Plasmid Protokolle

Kategorie: Virenkultur-und Lokalisierungs-Protokolle: Virenlokalisierungs-Protokolle

Protokoll beschreibt typische Methoden, die angewendet werden, um AAV Vektoren für Experimente in vivo zu verbreiten und in vitro und zu reinigen. Schließt ein: Grundregeln des dreifachen Plasmidtransfection-Systems; Plasmide; Transfection und Extraktion des Virus; Reinigung des AAV Vektors. - [Gelesen einem Protokoll für AAV vektorproduktion und -reinigung]

Kategorie: Klonen-Protokolle: Vektorprotokolle

Protokoll wird verwendet, um AAV Vektoren für Experimente in vivo zu verbreiten und in vitro und zu reinigen. Schließt ein: Grundregeln des dreifachen Plasmidtransfection-Systems; Plasmide; Transfection und Extraktion des Virus; Reinigung des AAV Vektors. - [Gelesene AAV vektorproduktion und Reinigung-Protokoll]

Kategorie: Mikrobiologie: Mini-Prep Plasmid-Reinigung

Ernten und Zerstörung des Bakteriums. Mini-prep Plasmidreinigung unter Verwendung Lösung I, Lösung II und Lösung III. Das Preuss Labor. Univ Chicago. - [Gelesene alkalische Zerstörung Mini-Prep Protokoll]

Kategorie: Betriebsbiologie-Protokolle: Arabidopsis Transformations-Protokolle

Electrotransformation des Agrobakteriums mit einem Plasmid, das in Escherichia Coli wiederholt hat. Wachstum von Arabidopsis thaliana. Arabidopsis Eintauchen. Startwert- für Zufallsgeneratorernten. Betriebsgewebekultur. Sehr ausführliches Protokoll. Stockinger Labor. Pdf - [gelesene Arabidopsis Transformation mit Agrobakterium pdf]

Kategorie: Reporter-Gen-Proben: B-Galaktosidase Proben-Protokolle

Die Probe für SSgalaktosidase beruht auf der Fähigkeit des Enzyms, die Hydrolyse von ONPG (O-Nitrophenyl-ß-d galactopyranoside) zu katalysieren um Onitrophenol freizugeben, das Licht bei 420 Nanometer aufsaugt. In diesem Protokoll werden Auszüge der Zellen, die mit einem SSgalaktosidase Reporterplasmid transfected sind, mit ONPG ausgebrütet. - [Gelesene Probe für SSgalaktosidase in den Auszügen der Säugetier- Zellen]

Kategorie: Hefe-Protokolle: Hefe-Genetik-Protokolle: B-Galaktosidase Proben-Protokolle

In diesem Protokoll werden Auszüge der Zellen, die mit einem SSgalaktosidase Reporterplasmid transfected sind, mit ONPG ausgebrütet. - [Gelesene Probe für SSgalaktosidase in den Auszügen des Säugetier- Zellen-Protokolls]

Kategorie: Reporter-Gen-Proben: Luciferase Proben-Protokolle

In diesem Protokoll werden die Zellen, die mit einem luciferase Reporterplasmid transfected sind, in einem detergent-containing Buffer aufgelöst. Luciferase im Auszug katalysiert eine Oxidationsreaktion, in der D-luciferin in oxyluciferin konvertiert wird, mit Produktion des Lichtes bei 556 Nanometer, die in einem luminometer mengenmäßig bestimmt werden können. - [Gelesene Probe für Luciferase in den Auszügen des Säugetier- Zellen-Protokolls]

Kategorie: Reporter-Gen-Proben: B-Galaktosidase Proben-Protokolle

Die empfohlene Menge für Transfection der Zellen (der 60 Millimeter-oder 100 Millimeter-zu verwenden des RSV-ß-Galaktosidase Plasmids, Teller) ist µg 1-2. Die optimale Menge von Plasmid DNA wird durch die Leistungsfähigkeit von Transfection festgestellt, der nach dem bestimmten Zellform- und Transfectionprotokoll sehr abhängig ist. - [Gelesenes b-Galaktosidase-Proben-Protokoll]

Kategorie: Mikrobiologie: Bakterielle Escherichia- Colikultur-Media u. Platten

Nährboden, Ampicillin-Vorrat, alkalische Zerstörung-Lösung, SCHLUCHZEN-, Soc-Media und auf lagerlösungen X-Gallone. Donis Keller. - [Gelesene bakterielle Media-Lösungen und Aktien]

Kategorie: Pcr-Protokolle: Pcr-Klonen-Protokolle

Protokoll ist für bidirektionales, Stumpfendeklonen der DNA-Fragmente.  Die Ziel DNA ist verstärkter PCR und 3 ' - Extensionen werden mit Pfu DNA-Polymerase poliert.  Das amplicon wird zu einer stumpf-beendeten Plasmid DNA verbunden, und die Produkte der Verbindungreaktion werden benutzt, um kompetente Escherichia Coli umzuwandeln.  Ein Beschränkungsenzym wird der Verbindungreaktion hinzugefügt, um jede mögliche Selbst-religating Vektor-DNA relinearize. - [Gelesenes bidirektionales Klonen des PCR-Produkt-Protokolls]

Kategorie: Pcr-Protokolle: Pcr-Klonen-Protokolle

Protokoll für Stumpfendeklonen der PCR-Produkte. Ausbrütung einer Stumpfendeverbindungreaktion in Anwesenheit eines Mehrbetrags eines passenden Beschränkungsenzyms kann den Ertrag der recombinant Plasmide drastisch erhöhen.  Die Rolle des Beschränkungsenzyms ist, die Kreis- und linearen Concatemers an den Beschränkungssites zu zerspalten, die wenn lineare, stumpf-beendete Plasmidmoleküle verbinden zu selbst verbessert werden.  I - [gelesenes Stumpf-Endeklonen des PCR-Produkt-Protokolls]

Kategorie: Klonen-Protokolle: Vektorprotokolle

Protokoll für stumpf-beendetes Klonen in Plasmidvektoren. - [Gelesenes Stumpf-beendetes Klonen in Plasmid Vectors Protokoll]

Kategorie: C. elegans Protokolle: C. elegans Genetik-Protokolle

Protokoll für C. elegans RNAi. Schließt ein: Transformation der kompetenten Zellen; Stumpf-Endeverbindung; Vorbereitung der kompetenten Zellen; Dephosphorylierung linearer Plasmid DNA; Beschränkungs-Auswahl: EcoRV; Setzen Sie Verstärkung vom gDNA ein; Gelreinigung: QiaQuick Gel-Reinigunginstallationssatz; Mini-prep; Transformant Siebung; Bakterielle Vorbereitung und Induktion; Vorbereitung der Würmer für die RNAi Speicherung. - [Gelesenes C. elegans RNAi Protokoll]

Kategorie: Transfection-Protokolle: Kalziumphosphattransfection-Protokolle

Diese Kalziumphosphattransfectionmethode funktioniert gut in den Zellformen, die 1) in hohem Grade umgewandelt sind und 2) im Anhänger (Hela-, U2OS, erhalten SAOS2, AdAH, NPC-KT und von Transfection-Leistungsfähigkeit 20% bis 100% abhängig von der Zellform). Arbeiten gut für vorübergehende Experimente aber Vorkehrungen sollten im Entwurf und in der Deutung der Experimente benutzt werden, die auf der Diskussion unten basieren. Arbeitet auch sehr gut für das Generierung der beständigen Zellformen. Diese Methode ist für die Menge des Inputplasmids ziemlich empfindlich. - [Gelesene Kalziumphosphattransfection-Methode]

Kategorie: Transfection-Protokolle: Kalziumphosphattransfection-Protokolle

Kalziumphosphat bildet einen unlöslichen Niederschlag mit DNA, die zur Zellenoberfläche anbringt und in die Zellen durch endocytosis genommen wird. Das Protokoll wird leicht für Gebrauch mit anderen Typen Zellen angepasst, anhaftend und nonadherent. Dieses Protokoll ist eine geänderte Version einer Methode, die et al. durch Jordanien veröffentlicht wird (1996) wer rigoros optimierte Kalzium-Phosphat-gegründete Transfectionmethoden für chinesische Hamstereierstockzellen und die Zeile 293 der menschlichen embryonalen Nierezellen. - [Gelesener Kalzium-Phosphat-vermittelter Transfection der Eukaryotic Zellen mit Plasmid DNAs]

Kategorie: RNS Protokolle: cDNA Bibliotheks-Bibliothek

Protokoll für cDNA Synthese und Klonen cDNA in Plasmidvektor. 1. Schwemmen Sie cDNA Synthese an und stellen Sie die Leistungsfähigkeit der ersten Strang cDNA Synthese fest. Schließt auch zweite Strang cDNA Synthese ein. Dr.Frank - [gelesene cDNA Synthese und Klonen]

Kategorie: DNA-Protokolle: cDNA Bibliotheks-Protokolle: cDNA Bibliotheks-Aufbau-Protokolle

Protokoll für Klonengene von einer Bakteriophagenbibliothek. Schließt ein: Titer und der Platte Bakterium heraus; Heben Sie Plaketten auf Filter an und bereiten Sie sie für Siebung vor; Bilden Sie eine Prüfspitze; Hybridisieren Sie die Prüfspitze zu den Filtern; Waschen Sie die Filter und das Exposee, um zu filmen; Reinigen Sie mutmaßliche Plaketten; Besteuern Sie Plasmid vom gewünschten Bakterium. - [Gelesene Klon-Gene von einem Bakteriophagenbibliotheks-Protokoll]

Kategorie: Pcr-Protokolle: Pcr-Klonen-Protokolle

Paare Oligonucleotidezündkapseln, die in PCR benutzt werden, sind häufig mit Beschränkungssites in ihren 5 ' Regionen konzipiert.  In vielen Fällen sind die Sites in den zwei Zündkapseln unterschiedlich.  In diesem Fall legt Verstärkung ein Zielfragment fest, dessen Termini jetzt neue Beschränkungssites tragen, die für Richtungsklonen in Plasmidvektoren benutzt werden können.  Das gereinigte Fragment und der Vektor werden mit den passenden Beschränkungsenzymen verdaut, verbunden zusammen und umgewandelt in Escherichia Coli. - [Gelesene klonende PCR-Produkte durch Addition der Beschränkungs-Sites zu den Termini des verstärkten DNA-Protokolls]

Kategorie: Mikrobiologie: Bakterielle kompetente Zellen-Vorbereitung Escherichia Coli

Nettes Protokoll für die Vorbereitung der bakteriellen Zellen, zum des Hebens der Plasmidvektoren zu erlauben. Dr. Peter Kille. Heiße Metalle Cardiff. - [Gelesene kompetente Zellen-Vorbereitung [CaCl2]]

Kategorie: Nukleinsäure-Reinigung-Protokolle: DNA-Lokalisierungs-Protokolle: DNA-Plasmid Preps Protokolle

Protokoll für CsCl Vorbereitung von Plasmid DNA. Dieses ist eine Standardvorbereitung der großen Skala.  Für Plasmid DNA, die einen Ertrag von 0.5 mg 1.0 gibt. - [Gelesene CsCl Vorbereitung des Plasmid DNA-Protokolls]

Kategorie: Hefe-Protokolle: Hefe-Genetik-Protokolle

Protokoll für das Kurieren von Belastungen des endogenen 2-Mikron-Plasmids. - [Gelesen, Belastungen vom endogenen Protokoll des Plasmid-kurierend 2-Micron]

Kategorie: DNA-Protokolle: DNA, die Protokolle sequenziell ordnet

Protokoll für Zyklusfolgereaktionen für große Einsatzplasmidschablonen. Schließt ein: CycleSequenceConditions; Zündkapseln nützlich für BAC-und PAC Vektoren. - [Gelesene Zyklusfolge-Reaktionen für großes Einsatz-Plasmid-Schablonen-Protokoll]

Kategorie: Klonen-Protokolle: Vektorprotokolle

Richtungsklonen benötigt, dass der Plasmidvektor mit zwei Beschränkungsenzymen zerspaltet wird, die inkompatible Termini festlegen und denen das Fragment von geklont zu werden DNA Termini befördert, die mit denen des doppelt zerspalteten Vektors kompatibel sind. - [Gelesenes Richtungsklonen in Plasmid Vectors Protokoll]

Kategorie: Pcr-Protokolle: Pcr-Klonen-Protokolle

Protokoll ist für Richtungsc$stumpfendeklonen der DNA-Fragmente.  Die Ziel DNA wird, 3 ' PCR-verstärkt - Extensionen werden mit Pfu DNA-Polymerase poliert, und das amplicon wird zu einer stumpf-beendeten Plasmid DNA verbunden.  Die Produkte der Verbindungreaktion werden benutzt, um kompetente Escherichia Coli umzuwandeln.  Ein Beschränkungsenzym wird der Verbindungreaktion hinzugefügt, um jede mögliche Selbst-religating Vektor-DNA relinearize. - [Gelesenes Richtungsklonen des PCR-Produkt-Protokolls]

Kategorie: Molekularbiologie-Protokolle: DNA-Verbindung-Protokolle

DNA-Klonen. Klonen-Rechner für Verhältniseinsatz zum Vektor/zum Plasmid. Molekulare Station. - [Gelesenes DNA-Klonen]