Pcr-Beispiel- und Schablone DNA

Schablone DNA und Proben für PCR

Korrekturlinien für Schablone DNA und Proben für PCR:

Pcr-Proben:  Typen, Menge und Reinheit

Typen der Proben für PCR

Single- oder double-stranded DNA jedes möglichen Ursprung kann eine PCR-Probe sein. Schablonen, die für Verstärkung benutzt werden können, umfassen Tier-, bakterielles, Anlage oder Viren. Konvertierung der RNS-Moleküle, einschließlich Gesamt-RNS, Poly RNS (A+), Viren-RNS, tRNA oder rRNA muss vor Verstärkung auftreten, wenn sie diese wie Schablonen zu so genannter ergänzender DNA (cDNA) durch das Enzymrückseite transcriptase verwendet (entweder MuLV oder recombinant, rTth DNA-Polymerase).

Menge Material für PCR

Die Ausgangsmaterialmenge, die für PCR erforderlich ist, kann so wenig wie ein einzelnes Molekül sein.  Als Grundlage bis zum nanogram klonten Mengen DNA Schablone, bis zu den Mikrogrammmengen genomic DNA, oder bis 105 DNA-Zielmoleküle sind für Anfangs-PCR-Prüfung am besten.

Reinheit der Schablone und der Probe für PCR

Reinheit der DNA-Probe, die für PCR-Verstärkung benutzt wird, tut nicht braucht, nicht hoch zu sein. Eine Einzelzelle, ein grobes Zelle lysate oder sogar eine kleine Probe der verminderten DNA-Schablone ist normalerweise für erfolgreiche Verstärkung ausreichend. Die Anforderungen der Beispielreinheit müssen sein, dass das Ziel mindestens einen intakten DNA-Strang enthält, der die verstärkte Region umgibt und dass die Verunreinigungen, die mit dem Ziel verbunden sind, verdünnt sind, um Enzymaktivität nicht zu hemmen. Seien Sie das, wie es, für einige Verstärkungen, wie langen PCR kann, es kann notwendig sein, um die Qualität und die Quantität der DNA-Probe zu betrachten. Z.B.: 1. Wenn mehr Schablonenmoleküle vorhanden sind, gibt es weniger Vorkommen der falschen Positive, die entweder durch Querkontamination zwischen Proben oder „Übertrag“ Verschmutzung von den vorhergehenden PCR-Verstärkungen verursacht werden.

2. Wenn die PCR-Verstärkungen Besonderheit oder Leistungsfähigkeit ermangelt oder wenn die Zielreihenfolgen begrenzt sind, gibt es eine größere Wahrscheinlichkeit des unzulänglichen Produktertrags.

3. Wenn der Bruch des Beginnens von DNA vorhanden für PCR unsicher ist, ist es in zunehmendem Maße schwierig, den Ziel DNA-Gehalt festzustellen.