Zündkapsel-Extension

Erlernen Sie über Zündkapselextension.

Zündkapselextension erhöht die Genauigkeit in der Fähigkeit, das Ende einer Abschrift ' Ende von den 5 abzubilden zum Nukleotid.

Wie Zündkapsel-Extensions-Arbeiten

1. Zuerst haben wir Übertragung, die normalerweise natürlich in vivo auftritt. Wir ernten einfach die zellulare RNS, welche die Abschrift enthält, deren 5 ' uns möchten abbilden beenden Sie. 
2. Dann hybridisieren wir einen beschrifteten Oligonucleotide (die Zündkapsel) von mindestens 12 Nukleotiden zur zellularen RNS.  Normalerweise werden Zündkapseln von mindestens 18 Nukleotiden lang benutzt.  Zwecks eine Zündkapsel konzipieren, die wir die Reihenfolge des mindestens Teils der RNS kennen müssen, wir abbilden möchten.  Die Besonderheit dieser Methode berechnet von der Komplementarität zwischen der Zündkapsel und der Abschrift, gerade da die Besonderheit des Abbildens S1 von der Komplementarität zwischen die Prüfspitze und die Abschrift kommt.  Prinzipiell sollte diese Zündkapsel in der Lage sein, die Abschrift auszuwählen, die wir von einem Meer von anderem ohne BezugRNAs abbilden möchten.
3. Dann verwenden wir Rücktranscriptase, um die Oligonucleotidezündkapsel bis ' Ende die 5 auszudehnen der Abschrift. Das Rücktranscriptase erstellt ein DNA-Exemplar von einer RNS-Schablone.  Sobald diese Zündkapselextensionsreaktion komplett ist, können wir den RNA-DNA Mischling denaturieren und electrophorese die beschriftete DNA zusammen mit Markierungen auf einem hochauflösenden Gel wie den, die beim DNA-Sequenziell ordnen verwendet werden.  Es ist bequem, die gleiche Zündkapsel zu benutzen, die während der Zündkapselextension benutzt wird, um ein Set des Sequenziell ordnens von Reaktionen mit deoxynucleotides zu tun.  Dann können wir die Produkte dieser sequenziell ordnenden Reaktionen als Markierungen benutzen.

Zündkapselextension kann uns eine Schätzung der Konzentration einer gegebenen Abschrift auch geben.  Das höher die Konzentration unserer Abschrift, mehr die Moleküle der beschrifteten Zündkapsel hybridisieren und folglich beschriftet Rückdie abschriften, das dunkler das Band auf dem Autoradiograph des elektrophoretischen Gels.

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