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Molekulare Biologie Blog

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Entfernende Westliche Fleck-Membranen

Entdeckunginformationen über, wie man westliche Fleckmembranen hier entfernt.

Westliche Fleck-Membrane entfernendes Inhaltsverzeichnis

• Was entfernt Membrane?
• Hintergrund
• Anwendungen
• Materialien
• Buffer
  
• Vorbereitung
• Protokoll
• Sichtbarmachung
• Gel-Analyse
• Westlicher Fleck, der Videos - Bald Kommend Entfernt!
• Andere Westlicher Fleck-Entfernende Protokolle
• Fehlersuchmembrane Entfernen
• Diskussion Themen für entfernende Flecken
• Erhalten Sie Hilfe auf Ihrem Membrane Entfernen

Was entfernt Membrane?

Membrane das Entfernen ist der Abbau der Antikörper (einschließlich Primär- und zweitens) von einer westlichen Fleckmembrane, die Ausbrütung der neuen Primär- und Sekundärantikörper für die Probe eines neuen Proteins durch das westliche Beflecken zu erlauben.

 

 

Anwendungen des westlichen Fleck-Entfernens

Agarosegelelektrophorese wird hauptsächlich in der Analyse oder in der Trennung DNA und RNS-DER Moleküle verwendet (obgleich Proteine auf Agarosegelen auch getrennt werden können), gleichwohl Trennung auch die Reinigung der spezifischen Größen von DNAs nach Beschränkung Enzymverdauung erlaubt. Dieses wird normalerweise beim Klonen verwendet, zum der Schnittplasmide zu erreichen, in denen Agarosegelelektrophorese Schnittvektoren von den ungeschnittenen trennt.

So entfernen gewährt:

1. Die Wiederverwendung der westlichen für Ausdruck zu prüfen Fleckmembranen, eines anderen Proteins
2. Zur Probe für Gesamtprotein
3. Für das nicht-phosphorylierte Protein prüfen (nachdem dem Prüfen für phosphoryliertes Protein).

 

 

Membrane Entfernende Buffer

Das Entfernen benötigt spezielle Buffer und Ausbrütung in einem Ofen.

Buffer Benutzt:

Entfernender Buffer

• 62.5 Millimeter Tris-HCl (pH 6.8)
• 2% SDS. (fügen Sie UL 280 von merceptoethanol 2-beta oder von abschließender Konzentration von 0.1 M 2-Mecaptoethanol hinzu).

Entfernendes Protokoll

• fügen Sie 280 μL 2-beta-mercaptoethanol pro 40 ml des entfernenden Buffers hinzu (zu einer abschließenden Konzentration von 100 Millimeter)
• 1. Waschen Sie Membrane in TBST (1 x 5 Minute)
  2. Brüten Sie Membrane in entfernendem Buffer für 30 Minuten an 50-60°C aus (benutzen Sie einen Heizung Ofen für dieses - und halten Sie geschlossene des Ofens Tür wegen des Geruchs)
  3. Waschen Sie in TBST (2 x 5 Minuten)
  4. Blocken Sie Membrane für 1 h 5% in der blockenmilch
  5. Folgen Sie normalem Protokoll für das Entwickeln der westlichen Flecken.

 

 

 

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