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siRNA Protokolle und RNAi Protokolle

siRNA Transfection Protokoll

 siRNA transfection Protokoll: Transfect 6 wohle Platten

1. wenden Sie erste siRNA Behandlung an, wenn Zellen confluent 60% sind (Maß confluency mit Voltmeter); überziehen Sie Zellen 1.5x10^6 am Freitag, transfect am Mittwoch. Für jedes Vertiefung:

1. Verdünnen Sie das 2.5 ug siRNA (20uM ist ungefähr 0.26ug/ul. UL 9.62 pro gut einer Platte 6-well) mit Kulturmedia zu einem abschließenden Datenträger UL 100. USE Sperre Pipettespitzen. Sie können eine Vorlagenmischung bilden, wenn alle Vertiefungen transfected mit dem gleichen siRNA sind. Tun Sie dies in einem sterilen sterilisierten Plastikgefäß.
2. Fügen Sie 12 UL RNAiFect (Qiagen - oder jedes mögliches andere RNS transfection Reagens, sehen Protokoll des Herstellers), pro siRNA mastermix Gefäß hinzu und mischen Sie leicht.
3. Brüten Sie für 15 Minuten bei der Raumtemperatur aus, um komplizierte Anordnung zwischen siRNA und Lipiden zu erlauben.
4. Saugen Sie Media von den Zellen an und fügen Sie frische Media 900ul jedem gut hinzu.
5. Fügen Sie siRNA Mischung (UL 112 pro Vertiefung) tropfenweise während leicht wirbelnde Platte hinzu.
• Wenden Sie zweite siRNA Behandlung 2 Tage später, nach den Jobsteps an, die oben umrissen werden. Das zweite transfection fügt Abnahmeausdruck des Gens des Interesses hinzu.

Andere siRNA Protokolle

Sehen Sie auch unser siRNA und RNAi Seite


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