Kalziumphosphattransfection-Protokolle

Diese Kalziumphosphattransfectionmethode funktioniert gut in den Zellformen, die 1) in hohem Grade umgewandelt sind und 2) im Anhänger (Hela-, U2OS, erhalten SAOS2, AdAH, NPC-KT und von Transfection-Leistungsfähigkeit 20% bis 100% abhängig von der Zellform). Arbeiten gut für vorübergehende Experimente aber Vorkehrungen sollten im Entwurf und in der Deutung der Experimente benutzt werden, die auf der Diskussion unten basieren. Arbeitet auch sehr gut für das Generierung der beständigen Zellformen. Diese Methode ist für die Menge des Inputplasmids ziemlich empfindlich. - [Gelesene Kalziumphosphattransfection-Methode]

Dieses Protokoll, basiert auf der ehrwürdigen Methode von Graham und von van Der Eb (1973). Die Prozedur wird hauptsächlich verwendet, um beständige Zeilen der Zellen festzulegen, die chromosomal integrierte Exemplare der transfected DNA tragen. - [Gelesener Kalzium-Phosphat-vermittelter Transfection der Zellen mit High-molecular-weight Genomic DNA]

Kalziumphosphat bildet einen unlöslichen Niederschlag mit DNA, die zur Zellenoberfläche anbringt und in die Zellen durch endocytosis genommen wird. Das Protokoll wird leicht für Gebrauch mit anderen Typen Zellen angepasst, anhaftend und nonadherent. Dieses Protokoll ist eine geänderte Version einer Methode, die et al. durch Jordanien veröffentlicht wird (1996) wer rigoros optimierte Kalzium-Phosphat-gegründete Transfectionmethoden für chinesische Hamstereierstockzellen und die Zeile 293 der menschlichen embryonalen Nierezellen. - [Gelesener Kalzium-Phosphat-vermittelter Transfection der Eukaryotic Zellen mit Plasmid DNAs]

Dieses Protokoll beschreibt zwei Transfectionmethoden für das Ausdrücken des GFP-etikettierten Actins in den Primärneuronen. Die Methode des Lipidreagens DOTAP (Roche Diagnosen) produziert das Actin-GFP-Ausdrücken der hippocampal Neuronen, die gut während der langen Zeitspannen in der Kultur überleben. Die Kalziumphosphatmethode kann zu den transfect Neuronen angewendet werden, die bereits auf Deckgläsern in vitro gewachsen sind. Die Transfected Zellen, die für Darstellung verwendbar sind, können in den Kulturen in vitro erhalten werden bis 15 Tage. - [Gelesene Transfecting kultivierte Hippocampal Neuronen mit einem Actin-GFP Plasmid]

Dieses Protokoll beschreibt Transfection von Plasmid DNA in hippocampal hauptsächlichneuronen unter Verwendung DNA/calcium-phosphate (CaPO4) des coprecipitation. Der exakte pH des Transfectionmediums und die Ausbrütungzeit der Zellen mit dem Kopräzipitat sind für reproduzierbaren und leistungsfähigen Transfection kritisch. Sobald diese Parameter für ein gegebenes Plasmid optimiert werden, wird die Methode leicht für Transfection anderer hergestellter Zellformen angepasst. - [Gelesener Transfection der Hippocampal Neuronen mit Plasmid DNA unter Verwendung des Kalziumphosphats Coprecipitation]