Bioinformatics, Protokolle, DNA RNS Protein Proteomics

Biologie-Haupt protokolle Bioinformatic Bearbeitet Biologie-Forum- Molekulare Biologie-Enzyklopädie, die Molekulare Biologie-Bilder Uns Bookmarken!

Haupt > Protein-microarrays > Protein-Chip-Zubehör > index.php

Molekulare Biologie-Haupt wissenschaft Nachrichten Wissenschaft Videos DNA RNS Protein Proteomics Forschung BETA! Bioinformatics Laborausrüstung molekulare Biologie-Technik- molekulare Biologie-Produkte und Service- in Verbindung stehende Biologie-Links

Molekulare Biologie Blog

Schicken Sie einem Freund diese Seite

Intrazelluläre Stationen

Antikörper- Botanik- geläufige Buffer- Buffer-alphabetische Buchhandlung- Zelle Biologie-und Kultur- Gel-Elektrophorese- Gewebelehre Microarrays Immunitätsforschung- Massenspektrometrie- Mikrobiologie- molekulare Belichtung Peptid Proteomics Protein Microarray Chips PCR Echtzeit-PCR RNAi und SiRNA Stammzelle-Biologie Transfection westlicher Fleck

Protein-Reihe Protokolle	Protein-Reihe Bioinformatics	Erlernen Sie über Protein-Reihen	Protein-Reihe Installationssätze und Produkte	Protein-Reihe Forum	Proteomic Nachrichten

Protein-Zubehör zu den Microarray Chips

Protein und Antikörper Microarrays

Kreation und Herstellung der Protein und Antikörper Microarray Chips

Zubehör
            Um Proteine zu einer festen Oberfläche anzubringen, muß die Oberfläche des Substrates geändert werden um maximale Bindefähigkeit (8.27) zu erzielen.  Die Proteine werden zum Chip auf einer Proteinzubehörschicht angebracht (siehe Abbildung 3).  Diese Schicht ist gewöhnlich ein organischer Film, der mit der Natur der Anwendung schwankt.  Eine Vielzahl der Materialien ist einschließlich Agarose (39), Dextran-gegründetes Hydrogel (40), hydrophile Polymer-Plastiken des porösen Polyacrylamid  hydrogels und polyamino Säuren (41) studiert worden.
            Eine bequeme Zubehörmethode benutzte Nitrozellulose-Membrane, oder Poly--L-Lysin beschichtete Glas so, daß Proteine auf die Oberfläche durch unspezifische Interaktionen (34.42.43) passiv aufgesogen werden konnten.  Die angebrachten Proteine binden auf die Oberfläche in den gelegentlichen Lagebestimmungen und können weg unter zwingenden waschenden Bedingungen gewaschen werden.  Jedoch ist der Geräuschpegel normalerweise wegen des unspezifischen absorption/adsorption höher. 
            Ein spezifischeres und stärkeres Zubehör wird erzielt, indem man reagierende Oberflächen auf Glas erstellt, das kovalent Querverbindung zu den Proteinen (31.36.26) kann.  Ein bifunctional Siliziumwasserstoff Cross-linker wird benutzt, um einen Selbst-zusammengebauten monomolekularen Film (SAM), das eine Funktionsgruppe, die hat mit den Hydroxylgruppen auf Glas die Glasoberfläche reagiert, und eine andere Gruppe zu bilden, die frei ist, mit Primäramingruppen Proteinen zu reagieren oder weiteres sein kann chemisch geändert zur maximalen Besonderheit der Reichweite (44.45).  Eine andere Variante ist Gold-überzogenes Glas (46.47).  Der Vorteil der Gold-überzogenen Chips ist, daß SPR und Massenspektrometrie als Abfragung Methoden integriert werden können, um die Dynamik der Reaktion zu überwachen, und die erfaßten Moleküle zu kennzeichnen.
            Die obenerwähnten kovalenten Vernetzung Annäherungen haben jedoch einen Nachteil. Wegen der Tatsache, daß reagierende ligands auch in den Seitenketten der Proteine existieren, ist es möglich, daß ihr gelegentliches Zubehör die gebürtige Bestätigung der Proteine ändern, die Aktivität der Proteine verringern kann, oder sie zu den Prüfspitzen (8.27) unzugänglich bilden.
            Um Proteine uniformily weg von der Oberfläche des Chips zu orientieren, können Proteine mit einer Hochaffinität Marke an ihren Amino- oder carboxy Termini fixiert werden.  Mit dieser Methode sind stillgestellte proteins/antibodies wahrscheinlicher, in ihrer gebürtigen Anpassung zu bleiben und so erlauben den Parametern leistungsfähigen Zugriff zu den aktiven Sites der Proteine.  Diese Methode war erste erfolgreich demonstriert mit dem Zubehör von 5800 Schmelzverfahren Proteinen, die eine seine Marke auf einen Nickel-überzogenen Objektträger (26) enthalten.  Andere Affinität Methoden wie glutathione/GST sind auch verwendet worden (48).
Streptavidin gegründete Immobilisierungmethoden sind auch weit eingesetzt worden, um irgendwelche anzubringen biotinylated biologisches Element zur Reihe Oberfläche (49).
            Das Chip-Hilfsmaterial ist wichtig, weil Proteine für physiochemische Eigenschaften in hohem Grade empfindlich sind.  Z.B. werden polare Reihen chemisch behandelt, um an hydrophile Proteine zu binden, jedoch, das solche Oberflächen für Zelle Membrane Proteine unpassend sind (z.B. G-Protein verbundene Empfänger) wie sie hydrophobe Gebiete (9) besitzen. 
            Proteine benehmen nicht sich wie Nukleinsäuren, und unterschiedliche Proteine benehmen sich in den unterschiedlichen Methoden, wenn sie der gleichen Oberflächenchemie herausgestellt werden.  Die unterschiedlichen Typen Oberflächenchemie fördern folglich die Speicherung von etwas Proteinen und verursachen Denaturierung oder Verlust der Aktivität von anderen.  Folglich ist die korrekte Wahl von Oberflächenchemie wichtige, da diese stillgestellte Proteine der verschiedenen Typen ihre Sekundär- und tertiären Strukturen beibehalten läßt, und folglich ihre biologische Aktivität.  Dieses Problem wird vergrößert, wenn die Zahl unterschiedlichen Punkten auf den Chip-Zunahmen, als dort 100 unterschiedliche Möglichkeiten sein kann, 100 unterschiedliche Proteine stillzustellen, um korrekte Falte und Funktion aller Proteine zu erhalten.  Auch ein bedeutendes Problem ist, weil die Funktionen der meisten Proteine aktuell Unbekanntes sind, so dort ist keine Methode, zum wirklich zu prüfen, ob sie noch auf dem Chip (7) funktionell sind.

Zunächst: Protein-Chip-Anlieferung Methoden

Referenzen für Protein und Antikörper Microarrays

Zurück zu:

Einleitung und Hintergrund zu den Protein-Chips und zu den Antikörper-Chips.

Typen der Antikörper-und Protein-Chips