Im Gel-Trypsin-Verdauung-Protokoll

Was ist genau in der Geltrypsinverdauung? Erlernen Sie ungefähr in der Gel-Trypsin-Verdauung und in der Prozedur für in Gel-Trypsin-Verdauung.

Trypsin-Verdauung der Gel-Scheiben: Eine Einleitung

Polyacrylamidgelelektrophorese ist eine geläufige Laborprozedur, die an unterschiedliche Proteine in den komplizierten biologischen Proben gewöhnt ist. Die Entwicklung der zweidimensionalen (2D) Gelelektrophorese hat eine Methode differentialy zu den Bildschirmanzeigeproteinen zur Verfügung gestellt, die quantitative Analyse vieler Hunderte zu den Tausenden Proteinen auf einmal erlaubend. Indem es Unterschiede bezüglich der 2D Gelmuster zwischen Steuerung und experimentellen Bedingungen analysiert, kann man die Effekte auf den Ausdruck der Proteine und die Synthese der neuen Proteine unter bestimmten Bedingungen wie Krebs jetzt feststellen.

Trypsin- Verdauung der Peptide direkt im Polyacrylamid-Gel schneidet Protokoll 

Wir erklären im Folgenden Artikel, wie man direkt Proteine verdaut, die auf ein Polyacrylamidgel laufen gelassen worden sind, und mit Coomasie befleckt. Indem Sie das Protein innerhalb des Gels verdauen, beseitigen Sie die Notwendigkeit, das Protein von den Gelbandscheiben zu eluieren oder das Protein des Interesses auf eine PVDF/Nitrozellulosemembrane zu übertragen.

Dieses Protokoll benutzt keine Reinigungsmittel, das eine direkte Analyse von in der Gelproteinverdauung durch flüssige Chromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS) ohne HPLC-Fraktionierung erlaubt.

 Die Nachweisgrenze auf Proteine, die Verdauung Ingel sind, ist ungefähr 1 pmol des Proteins. Da coomasie das Beflecken eine ähnliche Nachweisgrenze hat, wird es gewusst, dass ein schwach beflecktes coomasie beflecktes Band durch ist Massenspektrometrie zu entdecken genug.

  Shevchenko veröffentlichte et al. die Verdauung der Silber befleckten Gelanalyse durch nanospray Massenspektrometrie, und dieses Protokoll basiert auf diesem Protokoll.

In den Gel-Verdauung-Referenzen:

A. Shevchenko, M. Wilm, O. Vorm und M. Mann. Spektrometrisches Massenc$sequenziell ordnen der Proteine von Silber-befleckten Polyacrylamidgelen. 68:850 der analytischen Chemie - 858 (1996).