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Mai erinnern sich jeder junge Wissenschaftler und nicht können, um an seine Augen geöffnet zu halten für nicht die Möglichkeit, daß ein irritierender Ausfall seines Apparates gleichbleibende Resultate kann oder in einer Lebenszeit eine wichtige geben, Entdeckung einmal zweimal zu verbergen. ~Patrick Blackett (britischer Physiker, 1897-1974)
Nahe UVABSORPTION ist UVABSORPTION bei 280 nm: Ein einfaches Spektrometer kann die Menge des Proteins in einer Lösung mengenmäßig bestimmen. Strahlung Absorption durch Proteine im nahen UV hängt vom Inhalt von Tyr und von Tr ab (und in einem Umfang auf der Menge von Phe und von Disulfidbindungen). So schwankt das A280 groß zwischen unterschiedliche Proteine (für eine 1 mg/mL Lösung, von 0 bis 4 [ für etwas Tyrosin-reiche Wolleproteine ], obgleich die meisten Werte in der Strecke 0.5 1.5–sind). Diese Methode hat seine Vorteile; sie ist einfach und die Probe ist wiederherstellbar. Seien Sie das, wie es es hat auch Nachteile, die einschließen, Störung von anderen Chromophoren kann, und der spezifische Absorption Wert für ein gegebenes Protein festgestellt werden muß. Die Löschung der Nukleinsäure in der Region 280-280-nm kann soviel wie 10mal sein, denen vom Protein an ihrer gleichen Wellenlänge und folglich, einige Prozente Nukleinsäure die Absorption groß beeinflussen können.
Absorption der Peptidbindung ist stark im weit UV mit einem Maximum an ungefähr 190 nm, den die starke Absorption der Proteine an diesen Wellenlängen in der Proteinermittlung verwendet worden ist. Wegen der Schwierigkeiten, die durch Absorption durch Sauerstoff und die niedrige Ausgabe der herkömmlichen Spektrofotometer an dieser Wellenlänge verursacht werden, werden Messen bequemer bei 205 nm gebildet, in denen die Absorption über Hälfte die bei 190 nm ist. Die meisten Proteine haben Löschungkoeffizienten bei 205 nm für eine 1 mg/mL Lösung von 30–35 und zwischen 20 und 24 bei 210 nm. Verschiedene Seitenketten, einschließlich die von Trp, von Phe, von Tyr, von seinem, von Cys, getroffen und von Arg (in dieser absteigenden Folge), bilden Beiträge zum A205. Die Vorteile dieser Methode schließen Einfachheit und Empfindlichkeit ein. Die Probe ist wiederherstellbar und zusätzlich gibt es wenig Veränderung der Antwort zwischen unterschiedlichen Proteinen und so ermöglicht nah-absolute Ermittlung des Proteins. Nachteile dieser Methode schließen die Notwendigkeit für genaue Kalibrierung des Spektrofotometers im weit UV ein. Viele Buffer und andere Bestandteile, wie heme oder Pyridoxalgruppen, saugen stark in dieser Region auf.
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