DNA Synthese-Protokolle

"3'-Enden, die" festlegen teilweise DNA klont, mRNA, wird Rück-übertragen mit einer "hybriden" Zündkapsel (Qtotal, Quart) die aus zwei gemischten Unterseiten besteht (GATC/GAC folgte vorbei [ T]17) und eine eindeutige Reihenfolge des Oligonucleotide 35-base (QI-QO).  Verstärkung wird dann mit einem besser gekleideteren enthaltenen Teil dieser Reihenfolge (Qouter, Qo) durchgeführt (die jetzt an jede DNA an seinen 3'-Enden bindet) und eine Zündkapsel berechnet vom Gen des Interesses, GSP1 (Gen-spezifische Zündkapsel 1). - [Gelesene 3'-Ende-DNA Verstärkung Mit Klassischem RENNEN Protokoll]

"5'-Ende" teilweise DNA festzulegen klont mit klassischem RENNEN, die Erstfaser Produkte werden festgelegt durch Rückübertragung (besser gekleidetere Extension) von einer bekannten Gen-spezifischen Zündkapsel (GSP-RT).  Dann wird ein poly(A) Endstück mit Terminaldeoxynucleotidyltransferase (Tdt) und dATP hinzugefügt.  Verstärkung wird mit drei Zündkapseln durchgeführt. - [Gelesene 5'-Ende-DNA Verstärkung Mit Klassischem RENNEN Protokoll]

Neues RENNEN, eine Variante von RNS ligase-mediated-RACE (RLM-RACE) (Liu und Gorovsky 1993) reist vom klassischen RENNEN (sehen Sie 5'-Ende-DNA Verstärkung mit klassischem RENNEN), dadurch ab, daß eine "Anker" Zündkapsel zu den 5'-Enden des mRNA vor dem Rückübertragungjobstep angebracht wird; folglich wird die Ankerreihenfolge in die Erstfaser DNA wenn verbunden und nur wenn, die Rückübertragung durch die gesamte Länge des mRNA des Interesses fortfährt. - [Gelesene 5'-Ende-DNA Verstärkung Mit Neuem RENNEN Protokoll]

Eine oligodeoxynucleotide Zündkapsel, die zum mRNA hybridisiert wird, wird durch eine RNS-ABHÄNGIGE DNA Polymerase ausgedehnt, um ein DNA Exemplar zu erstellen, das von PCR verstärkt werden kann.  Abhängig von dem Zweck des Experimentes, kann die Zündkapsel für Erstfaser DNA Synthese spezifisch konzipiert werden, um zu einem bestimmten Zielgen zu hybridisieren, oder eine allgemeine Zündkapsel wie oligo(dT) kann benutzt werden, um DNA Synthese von allen Säugetier- mRNAs im Wesentlichen vorzubereiten - [die gelesene Verstärkung von DNA festgelegt von Reverse Transcription des mRNA Protokolls]

Diese Methode, für die vorgewählte Verstärkung der in voller Länge DNA Enden, bezieht die Hinzufügung eines Adapters während der Rückübertragung mit ein.  Diese Methode zieht Nutzen aus der Neigung Moloney des Mauseleukämievirus-Rückseite transcriptase (MMLV Funktelegraphie) zwei bis vier cytosines zu den 3'-Enden der eben synthetisierten DNA Fasern hinzuzufügen.  Die zusätzlichen Überreste werden hinzugefügt, wenn das Enzym die Struktur 5'-cap am Ende der mRNA Schablone erreicht. - [Gelesenes Schutzkappe-Schaltung RENNEN Protokoll]

Dieses DNA Synthesesystem vereinfacht Ihre Arbeit drastisch.  Alle Reaktion Bestandteile sind vorgemischt und lyophylised.  Sie müssen Ihre RNS und (für IhrHauptkorne) die Zündkapsel hinzufügen.  Ein anderer Vorteil des Systems ist eine kleine Anzahl von den pipettierenden benötigten Jobsteps und verringerte folglich Gefahr der RNaseverschmutzung und DER RNS-Verminderung. - [gelesene erste Faser DNA Synthese mit Betriebsbereit-Zu-Gehen Korn-Protokoll]

Diese Methode der ersten Faser DNA Synthese ist leistungsfähiger als Betriebsbereit-zu-Gehen Korne.  Sie können so wenig verwenden wie Gesamt-RNS 100ng und entdecken Sie noch Genausdruck in PCR. - [gelesene erste Faser DNA Synthese mit SuperProtokoll des index-II]

In MOPAC, werden die Amino-Terminal und Carboxyterminal Reihenfolgen eines Peptids verwendet, um zwei überflüssige Familien der Oligonucleotides zu konzipieren, welche die aminoand Carboxyterminal Reihenfolgen des Peptids verschlüsseln.  Die Zündkapseln werden entweder benutzt, um ein Segment von DNA zu verstärken vorbereitet von RT-PCR von einem Gewebe, das, um das Protein auszudrücken bekannt ist oder ein Segment von DNA von einer hergestellten genomic oder DNA Bibliothek zu verstärken. - [gelesene Oligonucleotide-vorbereitete Mischverstärkung DNA MOPAC des Protokolls]

Reaktionen 3'-RACE werden, um unbekannte Reihenfolgen 3' zu lokalisieren verwendet oder die Termini 3' von mRNAs auf eine Genreihenfolge abzubilden.  3'-RACE benötigt Wissen einer kleinen Region der Reihenfolge entweder innerhalb der Ziel RNS oder eines teilweisen Klons von DNA.  Eine Bevölkerung von mRNAs wird in DNA mit einer Adapter-Zündkapsel übertragen, die an seinem Ende 3' einer poly(T) Fläche und an seinem Ende 5' einer willkürlichen Reihenfolge von 30-40 Nukleotiden besteht. - [gelesene schnelle Verstärkung von ' DNA 3 beendet Protokoll 3'-RACE]

Diese Methode wird verwendet, um teilweise DNA auszudehnen klont, indem man die Reihenfolgen 5' der entsprechenden mRNAs verstärkt.  Die Technik benötigt Wissen einer kleinen Region der Reihenfolge innerhalb des teilweisen DNA Klons.  Während PCR wird die hitzebeständige DNA Polymerase auf die passende Ziel RNS durch eine einzelne Zündkapsel verwiesen, die von der Region der bekannten Reihenfolge berechnet wird. - [gelesene schnelle Verstärkung von ' DNA 5 beendet Protokoll 5'-RACE]

Protokoll beschreibt die Vorbereitung der subtrahierten DNA Prüfspitzen durch Hybridation zu einem mRNA Treiber, gefolgt von der Reinigung der einzeln-angeschwemmten radioaktiven DNA durch hydroxyapatite Chromatographie.  Bevor es die Prüfspitze vorbereitet, ist es eine gute Idee, Filter (die zu haben die gerastert zu werden DNA enthalten Bibliothek), vorbereitet, um zu hybridisieren. - [gelesene Synthese der radioaktiven, subtrahierten DNA Prüfspitzen mit Oligo(dT) als besser gekleideteres Protokoll]