των ιόντων από τα μεγάλα, ασταθή βιομόρια χωρίς σημαντική υποβάθμιση του καταλοίπου. Όχι μόνο είναι αυτοί και ευαίσθητες τεχνικές αλλά και ταχέα – και κράτη μέλη και φάσματα κρατών μελών/ακολουθίας κρατών μελών μπορεί να αποκτηθεί εντός δευτερολέπτων. ESI και MALDI, λόγω στις πολλές διαφορές τους, είναι συμπληρωματικά και πολλά biopolymer εργαστήρια έχουν πρόσβαση και στις δύο τεχνικές.

Προετοιμασία δειγμάτων: 2-διαστατικός ηλεκτροφόρηση και μαζική φασματομετρία

Ο χωρισμός, η απομόνωση και η προετοιμασία δειγμάτων για τις μαζικές spectrometric τεχνικές γενικά, περιλαμβάνουν το 2-de (ηλεκτροφόρηση 2- dimenisional), μια τεχνική που μπορεί να χωρίσει τουλάχιστον 5000 διαφορετικές πρωτεϊ'νες σε ένα ενιαίο πείραμα. Γενικά, το 2-de είναι σε θέση τις πρωτεϊ'νες μέσα σε μια ισοηλεκτρική σειρά σημείου (pI) 3,5–10 και των μοριακών μαζών που κυμαίνονται από 6 έως 300 kDa, καθώς επίσης και που είναι σε θέση να διακρίνει μεταξύ των μετα- translationally τροποποιημένων πρωτεϊνών (π.χ. phosphorylated) και των μη-τροποποιημένων συντρόφων τους. Μόλις χωριστούν, τα πρωτεϊνικά συστατικά αποκαλύπτονται από τις τεχνικές λεκιάσματος (π.χ. ασημένιος λεκές, φθορισμού λεκές, μπλε Coomassie) και μόλις τοποθετημένες μπορούν έπειτα να εξαχθούν από το πήκτωμα. Οι πρωτεϊ'νες δεν μπορούν εύκολα να διαχωριστούν με εκχύλιση από τα πηκτώματα χωρίς τη χρήση των απορρυπαντικών, τα οποία είναι καταστρεπτικά στη μαζική spectrometric ανάλυση επιπλέον, οι μεγάλες πρωτεϊ'νες τείνουν να είναι ετερογενείς (π.χ. ως αποτέλεσμα του glycosylation) και δεν κατέχουν έτσι ούτε μια μοριακή μάζα που μπορεί να αφορά την αντίστοιχη είσοδο σε μια βάση δεδομένων. Για να υπερνικήσει αυτά τα εμπόδια, το βήμα εκλεκτικής προσρόφησης τείνει να ολοκληρωθεί αφότου έχει αφομοιωθεί η πρωτεϊ'νη από ένα υδάτινο πλύσιμο ακετονιτριλίου ενός φορολογημένου κομματιού πηκτωμάτων. Αυτό αυξάνει την παραγωγή της εξαγωγής 5 και με τη χρησιμοποίηση μιας μεθόδου πέψης-ΠΗΚΤΩΜΑΤΩΝ χρησιμοποιώντας trypsin, που έχει περιγραφεί και χρησιμοποιείται ευρέως όπως δημοσιεύεται ή με τις δευτερεύουσες τροποποιήσεις, παράγει ένα κα-συμβατό δείγμα από το οποίο ένας πρωτεϊνικός προσδιορισμός μπορεί να γίνει. Το βήμα πέψης μπορεί να προηγηθεί από ένα προαιρετικό βήμα μείωσης και αλκυλοποίησης για να διασπάσει και να εμποδίσει τις γέφυρες δισουλφιδίου που υπάρχουν μεταξύ cysteine των υπολειμμάτων. Τα ρομποτικά συστήματα έχουν αναπτυχθεί για να αυτοματοποιήσουν την αποκοπή των πρωτεϊνικών σημείων από το 2Δ-πήκτωμα, για να πραγματοποιήσουν την επόμενη ενζυματική πέψη και για να μεταφέρουν τα δείγματα επάνω στα πιάτα στόχων μαλδη-κράτη μέλη για την αρχική ανάλυση κρατών μελών. Για πολλές εφαρμογές, τα πεπτίδια που ανακτώνται από τις πέψεις-ΠΗΚΤΩΜΑΤΩΝ απαιτούν τη συγκέντρωση και τον καθαρισμό πρίν αναλύονται από τη μαζική φασματομετρία ειδικά εάν ESI είναι η μέθοδος ιονισμού χρησιμοποιούμενη. Υγρό υψηλής απόδοσης φάσης
η χρωματογραφία (HPLC) είναι μια μέθοδος αυτό μια άλλη μέθοδος περιλαμβάνει τη χρήση ZipTips (millipore) (άκρες σιφωνίων που συσκευάζονται με C18 το υλικό) ή R2 υλικό ραντίσματος Poros (βιοσυστήματα Perseptive). Παρά τη διαδεδομένη αποδοχή του, οι περιορισμοί του 2-de περιλαμβάνουν τον αποκλεισμό των πολύ μικρών ή πολύ μεγάλων πρωτεϊνών, των πολύ όξινων ή πολύ βασικών πρωτεϊνών, καθώς επίσης και των υδροφοβικών πρωτεϊνών όπως οι πρωτεϊ'νες μεμβρανών. Θεωρείται αυτός
μόνο 20% των πήκτωμα-φορτωμένων πρωτεϊνών μπορεί να απεικονιστεί και να αναλυθεί. Αλλοι περιορισμοί είναι ότι το ποσό δείγματος που μπορεί να φορτωθεί είναι περιορισμένο προκαλώντας την αθέτηση
χαμηλές πρωτεϊ'νες συγκέντρωσης και επίσης ότι οι ο συνηθέστερα χρησιμοποιημένες τεχνικές λεκιάσματος έχουν τους μη γραμμικούς παράγοντες απάντησης. Στην πράξη, το 2-de είναι μια έντασης εργατικού δυναμικού διαδικασία που περιλαμβάνει τα βήματα χειρωνακτικού χειρισμού που προσφέρουν την ευκαιρία για τις ακαθαρσίες όπως η κερατίνη να μολύνουν τα δείγματα. Ένα 2$ο πήκτωμα θα διαρκέσει μια ημέρα που ολοκληρώνουν και περίπου έναν μήνα για μια πλήρη δομική ανάλυση από τα κράτη μέλη, αν και η αυτοματοποίηση μπορεί να βοηθήσει και το πρόβλημα μόλυνσης και να επιταχύνει την ανάλυση ως ένα ορισμένο βαθμό.

Εναλλακτικές πρωτεϊνικές τεχνικές χωρισμού

Οι εναλλακτικές, κα-συμβατές μέθοδοι πρωτεϊνικής προετοιμασίας είναι υπό ανάπτυξη αλλά κανένας τεχνολογία έχει προκύψει ως καθολική αντικατάσταση. Αυτές οι μέθοδοι στοχεύουν γενικά να διασυνδέσουν το πρωτεϊνικό δείγμα άμεσα στα κράτη μέλη/τα κράτη μέλη αναλύουν με αυτόν τον τρόπο την εξάλειψη των χρονοβόρων βημάτων προετοιμασιών δειγμάτων και της ανάγκης για μια προκαταρκτική ανάλυση κρατών μελών. Τριχοειδής ισοηλεκτρική εστίαση (τα θηεφ)-κράτη μέλη και η preparative ισοηλεκτρική εστίαση που ακολουθούνται από τον αποκλεισμό chromatography-MS μεγέθους είναι μέθοδοι που έχουν συγκριθεί σε βάθος με το 2-de από την άποψη του effciency χωρισμού, της μέγιστης ικανότητας, της ακρίβειας και της ευρωστίας, με τα πρώτα που εμφανίζονται η ευνοϊκότερη εναλλακτική λύση Η άμεση ανάλυση των σύνθετων μιγμάτων πεπτιδίων από ένα μίγμα πρωτεϊνών που χρησιμοποιούν on-line, υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης φάσης (το χπλθ)-κράτος μέλος/το κράτος μέλος έχει χρησιμοποιηθεί επιτυχώς ως εναλλακτική λύση 2DE και αυτό έχει οδηγήσει επάνω στην πολυδιάστατη χρωματογραφία εάν ο μεγαλύτερος χωρισμός πεπτιδίων είναι επιθυμητός πριν από τα κράτη μέλη/τις αναλύσεις κρατών μελών. Τα παραδείγματα της διαστατικής χρωματογραφίας δύο περιλαμβάνουν την ανταλλαγή ανιόντων ή κατιόντων που ακολουθείται από το HPLC φάσης και τη χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους που ακολουθούνται από το HPLC φάσης. Αλλη, εναλλακτική προσέγγιση ήταν να χρησιμοποιηθεί η συνδυασμένη solid-phase μικροϋπολογιστής-εξαγωγή μαζί με την τριχοειδή ηλεκτροφόρηση (CE) που συνδέεται με τα κράτη μέλη ESI/ta κράτη μέλη για την ανάλυση μιας tryptic αφομοίωσης συνολικής πρωτεϊ'νης. Αυτή η μέθοδος άντεξε οικονομικά το χωρισμό υψηλής ανάλυσης των τεμαχίων πεπτιδίων που επιτρέπει τον προσδιορισμό 80–90% των πρωτεϊνών σε αυτό το ιδιαίτερο ριβόσωμα ζύμης σύνθετο. Η ένωση των microfluidic συσκευών με τα κράτη μέλη είναι μια περαιτέρω στρατηγική που συνδυάζει το χειρισμό και το χωρισμό δειγμάτων, καθώς επίσης και τη διασύνδεση τακτοποιημένα με την ανάλυση νανο-εΣΗ-κράτη μέλη Μια διαφορετική προσέγγιση για την εκλεκτική πρωτεϊνική fractionation και προσδιορισμού τεχνολογία χρήσεων ProteinChip (Ciphergen) που υιοθετεί μια επιφάνεια συλλαμβάνει τη μέθοδο χρησιμοποιώντας τα αντισώματα ή τις χημικά τροποποιημένες επιφάνειες για να συλλάβει τις συγκεκριμένες κλάσεις των πρωτεϊνών που αναλύονται έπειτα από MALDI-MS. Αυτή η τεχνική, γνωστή ως ενισχυμένος επιφάνεια ιονισμός εκρόφησης λέιζερ (σελδη)- MS35, έχει τη μεγάλη δυνατότητα για τη σύγκριση της περιεκτικότητας σε πρωτεϊ'νη των διαφορετικών δειγμάτων.