Nukleinsäure-Reinigung-Protokolle

Protokoll für eine einschrittige Methode für die simultane Vorbereitung von DNA, von RNS und von Protein von den Zellen und von den Geweben. Das Ergebnis von Gesamt-RNS hängt von der Gewebe- oder Zellenquelle ab, aber es ist im Allgemeinen in der Strecke 4-7 µg/mg, das Gewebe oder 5-10 Zellen µg/106 beginnt.  WICHTIG: Bereiten Sie alle Reagenzien vor, die in diesem Protokoll mit Diäthyl- Pyrokarbonat benutzt werden (DEPC)-behandeltes H2O. - [gelesen einer einschrittigen Methode für die simultane Vorbereitung von DNA, von RNS und von Protein von den Zellen und vom Gewebe]

Ultrafiltration ist eine Alternative zum Äthanolniederschlag für die Konzentration und die Entsalzung der Nukleinsäurelösungen.  Sie benötigt keine Phase Änderung und ist für das Beschäftigen sehr niedrige Konzentrationen der Nukleinsäuren besonders nützlich.  Dieses Protokoll beschreibt den Gebrauch von der Microcon Kassette, einer zentrifugalen Ultrafiltrationeinheit, sich zu konzentrieren und desalt Nukleinsäurelösungen. - [gelesene Konzentrierenund Entsalzung-Nukleinsäuren mit Microconcentrators Protokoll]

Die Vorbereitungen von RNS ein mRNA des Interesses enthalten werden zu einer ergänzenden einzeln-angeschwemmten DNA Prüfspitze hybridisiert.  Am Ende der Reaktion Nuklease wird S1 verwendet, um zu vermindern unhybridized Regionen der Prüfspitze, und die Mischlinge Überlebens DNA-RNA werden dann durch Gelelektrophorese getrennt und sichtbar gemacht durch Autoradiographie oder südliche Hybridation.  Methode verwendete, RNAs quantitativ zu bestimmen, die Positionen von introns abzubilden, und die Standorte der Enden 5' und 3' von mRNAs auf geklonten DNA Schablonen zu kennzeichnen. - [gelesen, RNS mit Protokoll der Nuklease-S1 abbildend]

Protokoll für Oligonucleotidereinigung. - [Gelesenes Oligonucleotide-Reinigung-Protokoll]

Protokoll für Reinigung des synthetisierten in-vitromRNA mit Microcon oder Centricon Trommel- der Zentrifugefiltern. - [gelesene Reinigung des synthetisierten in-vitromRNA mit Microcon oder Centricon zentrifugalem Filter-Protokoll]

Protokoll für Reinigung der beschrifteten Prüfspitzen mit dem hohen reinen PCR Produkt-Reinigung-Installationssatz. - [gelesene Reinigung der beschrifteten Prüfspitzen mit dem hohen reinen PCR Produkt-Reinigung-Installationssatz-Protokoll]

Protokoll beschreibt die Standardmethode für Nukleinsäurereinigung durch Extraktion zuerst mit phenol:chloroform (hydroxyquiniline bei 0.1% beliebig enthalten) und mit Chloroform, um jedes restliche Phenol dann zu löschen.  Die Prozedur zieht Nutzen aus der Tatsache, daß Entproteinisierung leistungsfähiger ist, wenn zwei unterschiedliche organische Lösungsmittel anstelle von einem benutzt werden. - [gelesene Reinigung der Nukleinsäuren durch Extraction mit Phenol:Chloroform Protokoll]

Radioaktive Nukleinsäuren, einschließlich Oligonucleotides, können von getrennt werden unincorporated radiolabel durch quantitativen, differentialen Niederschlag mit dem kationisches Reinigungsmittel cetylpyridinium Bromid (CPB).  Die Nukleinsäuren werden zuerst von der wässerigen Lösung mit CPB ausgefällt. - [gelesene Reinigung der radioaktiven Oligonucleotides durch Precipitation mit Cetylpyridinium Bromid-Protokoll]

In diesem Protokoll wird Ultrafiltration durch Centricon oder Microcon Konzentratoren verwendet, um unbenutzte Zündkapseln, Zündkapsel-Dimer und NTPs von den Vorbereitungen verstärkter DNA zu löschen. - [gelesener Abbau von Oligonucleotides und Überfluß dNTPs von verstärkter DNA durch Ultrafiltration Protocol]

Protokoll beschreibt die Standardmethode, um Nukleinsäuren von wässerigen Lösungen durch Niederschlag von DNA mit Äthanol zu erholen.  Subnanogram Mengen DNA (und RNS) können mit Äthanol quantitativ ausgefällt werden, durch Zentrifugierung eingetrieben werden und innerhalb der Minuten wieder aufgelöst werden. - [gelesener Standardäthanol-Niederschlag von DNA im Microcentrifuge Gefäß-Protokoll]