Beständige Transfection Protokolle

Das AfCS verwendet antisense Technologie, um das Signalisieren des Proteinausdruckes in den ROHEN 264.7 Makrophage-wie Zelle Zeile zu manipulieren. Dieses kann durch das transfection der Gen-spezifischen antisense Oligonucleotides (ASOs) erzielt werden. Die folgende Prozedur bezieht das transfection von ASOs in ROHE 264.7 Zellen mit FuGENE 6 transfection Reagens mit ein. Nachher transfected die lokalisierte Gesamt-RNS oder das Protein von diesen Zellen können verwendet werden, die Stufe von mRNA oder Protein Knockdown festzusetzen, beziehungsweise. - [gelesener Antisense Oligonucleotide Transfection der ROHEN 264.7 Zellen mit FuGENE 6 in einem Teller 24-Well]

Pulsiertes elektrisches fängt kann verwendet werden, DNA in eine breite Vielzahl der Tierzellen einzuführen auf. Electroporation funktioniert gut mit Zelle Zeilen, die zu anderen Techniken brechend sind, wie KalziumPhosphat-DNA coprecipitation. Aber, wie mit anderen transfection Methoden, müssen die optimalen Bedingungen für das Electroporating DNA in ungetestete Zelle Zeilen experimentell festgestellt werden. - [gelesene DNA Transfection durch Electroporation]

CHO Lec3.2.8.1 Zellen haben 4 unabhängige Veränderungen im N und O glycosylation Bahnen. Wenn sie mit Alpha-Glukosidase I dem Hemmnis gezüchtet werden, das Nbutylist, sind die Glucoproteide, die CHO Lec3.2.8.1 in den Zellen produziert werden, gegen Endo H Verdauung vollständig empfindlilch. Endo H zerspaltet das chitobiose und läßt ein einzelnes N-gebundenes N-acetylglucosamine pro Site, die für Wartung der Proteinlöslichkeit und der speziellen Carbprotein Interaktionen, wie zwischen des ersten N-Acetyl Glukosamin Überrests und des tryp ideal ist. - [gelesene Einrichtung von beständigem Transfectant des CHO Lec Zellen Protokolls]

Transfected beständig die Zellen, festgelegt in den ersten zwei Stadien der Prozedur, werden verursacht für Ausdruck des Zielgens. Nach dem Ernten und Lysis werden die lysates durch SDS-PAGE und das Immunoblotting analysiert. - [gelesenes Tetracyclin als Regler durch Induktion erhältlichen Gen-Ausdruckes III]

Protokoll benutzt ein autoregulatory System, in dem das transcriptional Transport-Aktivator tTA seinen eigenen Ausdruck und den eines Zielgens antreibt. Das erste Stadium der Prozedur beschreibt, wie man beständige Zeilen der Zellen NIH-3T3 festlegt, die entweder tTA alleine oder tTA und das Tetracyclin-geregelte Zielgen ausdrücken. - [gelesenes Tetracyclin als Regler des durch Induktion erhältlichen Gen-Ausdruck Protokolls]

Dieses Stadium der Prozedur beschreibt das transfection mit Zielgenen der Zelle Zeilen, die bereits durch Induktion erhältliches tTA ausdrücken. In diesem Beispiel sind die Zielgene transfected auf einem Plasmid, das puromycin Widerstand als auswählbare Markierung trägt. - [gelesenes Tetracyclin als Regler durch Induktion erhältlichen Gen-Ausdruck Protokolls II]