Antikörper-Bakteriophagenausdruck-Protokoll unter Verwendung 96 wohler Mikrotiter-Platten

Antikörper-Bakteriophagenausdruck-Protokoll unter Verwendung 96 wohler Mikrotiter-Platten

Antikörper-Bakteriophagenausdruck-Protokoll-Prozedur

1. Fügen Sie μl 100 des TYE Mediums den Vertiefungen einer Rundbodenmikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen hinzu (Nunc).
2. Übertragen Sie einen Impfstoff von den einzelnen Kolonien der ausgewählten Bakteriophagenbibliothek mit einem sterilen Toothpick (sehen Sie Spitze #1 und #2).
3. Brüten Sie die Platte auf einer rüttelnden Plattform (300 U/min) an 30°C über Nacht aus (sehen Sie Spitze #3).
4. Fügen Sie μl 50 TYE (+) des Glyzerins jedem Vertiefung hinzu und mischen Sie durch trituration. Dieses ist die Vorlagenplatte.
5. Übergangs2 μl von der Vorlagenplatte zu einer anderen Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen, die μl 150 von TYE Media pro Vertiefung enthält.
6. Wickeln Sie die Vorlagenplatte in der Plastikverpackung ein und speichern Sie an -80°C.
7. Brüten Sie die zweite Platte auf einer rüttelnden Plattform (300 U/min) an 37°C aus, bis die optische Dichte bei 600 Nanometer der Wellenlänge (OD600) ungefähr 0.5 ist (sehen Sie Spitze #4).
8. Fügen Sie μl 50 der TYE Media hinzu, die 2 x 109 pfu/ml Helferbakterium enthalten (M13K07, R408 oder VCSM13) jedem Vertiefung (sehen Sie Spitze #5).
9. Platzieren Sie die Platte an 37°C für Minute 30 (sehen Sie Spitze #6).
10. Zentrifugieren Sie die Platten bei 2.700 U/min (1.200 X g) für Minute 10 mit Adaptern eines Beckman™ GH-3.8 Rotors und der Mikrotiterplatte.
11. Saugen Sie die supernatants an und setzen Sie die bakteriellen Tabletten in μl 150 TYE (-) der Glukose erneut aus (sehen Sie Spitze #7).
12. Brüten Sie die Platte auf einer rüttelnden Plattform (300 U/min) an 30°C über Nacht aus (sehen Sie Spitze #3).
13. Zentrifugieren Sie die Platten bei 2.700 U/min (1.200 X g) für Minute 10 mit Adaptern eines Beckman™ GH-3.8 Rotors und der Mikrotiterplatte.
14. Gebrauch 50 μl der supernatants für ELISA Probe.

Bakteriophagenbildschirmanzeige-Antikörper-Ausdruck-Buffer-Rezepte

TYE (-) Glukose    5 g NaCl Bereiten Sie sich in 1 Liter ddH2O vor 10 g Bacto Hefe-Auszug (Difco) Fügen Sie Ampicillin 100 μg/ml hinzu 16 g Bacto Trypton (Difco) Kühlen Sie zu 55°C ab Zu entkeimen Autoklav TYE (+) Glyzerin    Kühlen Sie zu 55°C ab 16 g Bacto Trypton (Difco) 5 g NaCl Bereiten Sie sich in 1 Liter ddH2O vor 30% (v/v) Glyzerin Fügen Sie Ampicillin 100 μg/ml hinzu 10 g Bacto Hefe-Auszug (Difco) Zu entkeimen Autoklav Fügen Sie Glukose 2% hinzu (W/V) TYE Media    Kühlen Sie zu 55°C ab 16 g Bacto Trypton (Difco) 5 g NaCl Bereiten Sie sich in 1 Liter ddH2O vor Fügen Sie Ampicillin 100 μg/ml hinzu 10 g Bacto Hefe-Auszug (Difco) Für Platten hinzufügen Sie 15 g Bacto den Nährboden (Difco) bevor Sie sterilisieren Zu entkeimen Autoklav Fügen Sie Glukose 2% hinzu (W/V)

Antikörper-Bakteriophagenausdruck-Methoden-Materialien benötigt:

• Natriumchlorid
• Bacto Trypton
• Glyzerin
• Ampicillin
• Glukose
• Bacto Hefe-Auszug

Protokoll-Spitzen

Referenzen für Bakteriophagenbildschirmanzeige-Protokoll