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HPLC- Hoch-Leistung Flüssige Chromatographie

Die Hoch-Leistung Flüssige Chromatographie-Technik

Die Analyse der Peptide und der Proteine ist durch die Einleitung von HPLC revolutioniert worden. HPLC läßt die schnelle und empfindliche Analyse der Peptid- und Proteinstruktur zu. Er hat unsere Analyse im Verständnis der biologischen Prozesse und in der Entwicklung des Peptids und Protein gegründet pharmazeutische Produkte vereinfacht.

Aber HPLC stoppt nicht dort, ist es Anwendungen im Peptid und Proteinreinigung fährt fort, mit einer extrem schnellen Kinetik zu erweitern. Z.B. haben festphasige Peptidsynthese und recombinant DNA Techniken die Produktion der großen Quantitäten Peptide und Proteine erlaubt, die in hohem Grade gereinigt werden müssen. Auch eine andere sehr wichtige Anwendung für HPLC im Pfosten-genomic Alter ist, daß seine Techniken weitgehend in der Lokalisierung und in der Kennzeichnung der Romanproteine verwendet werden.

Bedeutendstes Merkmal des HPLCs würde seine ausgezeichnete Zerlegung, das leicht unter einer breiten Strecke der Bedingungen für sehr nah in Verbindung gestandene Moleküle erzielt wird, sowie strukturell ziemlich eindeutige Moleküle sein. Dieses Merkmal ist von der Tatsache, daß aller Dialogverkehr der Chromatographie auf Anerkennung Kräften basiert, die durch Änderungen in Eluierungzuständen subtil manipuliert werden können, die für den bestimmten Modus der Chromatographie spezifisch sind. Peptide und Proteine wirken auf die chromatographische Oberfläche in einer Lagebestimmung spezifischen Weise ein, in der ihre Speicherzeit durch den molekularen Aufbau der spezifischen Kontaktregionen festgestellt wird. Für größere Polypeptide und Proteine, die einen bedeutenden Grad der Sekundär- und tertiären Struktur annehmen, enthält die chromatographische Kontaktregion einen kleinen Anteil von der molekularen totaloberfläche. Alle biologischen Prozesse hängen von den spezifischen Interaktionen zwischen Molekülen ab und Affinität Chromatographie nutzt diese spezifischen Interaktionen aus, um die Reinigung eines Biomoleküls auf der Grundlage von seine biologische Funktion oder einzelne chemische Struktur zu erlauben.

Speicher-und Bandweite-Verhältnisse von HPLC

Speicherzeit oder tr im HPLC beträgt die Zeit, die für einen aufgelösten Stoff zu vergehen durch eine chromatographische Spalte gedauert wird. Diese Speicherzeit wird als die Zeit gemessen, die durch den aufgelösten Stoff, nach Einspritzung, um von der Spalte aufzutauchen gedauert wird und entdeckt zu werden. Um zu erlauben daß Speicherzeiten mit unterschiedlichen Spalten oder unter unterschiedlichen Bedingungen, die Speicherzeit eines aufgelösten Stoffs wird normalerweise verglichen mit der Speicherzeit eines Moleküls verglichen werden das nicht auf der spezifischen Spalte des Interesses beibehalten wird. Dieses erlaubt, daß der unitless Kapazität Faktor k ' eines aufgelösten Stoffs in der Speicherzeit tr ausgedrückt, durch das Verhältnis ausgedrückt wird