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Bradford Protein-Probe

Protein-Konzentration Ermittlung durch die Bradford Probe

Eine einfache Prozedur für die Ermittlung der Proteinkonzentration in den Lösungen ist die Bradford Proteinprobe, die zuerst durch Bradford beschrieben wurde (Bradford et al., 1976).

Eine Schätzung der Proteinkonzentration ist wesentlich, und genau in vielen schnell getan zu werden fängt von der Proteinstudie auf. Die Bradford Probe ist die bevorzugte Methode für das Mengenmäßig bestimmen des Proteins in vielen Labors geworden. Diese Technik ist einfacher, schneller, und empfindlicher als die Lowry Methode. Ausserdem im Vergleich zu der Lowry Methode, ist sie abhängig von weniger Störung durch geläufige Reagenzien und nicht proteinartige Bestandteile der biologischen Proben.

Die Bradford Probe beruht auf der Schwergängigkeit der Färbung Coomassie blaues G-250 zum Protein.

Ausführliche Studien zeigen an, daß die freie Färbung in vier unterschiedlichen Ionenformen existieren kann, für die die pKa Werte 1.15, 1.82 und 12.4 sind. Von den drei belasteten Formularen der Färbung, die in der säurehaltigen Probe Reagenslösung, in den kationischeren roten und grünen Formen vorherrschen, haben Sie Absorption Maxima bei 470 nm und 650 nm, beziehungsweise. Demgegenüber hat das anionischere blaue Formular der Färbung, die an Protein bindet, ein Absorption Maximum bei 590 nm.

So kann die Quantität des Proteins geschätzt werden, indem man die Menge der Färbung in der blauen Ionenform feststellt. Dieses wird normalerweise erzielt, indem man die Absorption der Lösung bei 595 nm mißt.

Die Färbung scheint, an arginyl und Lysylüberreste der Proteine am betriebsbereitesten zu binden. Diese Besonderheit kann zu Veränderung der Antwort der Probe zu den unterschiedlichen Proteinen führen, die der Hauptnachteil der Methode ist. Die Vorlage Bradford Probe zeigt große Variante in der Antwort zwischen unterschiedlichen Proteinen. Einige Änderungen an der Methode sind entwickelt worden, um dieses Problem zu überwinden.

Jedoch ergeben diese Änderungen im Allgemeinen eine weniger robuste Probe, die häufig gegen Störung durch andere Chemikalien empfindlilcher ist. Infolgedessen bleibt die ursprüngliche Methode, die durch Bradford geplant wird, die bequemste und allgemein verwendete Formulierung. Zwei Typen Probe werden hier beschrieben: die Standardprobe, die für das Messen zwischen µg 10 und 100 des Proteins verwendbar ist, und die Mikroanalyse, die zwischen µg 1 und 10 des Proteins entdeckt. Das letzte, obgleich empfindlicher, ist auch zur Störung von anderen Mitteln wegen der grösseren Menge Beispieldes relative.to Färbung Reagens in dieser Form der Probe vornübergeneigter.

sehen Sie auch: Bradford Protein-Probe Protokoll

Bradford Methode Referenzen

Bradford, Anal. Biochemie. 72: 248. 1976.

 

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