geklonte Protokolle

Kategorie: DNA-Protokolle: Cosmid-Bibliotheks-Protokolle

Verstärkung der Cosmidbibliotheken kann verzerrte Darstellung der geklonten genomic Reihenfolgen ergeben und sollte wo möglich vermieden werden. Wenn Verstärkung notwendig wird, ist es am besten, die Bibliothek durch Wachstum im flüssigen Medium zu erweitern. - [Gelesene Verstärkung und Speicherung einer Cosmid-Bibliothek: Verstärkung im flüssigen Kultur-Protokoll]

Kategorie: DNA-Protokolle: Cosmid-Bibliotheks-Protokolle

Verstärkung der Cosmidbibliotheken kann verzerrte Darstellung der geklonten genomic Reihenfolgen ergeben und sollte wo möglich vermieden werden. In dieser Methode der Verstärkung, ist Verzerrung der Bibliothek selten ein Problem, weil in keinem Stadium das Bakterium ist, das die verschiedenen recombinant Cosmids enthält, die in Konkurrenz miteinander gewachsen werden. - [Gelesene Verstärkung und Speicherung einer Cosmid-Bibliothek: Verstärkung auf Filter-Protokoll]

Kategorie: Pcr-Protokolle: Kolonie PCR

Protokoll beschreibt den Gebrauch von PCR, für Bakterium zu rastern, das recombinant Plasmide tragen.  Der PCR kann unter Verwendung der gleichen Zündkapseln wie für Verstärkung des geklonten Einsatzes durchgeführt werden.  Um die Lagebestimmung des Einsatzes festzustellen, kann ein drittes, einsetzen-spezifische Zündkapsel die asymetrisch von der klonischen Einfügungsite überholt wird verwendet werden. - [Gelesenes Kolonie PCR-Protokoll II]

Kategorie: Genetik und Genomics: Genotyping Protokolle: Veränderung-Abfragungs-Protokolle

Das Ziel dieser Methode ist, transcriptionally aktive Gene in geklonten Segmenten von genomic DNA zu identifizierenen. Der Protokollgebrauch Hybridation und die Affinitätsreinigung wieder herzustellen Biotin-beschrifteten cDNAs, die an ein 500-Kb-Segment menschlicher DNA geklont in einem BAC-Vektor binden. Jedoch kann die Methode anderen Klonen von genomic DNAs leicht angepasst werden geklont worden in den Hochleistungsvektoren. - [Gelesene direkte Auswahl von cDNAs mit großer Genomic DNA klont Protokoll]

Kategorie: DNA-Protokolle: DNA, die Protokolle sequenziell ordnet

Verweisen Sie das Sequenziell ordnen von verstärktem bakteriellem und großem Einsatz geklonte Mensch oder Mausgenomic DNA über eine verbesserte PCR-gegründete Multiplexmethode. Schließt ein: Vorbereiten der Zündkapseln für MP-PCR; Verstärkung; Pcr-Produkt-Reinigung; Sequenziell ordnen. - [Gelesenes direktes Sequenziell ordnen unter Verwendung der PCR-Gegründeten Multiplexmethode]

Kategorie: Klonen-Protokolle: Vektorprotokolle

Richtungsklonen benötigt, dass der Plasmidvektor mit zwei Beschränkungsenzymen zerspaltet wird, die inkompatible Termini festlegen und denen das Fragment von geklont zu werden DNA Termini befördert, die mit denen des doppelt zerspalteten Vektors kompatibel sind. - [Gelesenes Richtungsklonen in Plasmid Vectors Protokoll]

Kategorie: DNA-Protokolle: Genomic DNA-Bibliotheks-Protokolle

Protokoll beschreibt, wie man eine genomic DNA-Bibliothek in einem Plasmidvektor (pSPL3) ausgerüstet, um geklonte Exons in transfected Säugetier- Zellen auszudrücken konstruiert und verstärkt. - [Gelesenes Exon-Abfangen und Verstärkung für Aufbau des Bibliotheks-Protokolls]

Kategorie: Protokolle e-Coli: Protein-Protokolle e-Coli

Protokoll für den Ausdruck der geklonten Gene in Escherichia Coli unter Verwendung der IPTG-durch Induktion erhältlichen Förderer. Protokoll beschreibt, wie man (1) die geklonten Reihenfolgen klont, die geöffnete Lesefelder in den Plasmiden kodieren, die IPTG-durch Induktion erhältliche Förderer, (2) tragen, um Ausdruck der Zielproteine in den transformants zu optimieren, die diese recombinants und (3) tragen, einstufen-oben Produktion der fremden Proteine. - [Gelesener Ausdruck der geklonten Gene in Escherichia Coli unter Verwendung des IPTG-durch Induktion erhältlichen Förderer-Protokolls]

Kategorie: Virenhandhabungs-Protokolle: BakteriophagenLamda Handhabungs-Protokolle

Protokoll beschreibt, wie man (1) die geklonten Reihenfolgen klont, die geöffnete Lesefelder in den Plasmiden kodieren, die Bakteriophage {Lambda} tragen pL-Förderer, (2), um Ausdruck der Zielproteine in den transformants zu optimieren, die diese recombinants und (3) tragen, einstufen-oben Produktion der fremden Proteine. - [Gelesener Ausdruck der geklonten Gene in Escherichia Coli unter Verwendung des Förderer-Protokolls Bakteriophagelambda-pL]

Kategorie: Protokolle e-Coli: Protein-Protokolle e-Coli

Protokoll für Ausdruck der geklonten Gene in Escherichia Coli unter Verwendung des Förderers Bakteriophagelambda-pL. Protokoll beschreibt, wie man (1) die geklonten Reihenfolgen klont, die geöffnete Lesefelder in den Plasmiden kodieren, die Förderer Bakteriophagelambda-pL, (2) tragen, um Ausdruck der Zielproteine in den transformants zu optimieren, die diese recombinants und (3) tragen, einstufen-oben Produktion der fremden Proteine. - [Gelesener Ausdruck der geklonten Gene in Escherichia Coli unter Verwendung des Förderer-Protokolls Bakteriophagelambda-pL]

Kategorie: Protokolle e-Coli: Protein-Protokolle e-Coli

Protokoll für den Ausdruck der geklonten Gene in Escherichia Coli unter Verwendung des Förderers des Bakteriophages T7. Protokoll beschreibt, wie man (1) die geklonten Reihenfolgen klont, die geöffnete Lesefelder in den Plasmiden kodieren, die Förderer des Bakteriophages T7, (2) tragen, um Ausdruck der Zielproteine in den transformants zu optimieren, die diese recombinants und (3) tragen, einstufen-oben Produktion der fremden Proteine. - [Gelesener Ausdruck der geklonten Gene in Escherichia Coli unter Verwendung des Förderer-Protokolls des Bakteriophage-T7]

Kategorie: DNAmicroarray-Protokolle

Dieses Protokoll beschreibt die Jobstepps, die benötigt werden, um einen cDNA Microarray zu produzieren. Gen-spezifische DNA wird durch PCR-Verstärkung des gereinigten Schablonenplasmids DNAs aus geklontem ESTs produziert. Das pcr-Produkt wird durch den Äthanolniederschlag gereinigt, gänzlich innen erneut ausgesetzt - [gelesenes Herstellungs-Protokoll für DNAMicroarrays]

Kategorie: DNA-Protokolle: cDNA Bibliotheks-Protokolle: cDNA Bibliotheks-Aufbau-Protokolle

Das Schrotflintesequenziell ordnen eines großen Segments von DNA bezieht gelegentliche Zerteilung der Zielregion in kleinere Segmente mit ein, die nachher in einen Vektor des Bakteriophages M13 geklont werden. Das Ziel ist, eine Bibliothek der überlappenden Klone herzustellen, die mindestens fünffache Dichte über der gesamten Länge des Zielfragments liefern. - [Gelesenes Erzeugung einer Bibliothek von DNA nach dem Zufall sich überlappen setzt Protokoll] ein

Kategorie: Genetik und Genomics: Genotyping Protokolle: Veränderung-Abfragungs-Protokolle

In dieser Methode wird der Nuklease BAL 31 verwendet, um uni- oder bidirektionale zu bilden Auslassungen in einem Segment geklonter DNA. BAL 31 ist ein kompliziertes Enzym und neigt, eine Bevölkerung der double-stranded DNA-Ziele auf eine asynchrone Art und Weise, die Auslassungen zu verdauen, die durch BAL 31 erstellt werden, sind folglich weit heterogener an Größe als die, die durch processive Enzyme wie exonuclease III. erstellt werden - [gelesenes Erzeugung der bidirektionalen Sets Auslassungs-Durch Mutation entstehende Variationen durch Digestion mit Nuklease-Protokoll BAL-31]

Kategorie: Protokolle e-Coli: Genetik-Protokolle e-Coli

Protokoll für das Erzeugung der Genauslassungen und der Genwiedereinbaue in Escherichia Coli O157: H7 unter Verwendung eines temperaturempfindlichen allelic Wechselkurssystems. Technologie benötigt angrenzende DNA, in einen temperaturempfindlichen Vektor geklont zu werden, aber der resultierende Klon erlaubt große Flexibilität für weitere Änderung der Zielreihenfolge. Er wird folglich in hohem Grade zur Studie der Gene entsprochen, in denen einige Umläufe der Änderungen beabsichtigt werden. - [Gelesenes Erzeugung der Gen-Auslassungen und der Gen-Wiedereinbaue im Escherichia- Coliprotokoll]

Kategorie: Pilz-Protokolle: Neurospora-Protokolle

Informationen und Spitzen auf, wie man RFLP für das Abbilden klonte Gene benutzt. - [Gelesen, wie man RFLP für das Abbilden der geklonten Gene benutzt]

Kategorie: Virenhandhabungs-Protokolle: BakteriophagenLamda Handhabungs-Protokolle

Protokoll beschreibt, wie man die geklonten cDNAs identifizierent, die Proteine kodieren, die an spezifische DNA-Reihenfolgen binden. Die Methoden, die angewendet werden, sind denen sehr ähnlich, die für immunologische Siebung der Ausdruckbibliotheken verwendet werden, außer dass die Nitrozellulosefilter, die stillgestellte Proteine tragen, werden mit double-stranded DNA 32P-labeled eher als mit Antikörpern gerastert. - [Gelesen, DNA-bindene Proteine im Bakteriophage ambda Ausdruck-Bibliotheks-Protokoll identifizierenend]

Kategorie: Pcr-Protokolle: Pcr-Klonen-Protokolle

Protokoll beschreibt den Gebrauch von vectorette PCR und Einzelnsite PCR, die Terminalreihenfolgen der genomic Reihenfolgen zu verstärken, die in den Hochleistungsvektoren wie PACs und YACs geklont werden. - [Gelesen, die Enden der Genomic DNA-Fragmente lokalisierend geklont in den Hochleistungsvektoren]

Kategorie: Nukleinsäure-Reinigung-Protokolle

Die Vorbereitungen von RNS einen mRNA des Interesses enthalten werden zu einer ergänzenden single-stranded DNA-Prüfspitze hybridisiert.  Am Ende der Reaktionsnuklease wird S1 benutzt, um unhybridized Regionen der Prüfspitze zu vermindern, und die Mischlinge Überlebens DNA-RNA werden dann durch Gelelektrophorese getrennt und sichtbar gemacht durch Autoradiografie oder südliche Hybridation.  Methode angewendet, um RNAs quantitativ zu bestimmen, die Positionen von Introns abzubilden, und die Standorte von zu identifizierenen 5 ' und 3 ' Enden von mRNAs auf geklonten DNA-Schablonen. - [Gelesen, RNS mit Nukleases1-Protokoll abbildend]

Kategorie: Nukleinsäure-Änderungs-Protokolle: Nukleinsäure Radiolabeling Protokolle

Die Vorbereitungen von RNS einen mRNA des Interesses enthalten werden zu einer radioaktiven single-stranded RNS-Prüfspitze hybridisiert. Die Methode kann angewendet werden, um RNAs quantitativ zu bestimmen, die Positionen von Introns abzubilden, und die Standorte von zu identifizierenen 5 ' und 3 ' Enden von mRNAs auf geklonten DNA-Schablonen. - [Gelesen, RNS mit Ribonuclease und radioaktivem RNS Prüfspitzen-Protokoll abbildend]

Kategorie: Reporter-Gen-Proben: GFP Proben-Protokolle

Grünes Leuchtstoffprotein ist allgemein verwendet, den Genausdruck und -protein zu überwachen, die innerhalb der intakten Zellen handeln. Das Monster Green® Leuchtstoffprotein wird durch eine verbesserte synthetische Version des grünen Leuchtstoffproteingens gekodiert, das ursprünglich vom Montastrea cavernosa geklont wird (große Stern-Koralle). - [Gelesene Monster Green® Leuchtstoffprotein-Probe]

Kategorie: Vogelvogel-Protokolle

Protokoll beschreibt die Produktion von double-stranded RNS (dsRNA) von den Fragmenten von cDNAs der Bewerbergene. Die cDNA Fragmente müssen in den Plasmiden mit einem angrenzenden Förderer SP6 und T7 geklont werden (z.B., pSP72 oder pCRII). Das Plasmid wird linearisiert und Richtung und antisense RNAs werden separat durch in-vitroübertragung produziert. Nach Reinigung werden die RNS-Stränge getempert, um ein dsRNA Molekül zu erbringen, das für RNAi in den Vogelembryos verwendbar ist. - [Gelesene Produktion von dsRNA für RNAi im Vogelembryo-Protokoll]

Kategorie: RNAi Technologie-Protokolle: RNAi Vogelembryo-Protokolle

Protokoll beschreibt die Produktion von double-stranded RNS (dsRNA) von den Fragmenten von cDNAs der Bewerbergene.  Die cDNA Fragmente müssen in den Plasmiden mit einem angrenzenden Förderer SP6 und T7 geklont werden (z.B., pSP72 oder pCRII).  Das Plasmid wird linearisiert und Richtung und antisense RNAs werden separat durch in-vitroübertragung produziert. - [Gelesene Produktion von dsRNA für RNAi im Vogelembryo-Protokoll]

Kategorie: Immunitätsforschung: T-zellige Protokolle

T-zellige Hybridomas können erhalten werden, indem man aktivierte t-Zellen mit Tumorzellen fixiert. Eine heterogene Bevölkerung von Hybridomas kann geklont werden, indem man Verdünnung begrenzt, um Hybridomas zu erhalten, die Besonderheit zu einem T-zelligen Empfänger (TCR) ausdrücken. Protokoll beschreibt Zellenschmelzverfahren und Auswahl der T-zelligen Hybridomas. Ein Protokoll wird für Siebung der T-zelligen Hybridomas für Ausdruck des CD3-TCR Komplexes von der cytometry Analyse des Flusses zur Verfügung gestellt. - [Gelesene Produktion Mäusedes t-zelligen Hybridomas-Protokolls]

Kategorie: Zellen-Biologie und Zellkultur: In-vitrowiederherstellung-Protokolle

Dieses Protokoll produziert RNS-Abschriften aus einem geklonten Gen, das in einer in-vitroübersetzungsprobe dann benutzt werden kann. - [Gelesenes Protokoll für in-vitroübertragung von RNS]