Laser erfassen Microdissection Protokolle

Protokoll für 2-D Polyacrylamidgelelektrophorese. Einschließt t: 50 Zerstörung-Buffer ml-IEF; laufender Buffer der Elektrophorese-10X (10 L); 30% Acrylamid-Vorrat (1 Liter); Trennen des Acrylamid-Gels; 50 ml-Gleichgewichtherstellung-Buffer I; 50 ml-Gleichgewichtherstellung-Buffer II; Übergangsbuffer; Beispielvorbereitung; Gewebe-Verarbeitung; Reswelling; Vorbereiten Sie Steigung-Acrylamid-Gel d- (9-18%); Übertragung und Sequenziell ordnen der Proteine. - [Gelesenes 2-D Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese-Protokoll]

Drei Ambion Installationssätze benutzt, um spezifische miRNAs quantitativ zu bestimmen und differenzialen miRNA Ausdruck in den verschiedenen Mäusegehirnregionen und in den Zellentypen zu entdecken, die durch Laser-Sicherung microdissection (LCM) lokalisiert. Diese Techniken können am Studieren von miRNA in anderer Sorte, in Geweben und in Zellentypen angewendet werden. Einschließt t: Erhalten Sie Laser-Sicherung Microdissected Proben; Lokalisieren Sie miRNA von den LCM Proben; Quantitativ bestimmen Sie miRNA durch qRT-PCR. - [Gelesen entdecken Sie und quantitativ bestimmen Sie MicroRNA in den Laser-Sicherung Microdissection Proben]

Nach Fixierung immunostained gefrorene Kapitel unter RNase-freien Bedingungen unter Verwendung einer schnellen dreistufigen Streptavidinbiotin Technik, die von der Dehydratisierung gefolgt. Die immunostained Kapitel sind zu LCM betriebsbereit. Einschließt t: Entwicklung von Immunem-LCM. - [Gelesenes Sicherung Immun-Laser Microdissection Protokoll]

Protokoll für Immunoblot. Einschließt t: Beflecken und Laser-Sicherung Microdissection; Protein-Trennung durch Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese; Elektrophoretische Übertragung auf eine Membrane (Nylon, PVDF oder Nitrozellulose); Primär- und Sekundärantikörper-Ausbrütungen; Sichtbarmachung. - [Gelesenes Immunoblot Protokoll]

Die nützlichen Techniken, zum von Unterbrechung der Gewebestruktur in der Analyse des Genausdrucks zu verhindern sind LCM und LDM. Während sie fachkundige Mikroskope und Systeme benötigen, sind sie in der frisch-schneiden gefrorene Gewebekapitel können unter Verwendung eines allgemeinen histologischen Flecks microdissected entweder ähnlich (wie H&E) oder durch das Beflecken mit Leuchtstoff konjugierten Antikörpern. Das LCM System durch Arcturus mit.einbezieht… ezieht - [Gelesenes immunofluoreszentes Beflecken für den Laser Microdissection des einzelnen Zellen-Protokolls]

LCM verwendet einen Infrarotlaser, der in ein Standardmikroskop integriert. Eine transparente Schutzkappe angebracht zu einer thermoplastischen transparenten Membrane e, die direkt auf der Oberfläche eines routinemäßig vorbereiteten Gewebekapitels auf einem Objektträger liegt. Der Forscher überprüft das Gewebekapitel mikroskopisch und aktiviert den Laser, wenn die gewünschten Zellen dem Ziel zugrunde liegen. Dieses aktiviert der Reihe nach die Membrane mit folgender Schwergängigkeit und Beschaffung der Zellen des Interesses. - [Gelesene Laser-Sicherung Microdissection (LCM)]

LCM Technologie kann die Zellen des Interesses direkt ernten oder kann spezifische Zellen lokalisieren, indem sie weg unerwünschte Zellen schneidet, um histologisch reine angereicherte Zellenbevölkerungen zu geben. Eine Vielzahl der stromabwärts gerichteten Anwendungen existiert: DNA das Genotyping und die Analyse des Verlust-vonHeterozygosity (LOH), das etc.-Protokoll zur Verfügung stellt eine vollständige Beschreibung der LCM Techniken, mit Betonung auf die Spitzen und Fehlersuchrat, die von den LCM Benutzern berechnet. Die Gesamtzeit, die benötigt, um dieses Protokoll durchzuführen, ist gewöhnlich 1-1.5 H. - [gelesen Laser-erfassen Sie Microdissection Protokoll]

Menschliche Gewebe enthalten von den mehrfachen zusammenwirkenden Zellenbevölkerungen in einer komplizierten dreidimensionalen Anordnung mit jedem zellularen Phänotypus, der durch ein eindeutiges Profil des mRNA-und Proteinausdrucks festgestellt. Bevor microdissection Techniken entwickelt, waren die einzigen Analysenhilfsmittel für phänotypische Studien hauptsächlich immunohistochemistry und in-situhybridation. Wenn nützlich, begrenzt diese Hilfsmittel, um Genanalyse auszusondern und im Allgemeinen erlauben nicht qualitative Studien. - [Gelesener Microdissection Überblick]

Protokoll für die Vorbereitung von LCM des Paraffins einbettete Gewebekapitel te. Einschließt t: Fixierung; Verarbeitung, einbettend und Gewebe-unterteilend; Beflecken; Laser-Übertragung; DNA-Extraktion-Protokoll des LCM Gewebes und des PCR für DNA-Analyse; RNS Extraktion-Protokoll des LCM Gewebes und des RT-PCR für mRNA-Analyse. - [Gelesene Vorbereitung und LCM des Paraffin eingebetteten Gewebe-Kapitel-Protokolls]

Protokoll für die Vorbereitung, LCM und RNA/DNA Extraktion der gefrorenen Gewebekapitel. Einschließt t: Einbettung, Ausschnitt und Beflecken. - [Gelesene Vorbereitungs-, LCM- und RNA-/DNAextraktion des gefrorenen Gewebe-Kapitel-Protokolls]

Informationen über die Verarbeitung des microdissected Gewebes für molekulare Analyse. Einschließt t: Mehr als 10.000 Zellen; Weniger als 10.000 Zellen; Formalin-örtlich festgelegt; Paraffin-eingebettetes Gewebe; Andere Fixiermittel; Zeitbegrenzung. - [Gelesene Verarbeitung des Microdissected Gewebes für molekulare Analyse]

Die Methodenlehre und die Buffer, die für die Verarbeitung der microdissected Proben für proteinbasierte Studien verwendet, ist abhängig von der stromabwärts gerichteten molekularen Analysenmethode variabel. - [Die gelesene Verarbeitung des Microdissected Gewebes für molekulare Analyse Proteomics-gründete Studien]

RNS-gegründete Studien der Verarbeitung des microdissected Gewebes für molekulare Analyse. Einschließt t: Gesamt-RNS Lokalisierung; Wahlweise freigestellte DNAse-Behandlung. - [Die gelesene Verarbeitung des Microdissected Gewebes für molekulare Analyse RNS-gründete Studien]

Protokolle für LCM Vorbereitung und Analyse. Einschließt Protokolle t: Vorbereitungs-, LCM- und RNA-/DNAextraktion der gefrorenen Gewebe-Kapitel; Vorbereitung und LCM der Paraffin eingebetteten Gewebe-Kapitel; Standardprotokolle für Microdissected Gewebe-Analyse. - [Gelesene Protokolle für LCM Vorbereitung und Analyse]