Taufliege-Zelletransfection-Protokoll

Taufliege-Zelletransfection-Protokoll

Taufliege-Gewebe-Kultur - Zelletransfection-Protokoll

1. Startwert für Zufallsgenerator 5 ml des Mediums in einem 60 Millimeter-Teller mit 0.2 bis 0.3 ml Zellen der Zellkultur (5 bis 8 x 106, d.h. ein 2 bis 3 Tag - alte Kultur).
2. Brüten Sie an 25°C für mindestens 6 Stunde oder über Nacht vor Transfection aus.
3. Mischung 10 μg von Plasmid DNA mit 0.4 ml 0.25 m-CaCl2 und fügen 0.4 ml 2X HEBS, pH 7.1 tropfenweise mit dem Wirbeln in ein 17 x 100 Millimeter-PolycarbonatReagenzglas hinzu.
4. Brüten Sie bei Zimmertemperatur für Minute 20 bis 30 aus, die Lösung sollte etwas bewölkt werden.
5. Fügen Sie 0.8 ml des DNA-Niederschlags dem 60 Millimeter-Teller hinzu und wirbeln Sie. Brüten Sie an 25°C. aus.
6. Für Auswahl (d.h. für umgewandelte Zellformen) nach 24 Stunde, spalten Sie das Zellen-1:4 in neuen Medium auf. Nach anderer 24 Stunde fügen Sie die passende vorgewählte Droge für das benutzte Plasmid hinzu (z.B., G-418 bei 1 mg/ml oder hygromycin bei 200 μg/ml).
7. Spalten Sie Zellen alle 7 bis 10 Tage in vorgewählten (Droge-enthaltenen) Medium auf.
8. Wachsen Sie Zellformen als Mischkulturen im vorgewählten Medium.

Taufliegetransfection-Buffer

0.25 M-CaCl2
HEBS (2X)		42 Millimeter HEPES (freie Säure) 2.8 Millimeter Natriumphosphat Diabas- (Na2HPO4) Steriler Filter und Speicher an -20°C 274 Millimeter NaCl Wenn Sie wieder für einen Transfection, pH bis 7.1 und sterilen Filter vor Gebrauch auftauen. pH bis 7.1 mit NaOH 9.4 Millimeter KCl

Materialien benötigt für TaufliegeTransfection

• Natriumphosphat, Diabas-
• Kalziumchlorverbindung
• Natriumhydroxid
• G-418
• HEPES, freie Säure
• Kaliumchlorverbindung
• Natriumchlorid
• Hygromycin