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Artikel-Details
Absorptionsspektroskopie und Quantifikation des faserigen Bakteriophagenprotokolls |
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| Datum Fügte Hinzu: April 11, 2008 09:51:59 P.M. | |||
| Autor: | |||
| Kategorie: Virenhandhabung Protokolle: Bakteriophagenprotokolle | |||
Anders als kugelförmiges Bakterium wie T4
und λ, die ungefähr gleiche Gewichtverhältnisse des
Proteins zu DNA haben, faseriges Bakterium haben Sie ungefähr
sechsmal mehr Protein als DNA; das Protein trägt folglich im
wesentlichen zum Absorptionsspektrum bei. Gegründet auf den
Messen des Tages und des Wiseman, ist die Konzentration des Bakteriums
in virions/ml, wie gesehen. Das Subtrahieren des A320, eine Wellenlänge, in der es
wenig Lichtabsorption von den Bakteriophagenchromophoren gibt, wird
bedeutet, um für die Lichtstreuung von den Bakteriophagenpartikeln
und von den Nichtbakteriophagenpartikelverschmutzern grob zu beheben.Protokoll1. Bereiten Sie eine Serienverdünnung (im 1X TBS) des faserigen Bakteriums vor analysiert zu werden, wenn vieles dafür spricht, daß die Lösung auch für Absorption Analyse konzentriert wird. 2. Stellen Sie sicher, daß die Außenflächen von zwei Quarzgießwannen sauber sind (besonders durch das das Fenster das Licht reist, Spitze # 1) sieht. 3. Schalten Sie das Spektrofotometer ein und lassen Sie das Instrument während eines passenden Zeitabschnitts aufwärmen (sprechen Sie die Anweisungen des Herstellers an). 4. Programmieren Sie das Spektrofotometer, um ein Spektrum von 240 nm bis 320 nm zu analysieren und über den Absorption Wert bei 269 nm und 320 nm auch zu berichten. 5. Fügen Sie 250 μL 1 ml 1X TBS (abhängig von Gießwanne) den gesäuberten Gießwannen hinzu und legen Sie eine der Gießwannen in die Bezugszelle und die andere in die Analyse Zelle. 6. Löschen Sie das Spektrofotometer. 7. Löschen Sie die Gießwanne von der Analyse Zelle und saugen Sie das 1X TBS an. 8. Fügen Sie eine der hinzu in die Gießwanne analysiert zu werden Lösungen. 9. Legen Sie die Gießwanne in die Analyse Zelle und stellen Sie das Spektrofotometerspektrum fest (sehen Sie Spitze # 2). 10. Wiederholen Sie Jobsteps #7 zu #9 für die restlichen Proben. Buffer
Materialien
Methode Spitzen1. Säubern Sie zwei Quarzgießwannen, indem Sie das Äußere der Gießwanne mit Methanol 100% waschen. 2. Ein typisches UVABSORPTIONSSPEKTRUM des gereinigten faserigen Bakteriums löste sich in den TBS Resultaten in einer ausgedehnten Hochebene bei 260 bis 280 nm, mit einem flachen Maximum bei 269 nm auf ReferenzenTag, L.A. und Wiseman, R.L. A Vergleich von DNA verpackend in den virions von Flugleitanlage, Xf und Pf1. In: Die Einzeln-Angeschwemmten DNA Bakterien. (1978) (Denhardt, D.T., Dressler, D. und Strahl, D.S. ED) P. 605-625. |
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