Analyse der PCR-Produkte

Agarose-Gel-Elektrophorese-Analyse der PCR-Produkte

Zu schnell und analysieren Sie leicht und lösen PCR-Produkte, ein 3% NuSieve kann benutzte GTG Agarose (FMC Bioproducts sein, Rockland, ICH) und 1% Seakem GTG Gel der Agarose (FMC Bioproducts) laufen entweder in TBE (89 Millimeter Tris-borsaures Salz, das 2 Millimeter-EDTA) oder TAE (40 Millimeter Tris-Azetat, das 2 Millimeter-EDTA, pH ca. 8.5). Die entschlossenen DNA-Bänder werden, indem man die Gele entweder mit ca. 0.5 μg/mL des Äthidiumbromids befleckt entdeckt, gefolgt, vom Destaining mit Wasser oder SYBR® Grün 1 (Molecular Probes Inc., Eugene ODER) und fotografiert schließlich, unter UVablichtung. Benutzen Sie ein basepair 123 (BP) oder 1 kilobasepair (kbp) Strichleiter als bequeme Markierung für Größenschätzungen der Produkte.

Andere analytische Methoden, zum der PCR-Produkte zu analysieren

Es gibt eine Vielzahl anderer Abfragungsmethoden, die für PCR-Produktanalyse vorhanden sind, wie Äthidium Bromid-befleckte 8-10% Polyacrylamidgele gelaufen in TBE Buffer, südliche Gele oder Punkt/Flecken, das Subcloning und das direkte Sequenziell ordnen, HPLC-Analyse und den Gebrauch von 96 wohlen microplates, einige zu benennen. Die Rück Punkt-beflecken Methodenmähdrescher PCR-Verstärkung mit inaktiver Abfragung. Die Einleitung der Leuchtstofffärbungen zu PCR, zusammen mit einem verwendbaren Instrument für Echtzeit-, Onlinequantifikation der PCR-Produkte während der Verstärkung hat zu die Entwicklung kinetischen PCR oder des quantitativen PCR geführt. Quantitativer PCR (QPC) misst PCR-Produktaufspeicherung während der exponentialen Phase der Reaktion und bevor Verstärkung d.h. verletzbar wird wenn Reagenzien begrenzt werden. Das ABI Prisma 7700 (angewandte Biosysteme) und das LightCycler (Roche molekulare Biochemikalien, Mannheim, Deutschland) sind integrierte Leuchtstoffabfragungseinheiten, die die kontinuierlich überwachende Fluoreszenz entweder oder einmal pro Schleife erlauben. Diese Instrumente können PCR-Produkte durch ihre Schmelzeigenschaften auch kennzeichnen z.B. um singlebase Veränderungen von einem Wildtypen Reihenfolge abzusondern. Das vor kurzem konzipierte Mx4000™ quantitative PCR-Multiplexsystem (Strategene, La Jolla, CA) Kann Daten für mehrfache Leuchtstoff Proben der Istzeit QPCR festlegen und analysieren.