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hören zu einer ausführlichen Nordfleck-Erklärung!
Das Nordbeflecken ist eine befleckende Technik der RNS, die 1977 von Alwine et al. an der Universität von Stanford entwickelt wurde (Referenz: 1). Es wurde nach der südlichen Flecktechnik benannt, die für DNA befleckt, erfunden von Edwin M., das 1975 südlich ist. Westlicher Fleck, eine Methode für das Beflecken für Proteine ist auch ein Spiel auf dem südlichen benennenden Fleck und wurde 1981 benannt (Referenz: 2).
Nordanalyse trotz seines Alters in der Hightech- Welt von Echtzeit-PCR, von Nukleaseschutzproben (RPAs) und von Microarrays, ist noch für die Abfragung und die quantitative Bestimmung der mRNA-Stufen das Gold-Standard. Dieses ist, weil Nordfleckanalyse einen direkten Vergleich des Kurier RNS-Überflußes zwischen Proben auf einer einzelnen Membrane erlaubt.
Im Nordfleck ist der Hauptunterschied zwischen den anderen befleckenden Techniken, dass RNS der Faktor ist, der entdeckt wird. Auch wegen der Tatsache, dass RNS normalerweise single-stranded ist, erstellt er komplizierte Sekundärstrukturen, die seine Systemumstellung beeinflussen und Bedingungen, folglich, denaturierend verwendet werden, um die Gele laufen zu lassen (anders als südliches).
RNS wird durch RNAgelelektrophorese (normalerweise Agarosegelelektrophorese), folgende Übertragung auf Membrane, Hybridation mit Prüfspitze und schließlich Abfragung ausgesondert.

Ähnlich dem südlichen Beflecken, können die Hybridationprüfspitzen DNA oder RNS im Nordbeflecken sein.
Eine Variante der Prozedur, die als der Rücknordfleck bekannt ist, wurde gelegentlich (obgleich, selten) verwendet. In dieser Prozedur ist das Substrat, das Nukleinsäure (das zur Membrane hinzugefügt wird), eine Ansammlung lokalisierte DNA-Fragmente und die Prüfspitze ist, die von einem Gewebe extrahierte und radioaktiv beschriftete RNS.
Der Gebrauch von DNAmicroarrays, die weit verbreiteten Gebrauch Ende der Neunzigerjahre und frühen 2000s geerbt haben, ist der Rückprozedur, dadurch, dass sie den Gebrauch von den lokalisierten DNA-Fragmenten miteinbeziehen, die zu einem Substrat hinzugefügt werden und Hybridation mit einer Prüfspitze entsprechender, die von der zellularen RNS gebildet wird. So überwachte die Rückprozedur, obwohl ursprünglich selten, aktiviert der Ein-an-einzeit Studie des Genausdrucks unter Verwendung der Nordanalyse, zum in den ein Profil erstellenden Genausdruck zu entwickeln, in dem viele (vielleicht alle) der Gene in einem Organismus ihren Ausdruck haben können
Nordflecken sind in den meisten Bereichen durch Echtzeit-PCR-und Microarrayansätze ersetzt worden. Er ist nicht zu den klinischen oder Diagnosezwecken häufig benutzt.
Das Nordfleckprotokoll und seine Varianten werden jedoch in der Molekularbiologieforschung verwendet:
Die Nachteile der Anwendung des Nordbefleckens umfassen:
Die Vorteile der Nordflecken umfassen:
Wie erwähnt, umfassen die Jobstepps im Nordbeflecken:
* *Right, vor der Anwendung, fügen 1000ug denaturierte RNase frei Hefe 5000ug RNS CT-DNA-(Hitze zu 95o, damit Minute 3 denaturiert) hinzu
WÄSCHE: 2X SSPE + 0.1% SDS (500 mls) 50 mls 20X 5 mls 10% SDS= 0.1% SDS
Sehen Sie RNS Lokalisierung und Reinigung
Nach der Isolierung von RNS, muss die RNS heraus auf einem Gel (normalerweise Agarose) getrennt werden.
sehen Sie RNS-Gele
Nach dem Betrieb des RNS-Gels, waschen Sie das Gel mit dem destillierten Wasser, das auf posiblotter gesetzt wird.
Schichten sind von oben bis unten:
Klemmplatte an und stellen sicher, dass es eine gute Dichtung gibt. Verwenden Sie 75-80 Millimeter Hektogramm Druck für 1 Stunde oder mehr.
Beflecken Sie die trockene Membrane
Hybridisieren Sie 36-48 Stunden lang dann Washington-.
Wenn Sie aktuell eine bevorzugte Methode für die Isolierung von RNS haben, fahren Sie fort, sie zu benutzen.
Lassen Sie immer ein Agarosegel Ihrer RNS laufen, um die Qualität festzusetzen. Bauen Sie nicht nur auf Spektralphotometrieresultate.
* Benutzen Sie DEPC behandeltes Wasser und gebackene Glaswaren. Diese Lösung absolut muss RNase positiv frei sein. RNase ist überall! Tragen Sie Handschuhe, gebackene Glaswaren des Gebrauches nur oder reinen Plastik. DePC Festlichkeit Ihr Wasser, Buffer (ausgenommen Tris). Geben Sie sehr acht.
Wenn Sie aktuell eine bevorzugte Methode für die Isolierung von RNS haben, fahren Sie fort, sie zu benutzen.
Behandeln Sie und geben Sie Fragen über dieses im Nordfleck-Forum bekannt.
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