Protein-Reinigung

Molekulare Station des copyright-2006

Proteinreinigung ist in der Kennzeichnung Ihres Proteins des Interesses lebenswichtig. Reinigung Ihres Proteins lässt ein die Funktion des Proteins studieren und seine enzymatische Aktivität. Stuctural Informationen vom Protein können von gereinigten Proteinen einschließlich die NMR-, 3-D Informationen wie Proteinkristallisation auch eingeholt werden.

So wie geht ein, ein Protein ungefähr zu reinigen?

Proteine können entsprechend Größe, Löslichkeit, Ladung und verbindlicher Affinität gereinigt werden

Proteine können durch Elektrophoresemethoden betriebsbereit sichtbar gemacht werden und unterschieden werden.  Thesegeltechniken können auch verwendet werden, um kleine Quantitäten (Mikrogramme) der gereinigten Polypeptide zu erhalten.  Jedoch liefern sie nicht große Mengen der gereinigten Proteine in ihrem gebürtigen Zustand.  Erhebliche Quantitäten der gereinigten Proteine, der Ordnung von vielen Milligrammen, sind erforderlich, ihre dreidimensionale Struktur und ihren Mechanismus der Tätigkeit völlig aufzuklären.  Einiges tausend Proteine sind in der aktiven Form aufgrund von solchen Eigenschaften wie Größe, Löslichkeit, Ladung und spezifische verbindliche Affinität gereinigt worden.  An jedem Jobstepp in der Reinigung, wird die Vorbereitung für ein unterscheidendes Eigentum des Proteins des Interesses (z.B. enzymatische Aktivität) die Wirksamkeit der Prozedur festzusetzen geprüft.

Proteine können von den kleinen Molekülen durch Dialyse durch eine halbdurchlässige Membrane, wie Zellulosemembrane mit Poren getrennt werden.  Die Moleküle, welche die Maße erheblich größer sind als der Poredurchmesser haben, werden innerhalb des Dialysebeutels, wwhereas kleineren der Moleküle und der Ionen überkreuz die Poren solch einer Membrane beibehalten und auftauchen in der Dialyse außerhalb des Beutels.

Diskriminierendere Trennung auf der Grundlage von Größe kann durch die Technik der Gelfiltration Chromatographie erzielt werden.  Die Probe wird an der Oberseite der Spalte angewendet, die aus den porösen Kornen besteht, die von einem unlöslichen aber in hohem Grade hydratisiertes Polymer-Plastik wie Dextran oder Agarose (die Kohlenhydrate sind), gebildet werden oder Polyacrylamid.  Sephadex, Sepharose und Biogel sind allgemein verwendete Handelsvorbereitungen dieser Korne, die gewöhnlich 100 Mikrometer im Durchmesser sind.  Kleine Moleküle können diese Korne kommen, aber die große können nicht.  Das Resultat ist, dass kleine Moleküle in die wässerige Lösung innerhalb der Korne und zwischen sie verteilt werden, während große Moleküle nur in der Lösung zwischen den Kornen sind.  Große Moleküle fließen schnell durch diese Spalte und tauchen zuerst auf, weil ein kleinerer Datenträger zu ihnen zugänglich ist.  Es sollte beachtet werden, dass die Ordnung des Hervortretens der Moleküle von einer Spalte der porösen Korne die Rückseite der Ordnung in der Gelelektrophorese ist, in der ein kontinuierlicher Plastikrahmen die Bewegung der großen Moleküle behindert.  Viel größere Quantitäten Protein können durch Gelfiltrationchromatographie als durch Gelelektrophorese aber zu dem Preis der niedrigeren Auflösung getrennt werden.

Die Löslichkeit der meisten Proteine wird bei hohen Salzkonzentrationen gesenkt.  Dieser Effekt, genannt Aussalzen, ist sehr nützlich, obwohl nicht Vertiefung verstand.  Die Abhängigkeit von Löslichkeit auf Salzkonzentration unterscheidet sich von einem Protein zu anderen.  Folglich kann Aussalzen verwendet werden, um Proteine zu fraktionieren.  Aussalzen ist auch für das Konzentrieren der verdünnten Lösungen der Proteine nützlich.