Υποδοχή στο μοριακό σταθμό!

Πρέπει να καταχωρήσετε προτού να μπορέσετε να ταχυδρομήσετε στα φόρουμ μας ή να χρησιμοποιήσετε τα προηγμένα χαρακτηριστικά γνωρίσματά μας. Κατάλογος τώρα! Ελεύθερος και γρήγορος του!

Ήδη καταχωρημένος; Αδεια εισόδου τώρα κατωτέρω.

Όνομα χρηστών:

Κωδικός πρόσβασης:

Με θυμηθείτε;

Ήδη καταχωρημένος και ξέχασε τον κωδικό πρόσβασής σας; Χτυπήστε κατωτέρω για να το ανακτήσετε.

Ανακτήστε το χαμένο κωδικό πρόσβασης

Ενώστε τώρα - είναι γρήγορο και ελεύθερο!

Ο μοριακός σταθμός είναι το μεγαλύτερο δίκτυο ερευνητών, επιστημόνων και εραστών επιστήμης οπουδήποτε!

Πρόσφατες θέσεις φόρουμ

Αυτοματοποιημένη υποβάθμιση Edman

Οι ακολουθίες αμινοξέος μπορούν να καθοριστούν από την αυτοματοποιημένη υποβάθμιση Edman

Η σύσταση αμινοξέος του πεπτιδίου καθορίζεται.  Το πεπτίδιο υδρολύεται στο ιδρυτικό αμινοξύ του με τη θέρμανση του σε 6 ν HCl σε 110°C για 24 ώρες.  _ Στάνφορντ Μοορε και William Στεην δείχνω ότι αμινοξύ χυδρολυσατες μπορώ είμαι χωρίζω από ηονεξθχανγε χρωματογραφία στήλη σuλφονατεδ πολυστυρόλιο και ποσολογώ από αντι:δρώ αυτός με νηνχυδρην. 

Τα αμινοξέα μεταχειρίστηκαν αυτόν τον τρόπο δίνουν ένα έντονο μπλε χρώμα, εκτός από την πραλίνα, η οποία δίνει ένα κίτρινο χρώμα επειδή περιέχει μια δευτεροβάθμια αμινο ομάδα.  Η συγκέντρωση του αμινοξέος σε μια λύση είναι ανάλογη προς την οπτική απορροφητικότητα της λύσης μετά από να θερμάνει το με ninhydrin.  Αυτή η τεχνική μπορεί να ανιχνεύσει ένα μικρογραμμάριο (10nmol) ενός αμινοξέος, το οποίο είναι για το ποσό παρόν σε ένα thumbprint. 

Τόσο λίγα όπως ένα nanogram (pmol 10) ενός αμινοξέος μπορεί να ανιχνευθεί με τη βοήθεια του fluorescamine, το οποίο αντιδρά με την α-αμινο ομάδα ενός ιδιαίτερα φθορισμού προϊόντος.  Η ταυτότητα του αμινοξέος αποκαλύπτεται από την ένταση του ήχου εκλεκτικής προσρόφησής της, η οποία στην ένταση του ήχου του προσωρινού χώρου που χρησιμοποιείται για να αφαιρέσει το αμινοξύ από τη στήλη. 

Το αμινο-τελικό υπόλειμμα μιας πρωτεϊ'νης ή ενός πεπτιδίου μπορεί να προσδιοριστεί με το μαρκάρισμα του με μια ένωση που διαμορφώνει μια σταθερή ομοιοπολική σύνδεση. 

Το Fluorodinitrobenzene (FDNB) χρησιμοποιήθηκε αρχικά για αυτόν το λόγο από Frederick Sanger.  Το χλωρίδιο Dabsyl τώρα συνήθως χρησιμοποιείται επειδή διαμορφώνει τα έντονα χρωματισμένα παράγωγα που μπορούν να ανιχνευθούν με την υψηλή ευαισθησία.  Αντιδρά με α- nh2 η ομάδα για να διαμορφώσει ένα παράγωγο σουλφοναμίδης που είναι σταθερό υπό τους όρους που υδρολύουν τους δεσμούς πεπτιδίων. 

Αν και η μέθοδος dabsyl για το αμινο-τελικό υπόλειμμα είναι ευαίσθητη και ισχυρή, δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί επανειλημμένα στο ίδιο πεπτίδιο επειδή το πεπτίδιο υποβιβάζεται συνολικά στο βήμα όξινος-υδρόλυσης.  Το Pehr Edman επινόησε μια μέθοδο για το αμινο-τελικό υπόλειμμα και το από το πεπτίδιο χωρίς να αναστατώσει τους δεσμούς πεπτιδίων μεταξύ των άλλων υπολειμμάτων αμινοξέος.  Η υποβάθμιση Edman αφαιρεί διαδοχικά ένα υπόλειμμα τη φορά από το αμινο τέλος ενός πεπτιδίου.  Φαινυλικό isothiocyanate αντιδρά με η τελική αμινο ομάδα του πεπτιδίου για να διαμορφώσει ένα παράγωγο phenylthiocarbamoyl.  Κατόπιν, υπό τους mildy όξινους όρους, ένα κυκλικό παράγωγο του τελικού αμινοξέος ελευθερώνεται, το οποίο αφήνει ένα άθικτο πεπτίδιο μικρότερο από ένα αμινοξύ.

Οι αναλύσεις των πρωτεϊνικών δομών έχουν επιταχυνθεί εμφανώς από την ανάπτυξη των sequenators, η οποία είναι αυτοματοποιημένα όργανα για τον προσδιορισμό της ακολουθίας αμινοξέος.  Σε ένα sequenator υγρός-φάσης, μια λεπτή ταινία της πρωτεϊ'νης σε ένα περιστρεφόμενο κυλινδρικό φλυτζάνι υποβάλλεται στην υποβάθμιση Edman.  Τα αντιδραστήρια και η εξαγωγή των διαλυτών περνούν πέρα από την ακινητοποιημένη ταινία της πρωτεϊ'νης, και το πτχ-αμινο οξύ προσδιορίζω από την υψηλή υγρή χρωματογραφία (επίσης αποκαλούμενη υψηλής απόδοσης υγρή χρωματογραφία, HPLC). 

Ένας κύκλος της υποβάθμισης Edman πραγματοποιείται σε λιγότερο από δύο ώρες.  Από τις επαναλαμβανόμενες υποβαθμίσεις, η ακολουθία αμινοξέος περίπου πενήντα υπολειμμάτων σε μια πρωτεϊ'νη μπορεί να καθοριστεί.  Αέριο τα sequenators μπορούν να αναλύσουν picomole τις ποσότητες πεπτιδίων και πρωτεϊνών.  Αυτή η υψηλή ευαισθησία το καθιστά εφικτό να αναλύσει την ακολουθία ενός πρωτεϊνικού δείγματος που διαχωρίζεται με εκχύλιση από μια ενιαία ζώνη ενός πηκτώματος σδς-πολυαθρυλαμηδε.