GFP Proben-Protokolle

Das folgende Protokoll kann für die Entwicklung der beständigen Zellformen verwendet werden, die GFP Schmelzverfahrensproteine ausdrücken. Obgleich schwanken optimale Transfectionprozeduren (z.B., Kalziumphosphat, Electroporation oder FuGENE 6 [Roche angewandte Wissenschaft]) abhängig von Zellentypen, ist diese allgemeine Transfectionprozedur für beständigen Transfection von Hela-, von Zellen A-431, U2OS, BHK und HT1080 erfolgreich gewesen. - [Gelesenes Konstruieren und Ausdrücken der GFP Schmelzverfahrens-Proteine]

Informationen und Spitzen auf, wie man GFP-etikettierten Proteine in der Zellenbiologie verwendet - [gelesen, wie man GFP-Etikettierte Proteine in der Zellen-Biologie benutzt]

Spezifische molekulare Bestandteile können durch eine Kombination von drei Methoden leistungsfähig beschriftet werden: chemischer Transfection des GFP-Schmelzverfahren Konstruierens, Beflecken der Chromosomen mit der DNA-spezifischen, Leuchtstofffärbung Hoechst 33342 und microinjection der Leuchtstoff konjugierten Proteine. Diese Prozedur stellt ein Beispiel von alle drei Methoden in der Folge anwenden zu den Kennsatzbestandteilen der lebenden Helazellen zur Verfügung. Diese Methoden sollten in die dargestellte worden Ordnung gefolgt werden, aber irgendwelche von ihnen können ausgelassen werden, wenn sie nicht benötigt werden. - [Gelesene Darstellung Hoechst-Beschriftete Chromosomen und Leuchtstoffproteine während der Zellen-Schleife]

Protokoll, welches die Menge des GFP Ausdrucks und DES DNA-Gehalts in permeabilized Zellen misst. Schließt ein: Verlegenheitszellen mit Formaldehyd; Permeabilize Zellen mit Äthanol; Vorbereitung der gepufferten 2% Formaldehyd-Lösung. - [Gelesenes Messen des GFP Ausdrucks und DES DNA-Gehalts in den Permeabilized Zellen]

Grünes Leuchtstoffprotein ist allgemein verwendet, den Genausdruck und -protein zu überwachen, die innerhalb der intakten Zellen handeln. Das Monster Green® Leuchtstoffprotein wird durch eine verbesserte synthetische Version des grünen Leuchtstoffproteingens gekodiert, das ursprünglich vom Montastrea cavernosa geklont wird (große Stern-Koralle). - [Gelesene Monster Green® Leuchtstoffprotein-Probe]

Protokoll beschreibt spezifisch Datenerfassung für eine bestimmte Variante von GFP (EGFP) oder von Oregon-Grün als Spenderfluorophore, aber es kann für Bilddatenerfassung anderen Chromophors angepasst werden. - [Gelesene prüfende Protein-Interaktionen unter Verwendung GFP und des GITTERWERKS]

In der Vorbereitung für FLIM-FRET Analyse, müssen die passenden Spender- und Akzeptorenbestandteile in die Phasen- oder örtlich festgelegten Zellen eingeführt werden. Die Methode der Einleitung hängt von der Art der Bestandteile und vom Zustand der Zellen ab. Z.B. kann Plasmid DNAs, das ein Protein des Interesses fixiert zu einer Variante von GFP kodiert, in Phasenzellen durch Transfection oder microinjection eingeführt werden, während beschriftete Antikörper durch microinjection geliefert werden. - [Gelesene prüfende Protein-Interaktionen unter Verwendung GFP und GITTERWERK des Protokolls]

Beschreibt, wie werden Bestandteile (normalerweise tolle Fragmente von den Antikörpern) das in Zellen eingeführt werden sollen, mit Leuchtstoffsulfoindocyanine Färbungen beschriftet. - [Gelesene prüfende Protein-Interaktionen unter Verwendung GFP und des GITTERWERKS.]