Erlernen Sie über Protein-Reihen

Protein-Reihen-Installationssätze und Produkte

Typen von ProteinMicroarray und von Antikörper-Chips

Proteinund AntikörperMicroarrays

Protein-Chipsund AntikörperMicroarrays - Objektträger, Microwell/Nanowell

Zwei Hauptproteinchip-Formate werden jetzt, einschließlich Objektträger und nanowells (8.27) verwendet. Wegen der großen Mengen von Plättchenhaftfähigkeitsmethoden nur die geläufigsten und hauptsächlichtypen werden hier erwähnt.
Es ist wichtig, dass Proteinchips Proteine in einem aktiven Zustand an der Höhe - Dichten beibehalten, mit den meisten Handelsarrayers und den Scannern kompatibel sind und in solch einer Art und Weise gedruckt werden können, dass die Proteine in einer befeuchteten Umgebung (8.27) bleiben. (Siehe Abbildung 2).

Objektträger-Chips
Objektträger haben den Vorteil, dass sie mit Standardmicroarrayausrüstung und der Abfragungsausrüstung kompatibel sind, die für DNA-Chips benutzt wird. Sie sind auch billig. Die Mehrheit einen Studien benutzen jetzt Objektträger. Jedoch haben sie eine hohe Verdampfungkinetik und sind gegen mögliche Querkontamination (8.27) empfindlilch.
Die ersten Strategien für die Kreation der Proteinreihen auf Glas wurden von Mirzabekov et al. entwickelt. Reihen wurden durch stillstellende Proteine in den kleinen Geltaschen produziert, die zur Glasoberfläche angebracht wurden. Eine Vielzahl von Immunoassays, Antigenabfragung und enzymatische Proben wurden durchgeführt. Wegen der Struktur der Matrix 3D, Proteinimmobilisierung war sehr leistungsfähig (28-30).
In einer anderen Studie wurden Proteine zu einer Glasoberfläche angebracht, die mit einem querverbindenmittel aktiviert war, das mit Primäraminen (31) reagiert. Proteine wurden in einer 40% Glyzerinlösung beschmutzt, die Proteine in einer nassen Umgebung hält und Dehydratisierung verhindert. Um festzustellen dass ihre Protein Microarrays für biochemische Proben durchführbar waren, prüften sie drei bekannte Proteinprotein Interaktionen, drei bekannte Kinasesubstrat Reaktionen und drei bekannte ProteinLigandinteraktionen unter Verwendung der fluorophore-etikettierten Proteine, radioaktiven Atps und der synthetischen Ligands, die zu Leuchtstoff beschriftetem Rinderserumalbumin (BSA) verbunden wurden, beziehungsweise. In die meisten Experimenten, wurden eine geringe Anzahl Proteine jedoch in einem Experiment beschmutzt, das sie einen einzelnen Punkt innerhalb einer Reihe von 10.000 Punkten identifizierenten, die ein anderes Protein enthalten. Diese Arbeit zeigte das Potenzial von Protein Microarrays in den großräumigen biochemischen Proben, jedoch, das ihre Studie eine sehr kleine Anzahl von Proteinen analysierte und Romanaktivitäten wurden nicht identifizierent.
Eine andere Studie benutzte Objektträger für die Abfragung einiger Proteinantigene. Parameter wurden auf eine behandelte Glasoberfläche am High-density unter Verwendung einer Handaufdeckung Einheit oder eines Microarrayroboters beschmutzt. Die beschmutzten Parameter wurden unter Verwendung der Antikörper entdeckt, die zu einer Oligonucleotidezündkapsel und zu einer Rollenkreisverstärkungsreaktion angebracht wurden. Die Technik hatte eine hohe Empfindlichkeit, breiten Dynamikwerte und ausgezeichnete Punkt-zupunkt Reproduzierbarkeit
(32).
Die meisten Gruppen jetzt kleiden direkt Proteine und Antikörper auf normale Objektträger (31.33-35) und Aufdeckung wird in einer Feuchtigkeit-kontrollierten Umgebung (8) durchgeführt.

Microwell/Nanowell Chips
Kompatibel mit Standardmicroarray- und Abfragungsausrüstungsjedoch Ausrichtung wird benötigt. Diese Methode ist für Lösung-gegründete Proben und Mehrfachbestandteil Reaktionen versatible. Verdampfung wird verringert und es gibt keine Querkontamination. Auch diese Chips sind verhältnismäßig billig (8.27).
Zhu et al., fabriziert einer geöffneten Struktur, nämlich nanowells auf einer polydimethylsiloxane (PDMS) Oberfläche unterstützt durch die Standardobjektträger (6).
Diese Chips bestehen einer Reihe aus microwells in einem Wegwerfsilikonelastomer, Poly (dimethylsiloxane) (PDMS) (37). Microwell Reihen erlauben, dass kleine Datenträger der verschiedenen Parameter dicht auf einem einzelnen Chip gepackt werden, dennoch bleiben physikalisch während der folgenden Stapelverarbeitung getrennt. Proteine wurden kovalent zu den Vertiefungen unter Verwendung eines Crosslinker 3 glycidoxypropyltrimethoxysilane (GPTS) angebracht (38).
Erfasste Moleküle können von den nanowells leicht erholt werden. Wenn es mit Gold in den nanowells bedeckt wird, wird es erwartet, dass Hochdurchsatz Massenspektrometrie und Oberfläche Plasmonresonanzanalysen durchgeführt werden können. Der größte Nachteil dieser Technik ist, dass specialzed Ausrüstung benötigt wird, um die nanowells am High-density (8.27) zu laden.

Zunächst: Protein-und Antikörper-Zubehör-Methoden - Kreation eines Microarray-Chips

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Einleitung und Hintergrund zu den Protein-Chips und zu den Antikörper-Chips.

Referenzen für Proteinund AntikörperMicroarrays