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Lowry Protein-Probe Protokoll

Protein-Konzentration Ermittlung durch das Lowry Prtoein Probe Protokoll

Materialien

1. Kompliziert-Formung des Reagens: Bereiten Sie sich direkt vor Gebrauch vor, indem Sie die folgenden auf lagerlösungen im Anteil 100:1:1 (durch Vol.), beziehungsweise mischen:
            Lösung A: 2% (w/v) Na2CO3 im destillierten Wasser.
            Lösung B: 1% (w/v) CuSO4·5H2O im destillierten Wasser.
            Lösung C: 2% (w/v) Natriumkaliumtartrat im destillierten Wasser.

2. Bereiten Sie 2 N NacOh Vor.

3. Folinreagens (im Handel erhältlich): Gebrauch bei 1 N Konzentration.

4. Standards: Benutzen Sie eine auf lagerlösung des Standardproteins (z.B., der Tierserum-Albuminbruch V), der das 2 mg/mL Protein im destillierten Wasser, gespeichert eingefroren an 20°C –enthält. Bereiten Sie Standards vor, indem Sie die auf lagerlösung mit destilliertem Wasser verdünnen, wie folgt:

Auf Lager Sie Lösung   (µL)     0         2.5      5          12.5     25        50        125      250      500

Wasser                (µL)     500      498     495      488      475      450      375      250      0
Protein conc.    (µg/mL) 0          10       20        50        100      200      500      1000    2000

Methode

1. 0.1 ml der Probe oder Standard, fügen Sie 0.1 ml 2 N NacOh hinzu. Hydrolysieren Sie an 100°C für 10 Minuten in einem Heizung Block oder in einem Siedewasserbad.

2. Kühlen Sie das Hydrolysat zur Raumtemperatur ab und fügen Sie 1 ml von frisch gemischt hinzu, Reagens kompliziert-bildend. Lassen Sie die Lösung bei der Raumtemperatur für 10 Minuten stehen.

3. Fügen Sie 0.1 ml des Folinreagens mit einem Turbulenzmischer, hinzu und lassen Sie den Mischung Standplatz bei der Raumtemperatur für 30–60 Minuten (übersteigen Sie nicht 60 Minuten).

4. Lesen Sie die Absorption bei 750 nm, wenn die Proteinkonzentration unter 500 µg/mL oder bei 550 nm war, wenn die Proteinkonzentration zwischen 100 und 2000 µg/mL war.

5. Plotten Sie eine Standardkurve der Absorption als Funktion der Ausgangsproteinkonzentration und benutzen Sie sie, um die unbekannten Proteinkonzentrationen festzustellen.

Lowry Methode Referenzen

Gegründet auf Protokoll durch Jakob H. Waterborg.

Lowry et al.. J. Biol. Chem. 193: 265-275 (1951)

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