Kalziumphosphattransfection Protokolle

Diese Kalziumphosphattransfection Methode funktioniert gut in den Zelle Zeilen, die 1) in hohem Grade umgewandelt sind und 2) im Anhänger (Hela-, U2OS, erhalten SAOS2, AdAH, NPC-KT und von transfection Leistungsfähigkeit 20% bis 100% abhängig von der Zelle Zeile). Arbeiten gut für vorübergehende Experimente aber Vorkehrungen sollten im Design und in der Deutung der Experimente benutzt werden, die unten auf der Diskussion basieren. Arbeitet auch sehr gut für das Festlegen der beständigen Zelle Zeilen. Diese Methode ist für die Menge des Inputplasmids ziemlich empfindlich. - [Gelesene Kalziumphosphattransfection Methode]

Dieses Protokoll, basiert auf der venerable Methode von Graham und von van Der Eb (1973). Die Prozedur wird hauptsächlich verwendet, um beständige Zeilen der Zellen festzulegen, die chromosomal integrierte Exemplare von tragen, transfected DNA. - [gelesenes Kalzium-Phosphat-vermitteltes Transfection der Zellen mit High-molecular-weight Genomic DNA]

Kalziumphosphat bildet einen unlöslichen Niederschlag mit DNA, die zur Zelle Oberfläche anbringt und in die Zellen durch endocytosis genommen wird. Das Protokoll wird leicht für Gebrauch mit anderen Typen Zellen angepaßt, anhaftend und nonadherent. Dieses Protokoll ist eine geänderte Version einer Methode, die et al. durch Jordanien veröffentlicht wird (1996) wer rigoros optimierte Kalzium-Phosphat-gegründete transfection Methoden für chinesische Hamstereierstockzellen und die Zeile 293 der menschlichen embryonalen Nierezellen. - [gelesenes Kalzium-Phosphat-vermitteltes Transfection der Eukaryotic Zellen mit Plasmid DNAs]

Dieses Protokoll beschreibt zwei transfection Methoden für das Ausdrücken des GFP-etikettierten Actins in den Primärneuronen. Die Methode des Lipidreagens DOTAP (Roche Diagnose) produziert das Actin-GFP-Ausdrücken der hippocampal Neuronen, die gut während der langen Perioden in der Kultur überleben. Die Kalziumphosphatmethode kann an transfect Neuronen sein, die bereits auf Deckgläsern in vitro gewachsen sind. Die Transfected Zellen, die für Belichtung verwendbar sind, können in den Kulturen in vitro erhalten werden bis 15 Tage. - [gelesene Transfecting kultivierte Hippocampal Neuronen mit einem Actin-GFP Plasmid]

Dieses Protokoll beschreibt transfection von Plasmid DNA in hippocampal hauptsächlichneuronen mit DNA/calcium-phosphate (CaPO4) coprecipitation. Der exakte pH des transfection Mediums und die Ausbrütungzeit der Zellen mit dem Kopräzipitat sind für reproduzierbares und leistungsfähiges transfection kritisch. Sobald diese Parameter für ein gegebenes Plasmid optimiert werden, wird die Methode leicht für transfection anderer hergestellter Zelle Zeilen angepaßt. - [gelesenes Transfection der Hippocampal Neuronen mit Plasmid DNA mit Kalziumphosphat Coprecipitation]