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FACS

Die FACS Technik

Stillstehende Lymphozyten enthalten viele Funktionsunterbevölkerungen, die von einander auf der Grundlage von differentialen Ausdruck des Erben der Zelle Oberfläche Proteine gekennzeichnet und unterschieden werden, die spezifische Antikörper, zu verwenden entdeckt werden können.

Fluß Cytometry

Ein leistungsfähiges Hilfsmittel für das Definieren und das Mengenmäßig bestimmen der Lymphozyten ist das Fluß cytometer, das die einzelnen Zellen entdeckt und zählt, die in einen Strom durch einen Laserstrahl überschreiten. Ein Fluß cytometer, das ausgerüstet wird, um die gekennzeichneten Zellen zu trennen, wird einen Fluoreszenz-aktivierten Zelle Sorter (FACS) genannt. Diese Instrumente werden benutzt, um die Eigenschaften der Zelle Teilmengen zu studieren, die mit monoclonal Antikörper Zelle-Oberfläche Proteinen gekennzeichnet werden. Einzelne Zellen innerhalb einer Mischbevölkerung werden zuerst durch Behandlung mit den spezifischen monoclonal Antikörpern etikettiert, die mit Leuchtstofffärbungen beschriftet werden, oder durch die spezifischen Antikörper, die von beschrifteten Anti-Immunoglobulin Antikörpern gefolgt werden. Die Mischung der beschrifteten Zellen wird dann mit einem vielen arger Datenträger von salzigem durch eine Düse erzwungen und stellt einen feinen Strom der Flüssigkeit die Zellen enthalten her, die einzeln in Abständen gesperrt werden. Da jede Zelle durch einen Laserstrahl ihn führt, zerstreuen das Laserlicht, und alle mögliche Färbung Moleküle, die zur Zelle gesprungen werden, werden aufgeregt und fluoreszieren.

Empfindliche Photovervielfachergefäße entdecken das zerstreute Licht, das Informationen über die Größe und das granularity der Zelle gibt, und die florescence Emissionen, die Informationen über die Schwergängigkeit der beschrifteten monoclonal Antikörper und folglich auf dem Ausdruck der Zelle-Oberfläche Proteine durch jede Zelle geben. Im Zelle Sorter werden die Signale, die zurück zu dem Computer geführt werden, benutzt, um eine elektrische Ladung, die festzulegen von der Düse durch den flüssigen Strom zur exakten Zeit geführt wird, die der Strom oben in Tröpfchen bricht, jedes, das nicht mehr als eine Einzelzelle enthält; die Tröpfchen, die eine Ladung enthalten, können vom Hauptstrom der Tröpfchen dann abgelenkt werden, während sie zwischen Platten der gegenüberliegenden Ladung, damit positiv belastete Tröpfchen zu einer negativ belasteten Platte angezogen werden, und umgekehrt überschreiten. Auf diese Art können die spezifischen Unterbevölkerungen der Zellen, unterschieden durch die Schwergängigkeit des beschrifteten Antikörpers, von einer Mischbevölkerung der Zellen gereinigt werden. Wechselweise eine Bevölkerung der Zellen zu verbrauchen, kann das gleiche Fluorochrom benutzt werden, um unterschiedliche Antikörper zu beschriften verwiesen an den Markierung Proteinen, die nach den verschiedenen unerwünschten Zelle Typen ausgedrückt werden.

Zelle Sortieren

Der Zelle Sorter kann benutzt werden, um beschriftete Zellen auf eine überschüssige Führung zu verweisen und nur die unbenannten Zellen beibehalten. Wenn Zellen mit einem einzelnen Leuchtstoffantikörper beschriftet werden, werden die Daten vom Fluß cytometer normalerweise in Form eines Histogramms von Fluoreszenzintensität gegen Zelle Zahlen angezeigt. Wenn zwei oder mehr Antikörper verwendet werden, sind jeder, der zur unterschiedlichen Leuchtstofffärbung verbunden werden, dann die Daten normalerweise innen angezeigt er sich bilden von einem zweidimensionalen Korrelationsdiagramm oder als Formdiagramm, in dem die Fluoreszenz von einer, die Antikörper färben-beschriftet wird, gegen die einer Sekunde geplottet wird, mit dem Resultat, daß eine Bevölkerung der Zellen, die mit einem Antikörper beschriften, durch sein Beschriften mit dem zweiten Antikörper weiter unterteilt werden kann. Indem sie viele Zellen überprüft, fließen cytometry Dose geben quantitative Daten bezüglich des Prozentsatzes der Zellen, die unterschiedliche Moleküle tragen. Da die Energie der FACS Technologie gewachsen ist, nach und nach können mehr Antikörper, die mit eindeutigen Leuchtstofffärbungen beschriftet werden, gleichzeitig benutzt werden.

Drei, vier und glätten fünf Zerlegungen von Farben können durch sehr leistungsfähige Maschinen jetzt gehandhabt werden

FACS Protokolle