gereinigte Protokolle

Kategorie: Primärzellen-Lokalisierungs-und Kultur-Protokolle: Laser-Sicherung Microdissection Protokolle: Gewebe-Vorbereitung für LCM Protokolle

Spezifische Zellen oder Gewebe der LCM Isolate von den Proben eingehangen an den Mikroskopplättchen. Die Proben werden durch einen thermoplastischen Film angesehen, der zu einer microcentrifuge Gefäßkappe angebracht wird. Die beschränkte Hitze, verursacht durch die Anwendung eines Laser-Impulses, fixiert die Membrane zu den Zellen des Interesses, die für weitere Analyse dann geerntet werden können. RNS und Proteine können von den lokalisierten Zellen gereinigt werden und ausführliche Analyse des Genausdrucks erlauben. Dieses Protokoll wird in drei Stadien unterteilt. - [Gelesen (LCM): Vorbereitung und Einteilung der gefrorenen Gewebe-Blöcke und Reinigung von RNS von lokalisiertem Cel]

Kategorie: Pharmakologie-und Toxikologie-Protokolle: Enzymprobe-Protokolle

Protokoll für 3/7 Probe. Schließt ein: Abfragung von Caspase-3 und von -7 Aktivitäten in den auf Zellenbasisproben; Abfragung von Caspase-3 oder von Aktivität -7 unter Verwendung gereinigten Caspases. - [Gelesenes Protokoll der Proben-3-7]

Kategorie: Genetik und Genomics: Krebs-Genetik-Protokolle: Verlust der Heterozygosity-Protokolle

DNA für Analyse wird unter Verwendung des Salzniederschlags gereinigt. Die Methode ist leicht, begrenzt den Bruch der langen chromosomalen Stränge und vermeidet den Gebrauch des Phenols und des Chloroforms. Es ist für Gebrauch mit kultivierten Zellen, Brusttumorgewebe, das Hormonempfängeranalyse unterworfen worden ist, und Blutproben verwendbar. Der Verlust der Heterozygosityprobe wird unter Verwendung eines Multiplex-PCR, in durchgeführt, wird welches jedes Zündkapselpaares mit einem anderen fluorophor beschriftet. - [Gelesen einer Multiplex-PCR-Methode, zum einer Enge gelöschten chromosomalen Region eines Tumor-Genoms zu definieren]

Kategorie: Chromatographie-Protokolle: Affinitäts-Chromatographie-Protokolle

Recombinant Protein oder ein chemisch synthetisiertes bioactive Fragment wird auf Harz stillgestellt und benutzt wie eine Prüfspitze, um zusammenwirkende Proteine direkt von einem Zellenauszug zu erfassen.  Affinität-gereinigte Proteine werden durch Gelelektrophorese fraktioniert und sichtbar gemacht, indem man Coomassiebefleckt.  Proteine, die zusammenwirken, spezifisch werden identifizierent, indem man dieses Gelprofil bis eins vergleicht, das von den Zelle lysates erreicht wird, die über ein Steuerharz geführt werden, welches das stillgestellte Prüfspitzenprotein ermangelt. - [Gelesene Affinitäts-Reinigung der zusammenwirkenden Proteine vom Zelle Lysates Protokoll]

Kategorie: Pharmakologie-und Toxikologie-Protokolle: Enzymprobe-Protokolle

Protokoll für caspase 8 Probe. Schließt ein: Abfragung der Aktivität Caspase-8 unter Verwendung gereinigten Caspases; Abfragung der Aktivität Caspase-8 in den auf Zellenbasisproben. - [Gelesenes Caspase 8 Proben-Protokoll]

Kategorie: Pharmakologie-und Toxikologie-Protokolle: Enzymprobe-Protokolle

Protokoll für caspase 9 Probe. Schließt ein: Abfragung der Aktivität Caspase-9 unter Verwendung gereinigten Caspases; Abfragung der Aktivität Caspase-9 in den auf Zellenbasisproben. - [Gelesenes Caspase 9 Proben-Protokoll]

Kategorie: Pcr-Protokolle: Echtzeit-PCR-Protokolle

Protokoll beschreibt den Echtzeit-PCR unter Verwendung der RNS gereinigt von Laser-erfasster Gewebe Laser-Sicherung Microdissection (LCM): Vorbereitung und Einteilung der gefrorenen Gewebe-Blöcke und Reinigung von RNS von lokalisierten Zellen. - [Gelesene cDNA Synthese und Echtzeit-PCR unter Verwendung der RNS von Laser-Erfasstem Zellen-Protokoll]

Kategorie: Taufliege-Protokolle: Taufliege-Genetik-Protokolle

Das Protokoll, das hier beschrieben wird, produziert Chromatin mit den regelmäßig Raumnucleosomes, die physiologische nucleosome Wiederholungslängen haben; etwas, das schwierig sein kann, mit gereinigten Bestandteilen zu erzielen. Zusätzlich enthält der Chromatin, der mit dem Versammlungs-Auszug des Chromatin-S-190 zusammengebaut wird, den Atp-abhängigen Chromatin, der die Faktoren umgestaltet, die für leistungsfähige Übertragung notwendig sind. - [Gelesener Assembly auf Schablone DNA mit Übertragung-Faktoren und TaufliegeS-190 Chromatin Assembl]

Kategorie: Pcr-Protokolle: Pcr-Klonen-Protokolle

Paare Oligonucleotidezündkapseln, die in PCR benutzt werden, sind häufig mit Beschränkungssites in ihren 5 ' Regionen konzipiert.  In vielen Fällen sind die Sites in den zwei Zündkapseln unterschiedlich.  In diesem Fall legt Verstärkung ein Zielfragment fest, dessen Termini jetzt neue Beschränkungssites tragen, die für Richtungsklonen in Plasmidvektoren benutzt werden können.  Das gereinigte Fragment und der Vektor werden mit den passenden Beschränkungsenzymen verdaut, verbunden zusammen und umgewandelt in Escherichia Coli. - [Gelesene klonende PCR-Produkte durch Addition der Beschränkungs-Sites zu den Termini des verstärkten DNA-Protokolls]

Kategorie: Microinjection Protokolle: Microinjection der DNA-Protokolle

Für microinjection in Zellen, wird hochwertige Plasmid DNA unter Verwendung der Standardprozeduren gereinigt. Die resultierende Vorbereitung wird dann in die microinjection Nadel entweder durch eine nachfüllenoder Vorwärts-füllende Annäherung geliefert. - [Gelesene DNA-Vorbereitung und Nadel-Laden für Gen-Anlieferung durch Microinjection Protocol]

Kategorie: Nukleinsäure-Abfragungs-Protokolle: Nukleinsäure-befleckende Protokolle

Protokoll für Punkt- und Schlitzhybridation der gereinigten RNS. Das Punktbeflecken von RNS wird gut unter Verwendung der gereinigten Vorbereitungen von RNS durchgeführt, die mit Glyoxal oder Formaldehyd direkt vor dem Laden auf eine Nylonmembrane durch ein Vakuumverteilerrohr denaturiert werden. - [Gelesene Punkt-und Schlitz-Hybridation des gereinigten RNS Protokolls]

Kategorie: DNAmicroarray-Protokolle

Dieses Protokoll beschreibt die Jobstepps, die benötigt werden, um einen cDNA Microarray zu produzieren. Gen-spezifische DNA wird durch PCR-Verstärkung des gereinigten Schablonenplasmids DNAs aus geklontem ESTs produziert. Das pcr-Produkt wird durch den Äthanolniederschlag gereinigt, gänzlich innen erneut ausgesetzt - [gelesenes Herstellungs-Protokoll für DNAMicroarrays]

Kategorie: Zellen-Organell-Protokolle: Subzellulare Fraktionierung-Protokolle

Einige Konzentrationsgradientstrategien sind für die Fraktionierung der menschlichen Erythrozyte entsprechend ihrem Alter entwickelt worden. Während die Zellen, also altern, neigt ihre Dichte sich zu erhöhen; reticulocytes neigen folglich, die niedrigsten Dichten zu haben. Reticulocytes sind häufig teilweise auf unterbrochenen Steigungen des Arabinogalaktans gereinigt worden; die tatsächliche Dichtestrecke, die, von den ziemlich ausgedehnten ziemlich mannigfaltig ist. - [Gelesene Fraktionierung der menschlichen Erythrozyte (Normal oder Sichel) und des Reticulocytes in unterbrochenem Iodixanol]

Kategorie: Pharmakologie-und Toxikologie-Protokolle: Enzymprobe-Protokolle

Homogene Probe caspase-3/7. Schließt ein: Abfragung der Aktivität Caspase-3/7 in der Zellkultur;  Abfragung von Caspase-3 oder von Aktivität -7 in gereinigten Caspase Vorbereitungen; Positive und negative Zellkultur-Kontrollen. - [Gelesenes homogenes Caspase 3-7 Proben-Protokoll]

Kategorie: Westliche Fleck-Protokolle

Proteinimmunopräzipitation kann ein nützlicher vorbereitender Jobstepp für das Immunoblotting sein.  Für sehr seltene Proteine kann das Protein des Interesses durch Standardimmunopräzipitationtechniken gereinigt werden und konzentriert werden, bevor man immunoblotting.  Zusätzlich können Proteinprotein Interaktionen mit einem immunoprecipitating Antikörper geprüft werden, der für ein Protein eines Komplexes und des immunoblotting Antikörpers spezifisch ist, der für ein zweites Bauteil des Komplexes spezifisch ist. - [Gelesenes Immunoblotting: Immunoprecipitated Protein-Protokoll vorbereiten]

Kategorie: Tetrahymena Protozoen-Protokolle

Protokoll beschreibt, wie man die Lokalisierung der Kerne von allen Stadien des Tetrahymena Lebenszyklus im hohen Ertrag mit einem hohen Maß Reinheit erlaubt. Diese Methode gibt in hohem Grade gereinigte Bevölkerungen der Mikronuklei und des macronuclei. - [Gelesene Lokalisierung und Reinigung des Tetrahymena Kern-Protokolls]

Kategorie: BACs bakterielle künstliche Chromosom-Protokolle

Die Prozedur für Lokalisierung von BAC-DNA ist scaled-up, die 500 ml-Kulturen anzupassen, die, in Durchschnitt, µg 20-25 gereinigter BAC-DNA erbringen. - [Gelesene Lokalisierung von BAC-DNA vom großräumigen Kultur-Protokoll]

Kategorie: Antikörper-Protokolle: Antikörper-beschriftenprotokolle

Die direkte Kennzeichnung der gereinigten Antikörper ist die Methode der Wahl, wenn sie gleichzeitig zwei sichtbar macht oder mehr Antikörper der gleichen Sorte, Kategorie oder Unterklasse. Dieses erlaubt, dass die Lokalisation der mehrfachen Antigene in der gleichen Zelle, in Gewebe oder in Probe verglichen wird. Beschriftete Primärantikörper sind auch für das Verbessern von Hintergrund-zuablesen Verhältnissen nützlich, und sie können für Immunoassays wesentlich sein, in denen gute Quantifikation erforderlich ist. - [Gelesene beschriftenantikörper mit Fluorochrom-Protokoll]

Kategorie: Klonen-Protokolle

Protokoll für die Verbindung des Plasmids und des Ziels DNAs in der Niedrig-schmelzentemperatur Agarose. Verbindung in der Niedrig-schmelzentemperatur Agarose ist viel weniger leistungsfähig als Verbindung mit gereinigter DNA in der freien Lösung und benötigt eine große Menge von DNAligase. Die Methode wird hauptsächlich für das schnelle Subcloning von Segmenten von DNA in dephosphorylated Vektoren und in zusammenbauendem recombinant Konstruieren angewendet. - [Gelesen, Plasmid und Ziel, DNAs verbinden im Niedrig-schmelzen-Temperatur Agarose-Protokoll]

Kategorie: Zellen-Biologie und Zellkultur: Zellkultur-Techniken: Zellform-Bewahrung-Einfrieren

Nach Ausbreitung zu 1 x 108 Zellen, werden lymphoblastoide Zellen bequem bei -80 Grad C gespeichert, um die hohes Molekulargewicht DNA in den Zellen zu konservieren, bis die DNA gereinigt ist. Diese Prozedur beschreibt die Jobstepps, die benötigt werden, um das c zu ernten und einzufrieren - [gelesene Methode: Vorbereitung der Lymphozyte-Zellen-Tablette für Speicherung]

Kategorie: Microarray-Protokolle: Microarray-Analysen-Protokolle

Beschreibung der Genreihenanalyse und -normalisierung - [gelesene Microarray-Analyse des in hohem Grade gereinigten menschlichen Decidual NK Zellen-Protokolls]

Kategorie: Microarray-Protokolle: Microarray-Hybridation-Protokolle

Protokoll führt die Vorbereitung der Biotin-beschrifteten Zielproben und Hybridation dieser Proben zu einer Affymetrix synthetisierten Oligonucleotide GeneChip in-situreihe einzeln auf.  Die Prozedur benötigt ein Minimum µg 5 der gereinigten Gesamt-RNS als Ausgangsmaterial. - [Gelesenes Microarray-Protokoll für Affymetrix in situ synthetisierte Oligo Reihen]

Kategorie: Microarray-Protokolle: Amino-Allyl Microarray-Methoden

Protokoll führt die Vorbereitung der Leuchtstoff beschrifteten Zielproben (aminoallyl Methode) und Hybridation dieser Proben zu einem Microarray der Agilent Tintenstrahl-niedergelegten presynthesized Oligonucleotides einzeln auf. Die Prozedur benötigt ein Minimum µg 3 der gereinigten Gesamt-RNS als Ausgangsmaterial. - [Gelesenes Microarray-Protokoll für Agilent Tintenstrahl-Niedergelegtes Presynthesized]

Kategorie: Microarray-Protokolle: Microarray DNA-beschriftenprotokolle

Protokoll führt die Vorbereitung der Leuchtstoff beschrifteten Zielproben und Hybridation dieser Proben zu einem Microarray der Agilent Tintenstrahl-niedergelegten presynthesized Oligonucleotides einzeln auf. Die Prozedur benötigt ein Minimum µg 3 der gereinigten Gesamt-RNS als Ausgangsmaterial. - [Gelesenes Microarray-Protokoll für Agilent Tintenstrahl-Niedergelegte Presynthesized Oligo Reihe]

Kategorie: Microarray-Protokolle: Microarray-Hybridation-Protokolle

Protokoll führt die Vorbereitung der Leuchtstoff beschrifteten Zielproben und Hybridation dieser Proben zu einem Microarray der Agilent Tintenstrahl-niedergelegten presynthesized Oligonucleotides einzeln auf.  Die Prozedur benötigt ein Minimum µg 3 der gereinigten Gesamt-RNS als Ausgangsmaterial. Schließt ein: cDNA Synthese; LeuchtstoffcRNA Synthese; cRNA Niederschlag und Reinigung; cRNA Quantifikation; Hybridation; Reinigung. - [Gelesenes Microarray-Protokoll für Agilent Tintenstrahl-Niedergelegte Presynthesized Oligo Reihen]