Υποδοχή στο μοριακό σταθμό!

Πρέπει να καταχωρήσετε προτού να μπορέσετε να ταχυδρομήσετε στα φόρουμ μας ή να χρησιμοποιήσετε τα προηγμένα χαρακτηριστικά γνωρίσματά μας. Κατάλογος τώρα! Ελεύθερος και γρήγορος του!

Ήδη καταχωρημένος; Αδεια εισόδου τώρα κατωτέρω.

Όνομα χρηστών:

Κωδικός πρόσβασης:

Με θυμηθείτε;

Ήδη καταχωρημένος και ξέχασε τον κωδικό πρόσβασής σας; Χτυπήστε κατωτέρω για να το ανακτήσετε.

Ανακτήστε το χαμένο κωδικό πρόσβασης

Ενώστε τώρα - είναι γρήγορο και ελεύθερο!

Ο μοριακός σταθμός είναι το μεγαλύτερο δίκτυο ερευνητών, επιστημόνων και εραστών επιστήμης οπουδήποτε!

Πρόσφατες θέσεις φόρουμ

 

Πρωτόκολλα DNA

Εγκυκλοπαίδεια DNA

Βιοπληροφορική DNA

Φόρουμ DNA

DNA Blog

Ειδήσεις DNA

Βιβλία DNA

 

Πρωτόκολλο απομόνωσης DNA Genomic

Επιλογή μιας μεθόδου καθαρισμού DNA Genomic

Ο στόχος της genomic απομόνωσης DNA εξαρτάται από αυτά που οι εφαρμογές του DNA μετά από την απομόνωση. Η αγνότητα, η πηγή, η ποσότητα και η ποιότητα του DNA είναι όλα τα ζητήματα που πρέπει να αντιμετωπιστούν πριν από την genomic εξαγωγή DNA. Ολόκληρος ένας πλήθος των διαφορετικών μεθόδων, οι τεχνολογίες και οι εξαρτήσεις είναι διαθέσιμοι τώρα στους ερευνητές για να απομονώσουν το genomic DNA από τα κύτταρα.

• Ποσότητα του DNA που απαιτείται
• Μοριακό βάρος και μέγεθος του DNA
• Αγνότητα του DNA που απαιτείται
• Προς τα κάτω εφαρμογές του DNA
• Διαθέσιμος χρόνος
• Ευκολία της τεχνικής ή της μεθόδου εξαγωγής DNA
• Δαπάνη ή χρήματα διαθέσιμη

Συγκεκριμένες μέθοδοι εξαγωγής home-grown ή DNA εργαστηρίων συχνά αρκετά καλά για τα εργαστήρια που τις έχουν αναπτύξει και χρησιμοποιούν τακτικά αυτά τα πρωτόκολλα.

Σημείωση εντούτοις αυτή η τυποποίηση έλλειψης μεθόδων. Επίσης η παραγωγή DNA και η ποιότητα DNA είναι όχι πάντα αναπαραγώγιμες από ένα άτομο στο επόμενο.

Υπόβαθρο στην απομόνωση και τον καθαρισμό DNA Genomic

Γενικά, όλες οι μέθοδοι περιλαμβάνουν τη διάσπαση και τη λύση των κυττάρων. Αυτό ακολουθείται μερικές φορές από την αφαίρεση του RNA (με RNAses, το άλας ή άλλες μεθόδους). Επιλέγοντας ποια μέθοδος στη χρήση θα εξαρτηθεί από πολλούς παράγοντες επιλογής συμπεριλαμβανομένου:

Το DNA απομονώνεται από τις πρωτεϊ'νες με διάφορες μεθόδους συμπεριλαμβανομένης της πέψης των πρωτεϊνών από την ενζυμική πρωτεϊνάση Κ. Proteins αφαιρείται στη συνέχεια με salting-out, την οργανική εξαγωγή, ή τη δέσμευση του DNA σε μια solid-phase υποστήριξη (όπως μια anion-exchange τεχνολογία στηλών ή πυριτίου).

Το DNA ανακτάται τελικά από την πτώση αιθανόλης ή isopropanol την πτώση.

Γενικά, ο χωρισμός του DNA από τα κύτταρα και τα κυψελοειδή συστατικά μπορεί να διαιρεθεί σε τέσσερα στάδια:

1. Διάσπαση κυττάρων
2. Λύση του κυττάρου
3. Αφαίρεση των πρωτεϊνών και των μολυσματικών παραγόντων
4. Αποκατάσταση του DNA

Σε μερικά genomic πρωτόκολλα απομόνωσης DNA, τα στάδια 1 και 2 συνδυάζονται.

Υλικά που απαιτούνται για τη μέθοδο εξαγωγής DNA Genomic

Προσωρινός χώρος λύσης για τη συνταγή DNA Genomic:

50 mM τρης- HCl, pH 8,0
EDTA 50mM
1% SDS
10mM NaCl

Μέθοδος καθαρισμού DNA Genomic από τα δείγματα ιστού

1. Επιλέξτε το δείγμα ιστού στη χρήση. Σιγουρευτείτε ότι το δείγμα προετοιμάζεται κατάλληλα και κρατιέται στον πάγο. Εάν το δείγμα δεν θα χρησιμοποιηθεί αμέσως για την εξαγωγή DNA, κατόπιν τα δείγματα πρέπει να καταχωρηθούν κατάλληλα είτε στον ψυκτήρα -20°C για το μεγαλύτερο χρονικό διάστημα είτε 4°C για τη βραχυπρόθεσμη (λίγες ώρες) χρήση.
2. Ιστός αποκοπών στα μικρότερα κομμάτια. Για το συκώτι ή άλλο μαλακό ιστό, μην ανησυχήστε για την παραγωγή των λεπτών κομματιών.
3. Προσθέστε τον ιστό σε ένα προψυγμένο (ξηρός πάγος) κονίαμα, προσθέστε αμέσως το Ν2 υγρού αζώτου.
4. Αρχίστε να αλέθετε τον ιστό στη λεπτή σκόνη. Προσθέστε περισσότερο Liq. Ν2 όπως απαιτείται. Η κρύα σκόνη μεταφοράς στο σωλήνα 30 μιλ., άδεια εκπωμάτισε έτσι το Ν2 μπορεί να εξατμίσει.
5. Προσθέστε 9 μιλ. του ανά-θερμαμένου προσωρινού χώρου λύσης (5°C) και επαναρτήστε ήπια τη σκόνη.
6. Προσθέστε το ul 100 10mg/to μιλ. της πρωτεϊνάσης Κ, (δηλ., 100 ug στη λύση). Επωάστε 55°C 1-18 ώρες. Μίγμα ήπια περιοδικά. Προσθέστε το ul 100 της πρωτεϊνάσης Κ μετά από πρώτες 2 ώρες, βέλτιστο: 3 ώρες που προσθέτουν την πρωτεϊνάση Κ στις 1,5.
7. Μεταχειριστείτε το δείγμα πολύ ήπια. Προσθέστε 1 μιλ. 3M Na0Ac (pH 4.0), 10 μιλ. της θερμής φαινόλης (55°C), μίγμα ήπια αλλά throughly για 5-10 λεπτά.
8. Υποβάλτε τα δείγματα σε φυγοκέντρωση για 15 λεπτά.
9. Επαναλάβετε τη θερμή εξαγωγή φαινολών.
10. Απόσπασμα με την ίση φαινόλη έντασης του ήχου (10ml): CIA (CIA μερών 1 μέρους phenol:1: CIA = 23 chloroform:1 isoamyl μέρη οινοπνεύματος μερών)
11. Απόσπασμα με την ίση εξαγωγή CIA έντασης του ήχου (10ml)
12. Η ανώτερη φάση πρέπει να είναι σχετικά σαφής, εάν περιέχει τα μεγάλα άσπρα πανιά, ή είναι πολύ γαλακτώδης, (ι) επωάζει σε 68°C 15 λεπτά, και το εκχύλισμα επαν-φαινολών, (II) έναρξη πάλι, αλλά επωάζει περισσότερο με το PK.
13. Ανώτερη φάση μεταφοράς στο νέο σωλήνα. Προσθέστε 2 εντάσεις του ήχου της κρύων αιθανόλης και του μίγματος ήπια (άλας: Na0Ac είναι ήδη στη λύση). Χρησιμοποιώντας έναν γάντζο και ένα σφραγισμένο pasteur εισάγετε στο σιφώνιο το DNA στροφίων έξω. Σκουπίστε από την υπερβολική αιθανόλη στην πλευρά των σωλήνων. Επαναρτήστε σε 2-5 mls TE. Σιγουρευτείτε ότι το DNA διαλύεται εντελώς (άδεια στον ευγενή δονητή.)
14. Προσθέστε το μίγμα RNase (100 ug RNase Α, 10U RNaseT1). Επωάστε 30 ελάχιστο 37°C. ** θα μπορούσατε να προσθέσετε το RNase πριν από την πρωτεϊνάση Κ, να επωάσετε σε 37°C για 1 ώρα και να αρχίσετε έπειτα την πέψη πρωτεϊνάσης. Θα μπορούσατε έπειτα να πηδήσετε το βήμα 15 -.
15. Προσθέστε 100 ug της πρωτεϊνάσης Κ, incubae 37°C 30 λεπτά.
16. Προσθέστε την 1/10 ένταση 3M Na0Ac, εκχύλισμα φαινολών μιά φορά, απόσπασμα Phenol:CIA δύο φορές, απόσπασμα CIA μιά φορά.
17. Προσθέστε 2,5 εντάσεις του ήχου EtOH, βαλμένος σε -20°C 30 λεπτά υποβάλλουν 20 λ. σε φυγοκέντρωση.
18. Το πλύσιμο καλά με 70%, αφαιρεί όλο EtOH. Εάν ξεραίνετε, όχι πέρα από ΞΗΡΟ.
19. Επαναρτήστε προσεκτικά, αργά in1-2mls TE (προσωρινός χώρος τρης-εδτα). (1x ή 0.1x).

Πρωτόκολλα και μέθοδοι άλλα DNA

Οδηγός κλωνοποίησης DNA

Ηλεκτροφόρηση πηκτωμάτων DNA

Η ενζυμική πέψη περιορισμού - όλοι εσείς πρέπει να ξέρεϊ

Πρωτόκολλο απομόνωσης DNA Genomic

Απομόνωση DNA Baceteria

Μετασχηματισμός DNA - περιέχει την ιστορία του DNA

Βρείτε άλλα πρωτόκολλα στον εξωτερικό κατάλογο αρχείων των στοιχείων συμπεριφοράς πρωτοκόλλων DNA μας ή δείτε τα πρωτόκολλα DNA μασ.

Σχετικός:

Πρωτόκολλα DNA Microarray

Pcr πρωτόκολλα

Βιοπληροφορική DNA

Βιοπληροφορική DNA επίσκεψησ.

DNA-SHETJKO'S ειδήσεις

Ειδήσεις DNA