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Copyright 2007 - Molekulare Station
RNS Gele sind benutzt worden, damit Dekaden aussondern und qualitativ die Qualität von RNS lokalisiert von den Proben festsetzen. Wenn Sie nicht sicher sind, welche RNS Prüfung ist:
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hören zu einer ausführlichen RNS Erklärung! und sehen Sie unseren RNS-Enzyklopädienartikel.
Nach Lokalisierung der RNS-Proben, wird die Qualität der lokalisierten RNS-Vorbereitung normalerweise durch Elektrophorese auf einem denaturierenagarosegel festgesetzt. Obgleich die Resultate hauptsächlich qualitativ sind, können Sie etwas Informationen über den Ertrag der RNS außerdem erhalten.
Gele denaturierend, werden verwendet, weil RNS neigt, sich nach sich zu falten und umfangreiche und beständige Sekundärstruktur über die intramolekulare niedrige Paarung zu bilden. Diese Sekundärstruktur von RNS verhindert, dass sie hauptsächlich entsprechend seiner Größe migriert.
Überprüfen Sie, ob Sie eine positive Steuerung der RNS auf dem Gel einschließen, im Falle, dass Sie ungewöhnliche Resultate erhalten, können Sie dann feststellen, ob das Problem mit dem Gel war oder ein Problem mit der RNS war, die Sie analysieren. Sie können Molekulargewichtmarkierungen der RNS, eine RNS-Probe auch benutzen, die bekannt ist, um intakt zu sein, oder beide, können zu diesem Zweck verwendet werden.
RNS-Gele werden mit dem befleckenden Äthidiumbromid sichtbar gemacht, während Äthidiumbromid zwischen der Sekundärstruktur der RNS-Moleküle einschiebt und erlaubt, dass RNS unter UVlicht gesehen wird.
RNS wird durch Gelelektrophorese ausgesondert (normalerweise Agarosegelelektrophorese). Nach dem Betrieb eines RNS-Gels, können Sie einen Nordfleck mit folgender Übertragung auf Membrane, Hybridation mit Prüfspitze und schließlich Abfragung leiten. Oder einfach (und viel schneller), Fleck für RNS unter Verwendung des Äthidiumbromids oder SYBR (oder ähnliche Färbung -, die als sie besser ist, ist ungiftig und sicherer).
Da Nordflecken viel langwieriger als RNS-Gele und Echtzeit-PCR abzuschließen sind, sind sie nicht benutzte soviel wie RNS-Gele.
Die RNS-Gelelektrophorese und seine Varianten werden in der Molekularbiologieforschung verwendet:
Die Nachteile der Anwendung von RNS-Gelelektrophorese umfaßt:
Die Vorteile der RNS Gele umfassen:
Um die Vollständigkeit Ihrer RNS zu überprüfen sollten Sie eine „Nordfleck“ Analyse tun. Um dieses zu vollenden müssen Sie ein denaturierengel laufen lassen.
Für Mini-Gele zu den Midi-Gelen des RNS-Gebrauches: Bilden Sie 50 mL-100mL
Für Groß-Gele bilden Sie 400 ml.
Für das Gel 100mL (am geläufigsten laufen gelassen) müssen Sie 1g von Agarose hinzufügen, um 1% Agaroselösung zu bilden.
| Zu sich vorbereiten: | 500mls | 750 mls | 1.5 Liter |
1X E Buffer (50X) - unten |
10 ml | 15 ml | 30 ml |
| 0.66M Formaldehyd (1/19 von Vol.) | 26.3 ml | 39.5 ml | 79 ml |
Fügen Sie das folgende hinzu:
Fügen Sie hinzu:
Lassen Sie immer ein Agarosegel Ihrer RNS laufen, um die Qualität festzusetzen. Bauen nicht nur nur UVspektralphotometrieresultate.
* Benutzen Sie DEPC behandeltes Wasser und gebackene Glaswaren für alle Jobstepps. Die Buffer müssen RNase frei sein oder Milipore gereinigtes Wasser benutzen, wenn Sie in einem Ansturm sind. RNase ist überall! Tragen Sie Handschuhe, gebackene Glaswaren des Gebrauches nur oder reinen Plastik. DePC Festlichkeit Ihr Wasser, Buffer (ausgenommen Tris). Geben Sie sehr acht.
Wenn Sie aktuell eine bevorzugte Methode für den Betrieb von RNS haben, fahren Sie fort, sie zu benutzen.
Behandeln Sie und Pfostenprobleme oder -fragen über RNS Gele im RNS Protokoll-Forum.
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