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Nährmedia-Bakterielle Kultur

Informationen über das Wachstum der bakteriellen Kulturen mit Nährmedia-Suppen und Kultur-Platten

Inhaltsverzeichnis:

Bakterielle Kultur-Fehlersuch-und Forum-Themen

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Was ist Nährmedia-Definition?

"chemisch, wie alle weiteren lebenden Zellen, bestehen Mikroorganismen aus organischem und anorganischem Stickstoff und Mineralsalzen; es ist folglich notwendig, um einen Mikroorganismus zu wachsen, diesen diese drei Kategorien der Substanzen wird zur Verfügung gestellt, zusammen mit Sauerstoff, der zur Lebensdauer aller lebenden Strukturen ein wesentliches ist. Schließlich ist eine bestimmte Menge Feuchtigkeit absolut notwendig." (Besson.)

Eine Nahrung bereitete sich für das Wachstum der Mikroorganismen wird gegeben den allgemeinen Bezeichnung Nährstoffmedium vor. Viele Mikroorganismen wachsen betriebsbereit oder nach in den leicht vorhandenen Nährmedia, als Milch, Fleischbrühe, usw.. Etwas microorgan isms haben weit unterscheidene Nahrungsmittelanforderungen und benötigen für die Wachstumnährmedia, die sich weit in ihrem Aufbau unterscheiden.

Jedoch gibt es einige allgemeine Richtlinien, die in der Vorbereitung aller Nährmedia für den Gebrauch der Mikroorganismen angewendet werden müssen. Diese sind kurz, das:

Jeder Kulturmedium muß

1. Enthalten Sie die Substanzen, die für Wachstum notwendig sind.
2. Seien Sie von der verwendbaren Reaktion.
3. Seien in den Behältern enthalten Sie, die Schutz vor Verschmutzung von den äußeren Quellen sich leisten.

Klassifikation von Nährmedia

Kulturmedia können wie eingestuft werden:

I. Natürliche Media, wie, auftretend in der Natur z.B. Milch, Kartoffel und anderes Gemüse, Fleisch und Fleischprodukte, Blut und Blutserum, Ei, Boden, usw..

II. Vorbereitete Media d.h. gebildet im Labor. Diese sind:

(a) Von unbekanntem chemischem Aufbau; z.B. Nährnährboden, Gelatin, usw..

(6) Chemiefasergewebe; d.h. chemischer Aufbau bekannt z.B. Giltay Lösung für denitrifizierende organismen.

Oder wie:

I. Flüssige Media. Diese schließen ein:

A. Media gebildet vom tierischen Gewebe und von den Flüssigkeiten z.B. Nährsuppe, Serumsuppe, Kohlenhydratsuppen, Milch, Blut, Nitratpeptonlösung, Lösung Dunhams.

B. Media gebildet vom Gemüsegewebe. Unter diesen seien Sie: Malzextrakt (gekeimte Gerste), Bierwürze, Hefeextrakt, Heuinfusion, natürliche Fruchtsäfte, Weine (gegorene Fruchtsäfte).

C. Synthetische Media.

II. Feste Media. Dieses wird mav wie eingestuft:

A. Liquefiable z.B. Nährnährboden, Nährgelatin.

B. Nicht-non-liquefiable, schließend ein: 1. Die Media, die in einem Naturzustand aber flüssig sind, der, sobald verfestigt kann, nicht mit körperlichen Mitteln die z.B. Media verflüssigt werden, die aus albuminous Flüssigkeiten vorbereitet werden und Gewebe wie Ei, Blutserum, etc., oder die synthetischen Media verfestigten sich mit Natriumkieselsäureverbindung.

2. Media, die im Naturzustand z.B. Gemüsemedia wie Kartoffel, Karotte, Banane, usw. fest sind.

 

 

ÜBUNG 3. TITRIERUNG VON MEDIA

Die Titrierung der bakteriologischen Media, die vom Fleisch gebildet werden, ist ein wichtiger Jobstep in ihrer Vorbereitung, da Mikroorganismen für die Reaktion des Nährsubstrates empfindlich sind.

Prozedur. Die folgende Methode wird für Labormedia, mit Ausnahme von Milch, Würze, Zider, Essig, Fruchtsäften, usw. verwendet. Sehen Sie P. 22.

1. Setzen Sie 5 c.c. vom geprüft zu werden Medium und von 45 c.c. vom destillierten Wasser in einem Abdampfgefäß.

2. Blutgeschwür lebhaft eine Minute mit Konstante dem Rühren (alles aufgelöste CO2 abtreiben, das als Säure registriert).

$. fügen 1 c.c. Phenolphthaleinlösung für Anzeige hinzu.

4. Titrieren Sie, wenn heiß, vorzugsweise beim Kochen, mit Hydroxid des Natrium N/20 oder Salzsäure N/20 als das Fallde mands. ' ein schwaches, aber eindeutige Permanente rose Farbe kennzeichnet den Endpunkt. Diese Farbe sollte für fünf Minuten permanent bleiben.

5. Berechnen Sie und speichern Sie die Reaktion des Mediums in den Grad der natürlicheren Größe, die die Zahl Kubikcenti Meßinstrumenten Normal * die Säure oder Alkali ist, die in 1000 Kubik vorhanden ist

* Eine Lösung soll normal, wenn sie 1 Gramm gleichwertiges alent einer Säure oder der Unterseite in 1 Liter enthält.

Ein Grammäquivalent einer Säure oder der Unterseite ist diese Quantität, der mit gleichwertig ist oder das 1-Gramm-Molekül einer einbasischen Säure oder der Monsäure Unterseite neutralisieren wird.

Der Vorteil des Systems ist dieses 1 c.c. von jedem möglichem Normal neutralisiert sich Lösung genau oder ist genau das Äquivalent zu 1 Milligramm equiva verliehen von irgendeiner Säure oder von Unterseite. (Noyes, Wm. A., Lehrbuch von Chemistry, 1913, P. 184.)

TITRIERUNG VON MEDIA 21

Zentimeter vom mittleren mit Phenolphthalein als indi cator.

6. Alkalische Milieus werden bezeichnet, indem man a minus () des Zeichens vor der Zahl Graden Alkalinität plaziert; so würden 15 anzeigen, daß der Medium 15 alkalisch war oder daß 15 c.c. die normale Säure pro Liter Nullize hinzugefügt werden muß es.

Saure Media werden bezeichnet, indem man a plus (+) Zeichen vor der Zahl Graden Säure plaziert; so würden +15 anzeigen, daß der Medium 15 sauer war, oder daß 15 c.c. vom normalen Alkali muß pro Liter neu hinzugefügt werden tralize es.

Beispiel.

Bürettemesswert, nachdem 5.4 c.c titriert worden sind.

Bürettemesswert, bevor 2.0 c.c titriert werden.

Zahl von c.c. N/20 NacOh benötigt

die Säure in 5 c.c neutralisieren. von

das mittlere 4 c.c.

Wenn 5 c.c. vom mittleren (das 1/20 von 100 c.c. ist) benötigen Sie

3. 4 c.c. von 1/20 normalem NacOh, zum der sauren pres zu neutralisieren HNO, 100 c.c. vom Medium würde 20X3.4 c.c benötigen. oder 68 c.c. von 1/20 normalem NacOh.

Da eine normale Lösung 20mal die Stärke einer 1/20 Normallösung ist, 100 c.c. vom Medium würde 1/20 von 68 c.c benötigen. oder 3.4 c.c. von normalem NacOh für Neutralisation; und ein Liter oder 1000 c.c. vom Medium würde 10X3.4 benötigen

c. c. oder 34 c.c. N/l NacOh für Neutralisation; d.h. ist der Medium Säure 34. Natürlichere Größe. Dieses ist der Liter des Mediums.

Wenn Säure N/20 oder Alkali und ein 5 c.c. Teil des Mediums (in 45 c.c. vom destillierten Wasser) werden, jedes 1/10 von 1 c.c. entspricht 1 natürlicherer Größe verwendet.

Justage der Reaktion. Wenn es gewünscht wird, um den Medium mit a zu lassen z.B. Reaktion +15, haben wir:

22 GENERAL MIKROBIOLOGIE

Säure des Mediums

(+34) 3.4 c.c. pro 100 c.c. vom Medium

Gewünschte Säure (+15). . 1.5 c.c. pro 100 c.c. von der mittleren Menge des normalen Alkalis

hinzugefügt werden 1.9 c.c. pro 100 c.c. vom Medium

oder 10X1.9 c.c. = 19 c.c. N/l NacOh pro 1000 c.c. vom Medium

Da normale Lösungen von der gleichen Stärke durch Datenträger d.h. 1 c.c sind. von N/l neutralisiert Säure gerade 1 c.c. vom N/l Alkali wird es betriebsbereit daß wenn 15 c.c gesehen. N/l NacOh werden benoetigt, um die Säure zu neutralisieren, die in 1 Liter des Mediums vorhanden ist, dann muß es in diesem Liter anwesend genau geben 15 c.c. von der N/l Säure oder von uns sollte sagen, daß die Reaktion (+ 15) fünfzehn Grad sauer ist. Für irgendeinen anderen Grad Säure fügen Sie genügend normales Alkali hinzu, um die Säure auf dem gewünschten Punkt zu verringern.

Die Reaktion eines Mediums ändert ein wenig nach seiner Neutralisation, besonders während der Sterilisation, aber auch nach danach stehen bei der gewöhnlichen Temperatur. Diese Änderung ist in Richtung zu einer erhöhten Säure, und ist in den Media am markiertesten, die im Traubenzucker reich sind. Infolgedessen ist es notwendig, den Titer eines Mediums festzustellen, zu der Zeit als sie anstatt, die Abbildungen zu veranschlagen verwendet wird, die vor Sterilisation erhalten werden.

MILCH, ZIDER, ESSIG, WÜRZE UND FRUCHTSÄFTE

Prozedur. 1. In ein Abdampfgefäßmaß 5 c.c. vom, mittels der verwendbaren Pipette geprüft zu werden Medium. Bilden Sie bis 50 c.c. mit destilliertem Wasser.

Erhitzen Sie nicht. Die oben genannten Media sollten nicht vor Titrierung erhitzt werden, während sie löschbare Säuren oder andere organische Substanzen enthalten, die als Säure registrieren können und die abgetrieben werden können, indem man kocht,

2. Fügen Sie 1 c.c. Phenolphthaleinlösung hinzu.

3. Fügen Sie stufenweise von einer genauen Bürette, NacOh IN/20 hinzu, bis der erste permanente Pink erscheint.

4. Beachten Sie die Menge von NacOh benötigt für die Titrierung.

5. Lassen Sie immer Duplikate laufen.

MILCH 23

6. Satz als Grade Säure die Zahl c.c. von N/l NacOh, das benoetigt würde, um einen Liter des Mediums zu neutralisieren.

MILCH

Milch ist als Nährmedium für Mikroorganismen wertvoll, weil: Sie ist für viele Mikroorganismen ein natürliches nutriment und ein fast ideal. Sein Aufbau, averag ing Kasein 3.40% Fett, 3.50% und Albumen, 4.50% Milchzucker, 0.75% Asche, 87.75% wässert, ist ein Beweis, daß er Nahrung in einer ausgezeichneten Form für die meisten Mikroorganismen versorgt.

Die biochemischen Aktivitäten vielen Bakteriums decken sie Selbst definitiv in den Änderungen, die melken, besonders Lackmusmilch, durchmacht auf. Viele dieser Änderungen sind gesehenes Makro scopically. Einige von diesen sind:

(a) Saure Produktion. Die Laktose, C^IfeOn (Milchzucker), wird zuerst umgekehrt und bildet zwei Hexosemoleküle, 1 Mol. Traubenzucker und 1 Mol. Galaktose.

Und jedes Molekül der Hexoseergebnisse zwei Moleküle Milchsäure:

Hexose = Milchsäure.

C 6 H 12 6 = 2CH 3 CH(OH)COOH.

Der blaue Lackmus wird rot gedreht.

(b) Alkali-Produktion. Lackmus wird dunkleres Blau. Diese Änderung begleitet sehr häufig peptonization.

(c) Verkleinerung (Entfaerbung von Lackmus). Dieses liegt an der Verkleinerung des Farbtonstoffes (Lackmus). Viele Mikroorganismen sondern Enzyme ab, die Wasserstoff produzieren. Der Wasserstoff kombiniert mit dem Lackmus und verringert ihn auf seinem leuco-zusammengesetzten (farblos). (Methylen Blau wird Farbe weniger darunter wie Bedingungen.) Daß dieses eine Verkleinerung und nicht eine Zerstörung ist, können gezeigt werden, indem man die entfärbte Kultur mit einigen Kubikzentimeter hydrocGen peroxid rüttelt. Das Bakterium, die den Lackmus auch entfärben

24 GENERAL MIKROBIOLOGIE

verringern Sie das Wasserstoff peroxid auf E^O und werdendem Sauerstoff, der den verringerten Lackmus nachoxidiert (durch das reac tion der Milch den Typen der Mikroorganismen zeigend vorhanden). Reoxidation findet langsam unter natürlichen Bedingungen statt. Verkleinerung kann stattfinden, wenn Milch Säure ist, alkalisch oder Null.

(d) Gerinnen durch saure Produktion. Das Kasein, wie die meisten Proteine, ist amphoter, d.h. ist es zum Reagieren beide als schwache Säure und schwache Unterseite fähig. Das anders unlösliche Kasein wird gefunden, um in der Milch in einem teilweise aufgelösten Zustand zu sein (kolloidal), wegen seiner Kombination mit den Kalziumsalzen: das Kalzium, das früher mit dem Kasein kombiniert wurde, durch die Produktion der Säure durch bestimmte Mikroorganismen, kombiniert jetzt mit der Milchsäure; infolgedessen die Kaseinniederschläg, das Gerinnen verursachend (Koagulation). Lit mus ist gedrehtes entschieden Rot. Die Milch, die einen sauren Klumpen ißt, titriert über +50.

(e) Renette-Klumpen. Koagulation kann auch stattfinden, wenn der Medium Null- oder nur slightly^ Säure ist. Dieses Production des Klumpens liegt an a Renette-wie dem Enzym, das durch Mikroorganismen produziert wird, und ist der Tätigkeit der Renette ähnlich, die benutzt wird, um Milch in den Käsefabriken zu gerinnen.

Viele sporenbildende Sorten werden unter der Gruppe der Renette-produzierenden organismen gefunden. Renetteklumpen wird normalerweise vom peptonization gefolgt.

(/) Peptonization. Der Klumpen, der durch Säure produziert wird oder, ren, Mikroorganismen Netz-bildend, kann stufenweise verschwinden, leav ing nur a Molke-wie Flüssigkeit. Dieses wird durch bestimmtes Bakterium verursacht, die proteolytische Enzyme produzieren, die den Klumpen verdauen und ihn löslich machen. Diese Verflüssigung der festen Proteins mögen Gelatin, Fibrin, gekochtes Eiweiß, Milch, etc., liegen an zwei Gruppen Enzymen, Pepsin und Trypsin.

Das Pepsin des Tierkörpers fungiert nur in einem sauren Medium (Geschenk im Magen).

Das Trypsin des Tierkörpers fungiert nur im alkalischen Milieu (Geschenk im Darm).

VORBEREITUNG VON LACKMUS-MILCH 25

Das pepsinand Trypsin-wie die Enzyme, die durch Mikroorganismen produziert werden, kann nicht durch ihre Aktivität in einem Medium bestimmter Reaktion folglich getrennt werden; dieses schwankt mit der Sorte des Mikroorganismus und mit Klimabedingungen. Pep tonization von Milch findet normalerweise in eine Leerlaufstellung statt, etwas alkalisch oder selten etwas saure Reaktion.

Einige organismen peptonisieren Milch, ohne einen Renetteklumpen zu bilden.

(g) Gas-Produktion. Dieses wird durch für mation der Gasluftblasen in der Milch gekennzeichnet und ist im Allgemeinen accom panied durch die Anordnung des sauren Klumpens. Sehr geläufig schrumpft der Klumpen und verursacht Strangpresßling der Molke.

ÜBUNG 4. VORBEREITUNG VON LACKMUS-MILCH

Apparat. Frisches getrennt oder Magermilch; titra tion Apparat; NacOh N/20; Phenolphthalein (Anzeige); 5 c.c. Pipette; azolitmin, 2% Lösung; füllender Trichter; Klemmhahn; sterile Reagenzgläser; Apparat für Dampf sterili zation.

Methode. 1. Frisches getrennt oder Magermilch sollten benutzt werden. Vollmilch ist wegen seines Fettgehaltes nicht wünschenswert.

2. Titrieren Sie und speichern Sie die Reaktion der Milch. Wenn die Milch über Säure 17 titriert, muß die Reaktion bis +15. justiert werden sauer, geronnen worden oder uncurdled Milch, nach neutrali zation, bildet nicht einen wünschenswerten Nährmedium für Mikroorganismen, folglich sollte Milch deren Titer über Säure 20-25 ist, verworfen werden.

Frische Milch schwankt in Säure von 12 bis 18. Milch mit einer Säure über 18 zum Phenolphthalein gibt nicht eine zufriedenstellende blaue Farbe mit azolitmin, wie bei 18 sie anfängt, die saure Färbung zu zeigen.

3. Fügen Sie 2% einer Standardlösung von Kahlbaums azo litmin hinzu. Lackmus oder azolitmin wird bloß als indi cator hinzugefügt und sollte von der genügenden Stärke sein damit, die Milch nicht in jedem möglichem Umfang zu verdünnen.

26 GENERAL MIKROBIOLOGIE

4. Mischen Sie die Milch und das azolitmin gänzlich und Gefäß mit ungefähr 8 c.c. vom Lackmus melken Sie in jedem Gefäß.

Beachten Sie. Obacht sollte angewendet werden, um zu verhindern, daß die Milch mit die Oberseite der Gefäße in Berührung kommt, da sie die Baumwollfasern veranläßt, am Gefäß zu haften. Dieses kann durch den Gebrauch eines "füllenden Trichters vermieden werden."

5, entkeimen, indem sie in flüssigem Dampf für Zwanzig Minuten an vier aufeinanderfolgenden Tagen erhitzen. Milch ist schwierig, infolge von den beständigen Sporen zu entkeimen, die häufig anwesend sind. Wenn es gewünscht wird, um einen größeren Hauptteil als in den Gefäßen zu entkeimen, sollte die Zeit der Heizung verlängert werden.

Vorsicht: Die Überhitzung neigt, (caramelize), den Milchzucker zu ändern. Die Farbe des azolitmin kann auch zerstört werden. Diese Änderungen sind nicht wünschenswert.

ÜBUNG 5. VORBEREITUNG DER GLYCERIN-KARTOFFEL

Eine Anzahl von chromogenen und pathogenen organismen kommen besonders gut auf den Media vorwärts, die Glycerin enthalten. Die Weise, in der Glycerin das Wachstum dieser Organ isms bevorzugt, bekannt nicht, aber in einigen Fällen es scheint, für den Aufbau des Fettes (Bact. Tubercu losis) direkt verwendet zu werden.

Apparat. Große gesunde Kartoffeln; zylinderförmiges Kartoffelmesser oder Korkenbohrer; gewöhnliches Messer; Trommel; Natriumauto bonate, 1: Lösung 1000; Glycerin, 5% Lösung; große sterile Reagenzgläser oder Mehlschwitzekartoffelgefäße; saugfähige Baumwolle oder kurze Glasstange; 1 c.c. Pipette; destilliertes Wasser; Apparat für Dampfsterilisation.

Methode. 1. Säubern Sie sorgfältig ein oder zwei große Kartoffeln.

2. Mittels eines zylinderförmigen Kartoffelmessers oder eines Korkenbohrers geschnittene Zylinder der Kartoffel, 4 bis 6 Zentimeter. Sehnen sich und 1.5 bis 1.8 Zentimeter. Im Durchmesser. Mit einem gewöhnlichen Messer halbieren Sie jeden Zylinder durch einen Diagonalschnitt, damit jedes Stück in der Form einer Nährbodenschräge ähnelt. Löschen Sie alle mögliche Teile der Haut auf diesen Stücken.

3. Legen Sie in eine Trommel und tränken Sie in einem verdünntem (1: 1000) Lösung des Natriumkarbonats * nur twenty-four Stunden lang.

* Natriumkarbonat wird benutzt, um die natürlichen Säuren der Kartoffel zu neutralisieren.

VORBEREITUNG DER GLYCERIN-KARTOFFEL

27

4. Übertragen Sie die Stücke auf eine 5% Lösung des Glycerins im Wasser nur weitere twenty-four Stunden lang.

5. Legen Sie in die sterilen Gefäße, die vorbereitet werden, wie folgt: Wählen Sie große Extrareagenzgläser 1.5 bis 2 Zentimeter aus. Im Durchmesser und sauber und trocken sie. Plazieren Sie ein kleines Stück der saugfähige Baumwoll- oder Glasstange 0.5 Zentimeter. X2.5 Zentimeter. In der Unterseite von jedem. Stecken Sie mit Baumwolle ein und entkeimen Sie in der üblichen Methode. (Mehlschwitzegefäße müssen nur gesäubert werden und entkeimt werden.)

Kurz vor dem Vorstellen der Stücke der Kartoffel, fügen Sie ungefähr 1 c.c hinzu. vom destillierten Wasser zu jedem Gefäß mit einem PU pette. Die Kartoffel sollte nicht das Wasser berühren.

6. Entkeimen Sie, indem Sie bei 100 G. auf vier aufeinanderfolgend erhitzen

Tage für Zwanzig Minuten jeden Tag.

Fig. 8. Kartoffel-Gefäße. (Orig. Northrup.)

Vorsicht: Die Zeit, die in 3 und in 4 angegeben wird, muß an ausschließlich gehaftet werden, sonst die Kartoffeln muß wegen des contamina tion mit beständigen sporenbildenden organismen verworfen werden.

REFERENZ

SMIRNOW, M. R.: Der Wert von glycerinated Kartoffel als Kulturmedium. Cent. F. Bakt., II Abt., Bd. 41, P. 303.

28 GENERAL MIKROBIOLOGIE

ÜBUNG 6. VORBEREITUNG DER FLEISCH-INFUSION

Fleischinfusion ist die Grundlage der gewöhnlichen Nährmedia, wie Suppe, Gelatin und Nährboden und auch vieler spezieller Nährmedia, als Zuckersuppen, usw..

Unter diesen Richtungen wird genügende Fleischinfusion vor geschnitten, um 1 Liter je von der Nährsuppe, vom Gelatin und vom Nährboden zu bilden.

Apparat. 1.5 Kilogramm (3 Ibs.) Fein gehacktes frisches mageres Rindfleisch; 1500 c.c. Hahnwasser; 3.5 Liter agateware Eimer; großer Trichter; Ringstandplatz; säubern Sie Tuch; 1-Liter-messendes Cup; drei sterile 1 Liter Erlenmeyer-Kolben; Kühlraum; Apparat für Dampfsterilisation (autoclav vorzuziehend).

Methode. 1. 1.5 Kilogramm fein gehacktem, frischem magerem Rindfleisch in einem ein 3.5 Liter agateware Eimer, fügen Sie 1500 c.c hinzu. vom Hahnwasser * mischen Sie gänzlich und dürfen Sie in einem kühlen Platz (der Kühlraum bevorzugt) nur sechzehn bis twenty-four Stunden lang stehen.

2. Stellen Sie einen großen Trichter in einem Ringstandplatz auf und legen Sie ein Stück des sauberen Tuches in den Trichter. Plazieren Sie ein messendes Cup unter den Trichter.

3. Belasten Sie die Fleischinfusion durch das saubere Seihtuch und den ganzen Saft gänzlich herauspressen. 1.5 Liter sollten wieder hergestellt werden. Wenn irgendein Verlust auftritt, bilden Sie bis 1500 c.c. mit Hahnwasser.

Diese resultierende sanguineous Flüssigkeit enthält die löslichen Albumine des Fleisches, der löslichen Salze, der Extrakte und des färbenstoffes, hauptsächlich Hämoglobin.

4. Plazieren Sie 500 c.c. von der Fleischinfusion in jedem von drei sterilen 1 Liter Erlenmeyer-Kolben. Ersetzen Sie die Stecker und erhitzen Sie im autoclav bei 120 C. für dreißig Minuten. Dieses ist eine sicherere Prozedur als Heizung während einer längeren Zeit in flüssigem Dampf.

Während dieser Heizung werden die Albumine, die durch Hitze gerinnbar sind, ausgefällt.

_ es haben sein finden notwendig und auch mehr bequem zu vorbereiten und entkeimen Fleisch Infusion vor fortfahren mit d Vorbereitung von d unterschiedlich Medium in welch es sein verwenden,

* Ungefähr 500 c.c. vom Wasser zu jedem zerstoßen Sie vom Fleisch.

VORBEREITUNG VON NÄHRSUPPE 29

wegen der beständigen sporenbildenden organismen, die im gehackten Fleisch fast allgemeinhin anwesend sind; Wirtschaft der Zeit ist auch eine Erwägung. Es sei denn entkeimt, zerlegt immedi ately, Fleischinfusion schnell infolge von dem Überfluß und der Verschiedenartigkeit der Mikroflora, die während der verschiedenen Prozesse der Vorbereitung für Markt erworben wird.

Die Infusion, die von frisch gehacktem magerem Rindfleisch gebildet wird, schwankt in Säure zwischen natürlichere Größe +15 und +25. Wenn die Reaktion markiert niedriger oder höher ist, findet Mikrobentätigkeit statt, die ist, oder kann sein, schädlich zum Nährwert des Mediums, in dem die Fleischinfusion verwendet wird.

Die Infusion enthält sehr kleinen albuminous Stoff und besteht hauptsächlich aus den löslichen Salzen des Muskels, der bestimmten Extrakte, und der geänderten färbenstoffe zusammen mit den geringfügigen Spuren des Proteins geronnen nicht durch Hitze.

ÜBUNG 7. VORBEREITUNG DER NÄHRSUPPE

Nährsuppe ist die Standardflüssigkeit, die für cul tivating Mikroorganismen eingesetzt wird. Es ist praktisch ein betrügerisches taining Pepton der Rindfleischbrühe. Pepton, ein lösliches Protein, das durch Hitze nicht gerinnbar ist, wird hinzugefügt, um die geronnenen albuminous Substanzen zu ersetzen, die ausfällen, wann die Fleischinfusion entkeimt wird. Salz wird hinzugefügt, um der Phosphate und der Karbonate stattzufinden, von denen einige auf der Justage der Säure des Mediums durch Natriumhydroxid ausgefällt werden.

Die Reaktion der gewöhnlichen Nährmedia wird bis ungefähr +15 mit Phenolphthalein als Anzeige justiert, da es gefunden wird, daß die meisten Mikroorganismen gut auf einem mittlerem Null- oder ein etwas alkalisch zum Lackmus wachsen.

Wenn es benoetigt wird, daß Nährmedia klar sind, wird das Eialbumen, das auf einer glatten Paste mit Wasser verringert werden (oder das Vertiefung geschlagene Weiß eines Eies) hinzugefügt. Durch Koagulation löscht das Eialbumen mechanisch alle Teilchen suspen innen sion, das anders durch das Filterpapier überschreiten würde.

30 GENERAL MIKROBIOLOGIE

Dieser Prozeß ist wenn die Eialbumen coagu lates langsam am leistungsfähigsten.

Da Eialbumen anfängt, an ungefähr 57 C. zu gerinnen, ist es für gutresultate absolut zwingend, die das mittlere bis 40-50 C. vor der Hinzufügung des Eialbumens abgekühlt wird.

Obgleich Eialbumen etwas Solenoid des uble Stoffes enthält, der durch Hitze, wie Zucker, Extrakte und Mineralstoff nicht gerinnbar ist, der als Mikrobennahrung dient, ist sein Zweck in den Nährmedia hauptsächlich für seine clari fying Tätigkeit.

Apparat. 500 c.c. sterile Fleischinfusion; 500 c.c. Hahnwasser; 10 gms. Pepton, Wittes; 5 gms. Salz; 10 gms. Eialbumen (oder ein Ei); 3.5 Liter Achat-Waren Eimer; Titrierungapparat; NacOh N/20; N/l NacOh; Phenolphthalein (Anzeige); destilliertes Wasser; 5 c.c. Pipette; große rührende Stange; grobe Balancen; großer Gasbrenner; großer Trichter; geflochtenes Filterpapier; füllender Trichter; sterile Reagenzgläser; sterile 1-Liter-Flasche; Apparat für Dampfsterilisation -.

Methode. 1. Setzen Sie den Inhalt einer Flasche der Fleischinfusion (500 c.c.) in einem Achateimer und fügen Sie 500 c.c hinzu. vom Hahnwasser.

2. Fügen Sie 1% von Pepton Wittes und 0.5% von Salz hinzu.

3. Fügen Sie 10 gms hinzu. Vom Eialbumen, das gut mit 100 c.c gemischt worden ist. vom Hahnwasser. (gesetzt dem Eialbumen in eine Trommel und fügen Sie genügend Wasser hinzu, um eine Paste zu bilden. Rühren Sie sich, bis glatt. Fügen Sie dann das restliche Wasser hinzu. Ein Ei * wohles geschlagen kann ersetzt werden.) Mischen Sie alle gänzlich.

4. Hitze in flüssigem Dampf für forty-five Minuten oder im autoclav bei 120 C. für dreißig Minuten.

5. Titrieren Sie mit NacOh N/20.

6. Justieren Sie die Reaktion des Mediums bis +15 mit normalem NacOh oder normalem HC1. Retitrate und justieren wieder wenn notwendig.

7. Counterpoise und beachten das Gewicht.

8. Kochen Sie fünfzehn Minuten über einer freien Flamme und gegen stantly rühren.

* Es ist nicht notwendig, Wasser dem Ei hinzuzufügen.

GELATIN 31

9. Counterpoise und stellen Sie jeden möglichen Verlust durch Verdampfung mit destilliertem Wasser wiederher.

10. Filtern Sie, während kochendes heißes durchgehendes geflochtenes Filterpapier gerade vorher mit dem 1-/2liter kochendem Wasser wusch.

11. Führen Sie das Filtrat durch das gleiche Papier, bis es hell und frei ist.

12. Füllen Sie dreißig sterile Reagenzgläser mit ungefähr 8 c.c. von diesem Medium für jedes Gefäß. Setzen Sie die restliche Suppe in eine große, sterile Flasche ein.

13. Erhitzen Sie die Reagenzgläser und den Inhalt in flüssigem Dampf Zwanzig Minuten an drei aufeinanderfolgenden Tagen.

14. Um eine große Flasche Suppe zu entkeimen, erhitzen Sie für Zwanzig Minuten vier Tage nacheinander.

GELATIN

Gelatin ist eins der Hilfsmittel des Biologen. Als solcher, dient er zwei Zwecke: als fester Kulturmedium, technische Einheit, durch die die Lokalisierung einer einzelnen Sorte Mikroorganismus ermöglicht wird und, zu jenen organismen, die proteolytische Enzyme absondern, sie dient als stickstoffhaltiges Nahrungsmittelmaterial.

Gelatin trägt die Unterscheidung des Seins die erste Substanz, die für einen festen Kulturmedium benutzt wird. Dieser Medium war origi nated 1882 durch Robert Koch und hat seit revolutionierte die Wissenschaft von Mikrobiologie. Vor der Einleitung der festen Media, bezog die Lokalisierung einer einzelnen Sorte Mikroorganismus viel Schwierigkeit und fast immer ein bestimmtes Maß Ungewißheit mit ein. Von Jordanien veranschlagen: "es kann nicht eine bloße Übereinstimmung sein, daß die großen Entdeckungen in der Bakteriologie schnell auf die Fersen dieser wichtigen technischen Verbesserung folgten, und sie ist möglicherweise nicht zu viel, zum zu behaupten, daß der Anstieg von Bakteriologie von congeries von unvollständigem, obgleich wichtige Beobachtungen in die Position einer modernen biologischen Wissenschaft von dieser Periode (1882) datiert ungefähr sein sollten."

Kochs die ersten Platten wurden durch strömendes verflüssigt gebildet

32 GENERAL MIKROBIOLOGIE

Nährgelatin nach den sterilen, flachen Stücken Glas. Der Kursteilnehmer auf dem Werden vertraut mit den Schwierigkeiten von zufriedenstellende Platten mit dem Gebrauch der "Petrischale" vor schneiden schätzt die, die in Kochs ersten Gelatinplatten getroffen werden.

Gelatin ist ein Protein d.h. ein stickstoffhaltiges Nahrungsmittelmaterial. Er enthält während seine wesentlichen Elemente Carbon, Wasserstoff, Sauerstoff und Stickstoff (andere Elemente jedoch wie Schwefel, Phosphor, etc., können anwesend sein). Seine empirische Formel nach Ansicht Schiitzenberger und des Bürgers ist C7eHi24N24O29, aber solch eine Formel gibt nur Informationen der Hauptbestandteile und läßt ein irgendeine Idee der enormen Größe des Moleküls bilden; keine Idee der Struktur des Moleküls wird gegeben. Jedoch indem es mit verdünnter Schwefelsäure verdaut, bricht Gelatin unten genauso wie die Proteine und erbringt glycin, leucin und andere fetthaltige Aminosäuren.

Gelatin ist ein Tierprotein, aber tut heißes auftreten als Gelatin in den tierischen Geweben. Er existiert dort als das albu minoid Kollagen, das der allgemeine feste Bestandteil des faserartigen Bindegewebes ist, das auch, aber gefunden wird, im kleineren Prozentsatz, im Knorpel, im Knochen und im Ligament. Kollagen von diesen verschiedenen Quellen ist nicht im Aufbau identisch und Gelatin verändert sich entsprechend, unterscheidet sich z.B. Gelatin vom Knorpel von dem anderer Quellen dadurch, daß es einen niedrigeren Prozentsatz des Stickstoffes enthält.

Gelatin, der Körper, resultierend aus der Hydrolyse des Kollagens, ist auch ein Albuminoid. (Hofmeister sieht diese Hydrolyse als an, fortfahrend entsprechend der Gleichung:

Kollagen + Wasser = Gelatin

aber im Umgang mit Substanzen solchen variablen Aufbaus,

empirische Formeln dieser Art haben keine große Stichhaltigkeit).

Kommerziell wird sie aus bestimmten Arten der Knochen vorbereitet

und Teile Haut. Diese werden ausgewählt, gewaschen und extrahiert

GELATIN 33

durch Wasser und mit einer verdünnten Säure (salzsauer), mit rela tively wird wenig Aussetzung zur Hitze, damit nur möglich von den flüssigen Zerfallprodukten des Vorrates und die gelierende Energie der resultierenden Lösung gebildet werden, nicht zerstört.

Der Bezeichnung Gelatin wird vom lateinischen Verb gelare berechnet, um zu erstarren und benennt, um sich um das allgemeine Attribut dieser Substanz, das seiner versteifenden oder gelierenden Eigenschaft zu kümmern.

Gelatin gehört dieser interessanten Kategorie der Substanzen, die Kolloide genannt werden. Es ist ein typisches Beispiel der Kategorie und stellt die charakteristischen Eigenschaften der Kategorie aus. Kolloide, in markiertem Kontrast zu den Kristalloiden, kristallisieren nicht, nicht betriebsbereit diffundieren und sind miteinander undurchlässig. Die entscheidenden Partikel der Kolloide sind viel kleiner als, was wir gewöhnlich eine körperliche Unterteilung benennen würden, aber eher größer als chemische Moleküle; der Durchmesser der Teilchen in einer kolloidalen Lösung z.B. rotes kolloidales Gold, die mittels des Ultramikrobereichs gezählt worden sind, ist 6 millimicrons oder 6 Tausendstel eines Mikrons. Ein Mikron ist ein tausendstes eines Millimeters. (Bakterium ist, das kleinste sichtbare mittels des gewöhnlichen Mikroskops viel größer, das von 0.3 bis 1.0 Mikron im Durchmesser. ist) Infolgedessen stehen ihre Reaktionen zwischen dem Systemtest und den chemischen Umwandlungen des Stoffes mittler, wie indem das Betrachten der Eigenschaften von Gelatin gesehen werden kann.

Gelatin saugt eine beträchtliche Quantität warmes Wasser (es ist im kalten Wasser fast unlöslich) auf und schwillt oben und erbringt ein Gelee, das, nach Wärmezufuhr, zu einer zähflüssigen, klebrigen Lösung schmilzt, die wieder nach dem Abkühlen gelatiniert. Der Name des Hydrogels wird an den Kolloiden angewendet, die diese Eigenschaft zeigen. Gewöhnliche Gelatinmedia für mikrobiologische Arbeit enthalten 12% bis 15% den Gelatin. Wenn es an den mittleren tem peratures getrocknet wird, kann Gelatin wieder wieder aufgelöst werden und redried innen definitiv. Von dieser Eigenschaft wird es ein umschaltbares Kolloid genannt, zum sie von anderen Kolloiden zu unterscheiden, die, wenn ihr körperlicher Zustand einmal geändert wird, z.B. Kasein und Siliziumsäure unlöslich sind.

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Wenn an ungefähr 130 C. oder überhitztes superdried, wenn im gallertartigen Zustand entweder für kurze Zeit bei einer Temperatur über 100 C. oder für eine lange Zeit bei 100 C., wie in der mittent Zwischensterilisation, der Gelatin also ist, geändert, daß seine wieder auflösende oder resolidifying Energie beziehungsweise verloren ist. Beim Superdrying wird der Verlust der wieder auflösenden Eigenschaft zum zu nahen Kontakt der konstituierenden Partikel, eine Änderung im körperlichen Zustand gelegt; im überhitzten Gelatin liegt der Verlust der resolidifying Energie vermutlich am disintegra tion des Gelatinmoleküls, ein lediglich chemisches Phänomen. Dieser Verlust der gelierenden Eigenschaft wird auch durch die enzymatischen Aktivitäten vieler Mikroorganismen verursacht und ist auch ein Zerfallprozeß.

Gelatin besitzt einen Verflüssigungpunkt, der jedoch beträchtlich unter unterschiedliche Bedingungen schwankt. Gewöhnlich verflüssigen die Media, die 12% bis 15% den Gelatin enthalten, oder, bei einer Temperatur in der Nähe von 24 bis 26 C. zu schmelzen, verfestigen sich ing wieder bei 8 bis 10 C. zu einem freien, transparenten Gelee. Als Folge können Gelatinmedia nur für organismen eingesetzt werden, die eine höhere Temperatur als 22 bis 24 C. nicht für Entwicklung benötigen. Die Überhitzung bei Vorbereitung oder Sterilisation verursacht ein beträchtliches Senken des Verflüssigungpunktes, möglicherweise schließlich so niedrig, daß der Medium bei der Raumtemperatur flüssig ist (20 bis 21 C.) Es wird betriebsbereit gesehen, wie der letzte Gelatinmedium nicht für das isola tion der organismen handlich verwendet werden könnte. Einige Daten unterstützen im Reparieren dieses im Verstand.

Die verfestigende Eigenschaft von Gelatin schwankt in umgekehrten Anteil mit der Zeit der Heizung während des Prozesses der Sterilisation; sein verflüssigender Punkt wird auf einen Durchschnitt von 2 C. jede Stunde lang der Heizung bei 100 C gesenkt. Dieses bildet klar, warum solche Obacht in die Vorbereitung eines Gelatinmediums, in der Bruchsterilisation dieses Mediums in strömendem Dampf angewendet werden muß und warum das sofortige Abkühlen notwendiges aftei ist; jede Fraktionierung bei seiner Vorbereitung.

GELATIN 35

Obgleich Temperaturen über 100 C. zur verfestigenden Eigenschaft als die von 100 C. viel zerstörender sind, ist es möglich, einen Medium zu entkeimen, der 12% bis 15% von Gelatin im autoclav enthält (7 bis 8 Ibs. Pressure) bei 112 bis 113 C. für Zwanzig Minuten oder bei 15 Ibs. Pressure (120 C. für fünf Minuten) ohne seine Verwendungsfähigkeit zu hindern als fester Kulturmedium.

Dieser Gebrauch des Dampfs unter Druck (trockener Dampf) ist fast notwendig im Fall von einem Gelatinmedium, um sterili zation, da Gelatin, von seiner Quelle, von der Methode der Vorbereitung und von den neueren Verbindlichkeiten zur Verschmutzung zu bewirken, ist fast sicher, nach seiner Oberfläche viele sehr beständige Sporen zu enthalten oder zu tragen. Heizung bei 100 C. für dreißig Minuten an drei oder sogar vier oder fünf nachfolgenden Tagen ist nicht immer, da diese Sporen nicht immer innerhalb twenty-four Stunden nach Heizung und keimen und oben spricht die Daten, ihr an, wird gesehen betriebsbereit, leistungsfähig daß das Senken des lique Parteipunktes nicht betrachtet werden soll, wie unwesentlich bei zeitweiliger Sterilisation.

Gelatin besitzt eine andere Eigenschaft, die es wertvoll für bakteriologische Arbeit macht: d.h. im Gelatin züchtet Platte kein Wasser der Kondensation sammelt gewöhnlich auf der Abdeckung der Petrischale (wie mit Nährboden) später, um auf die Oberfläche des Gelatin zu fallen und Formulare der Kolonien folglich auszuwischen und lokalisierte Kolonien zu veranlassen, verschmutzt mit den benachbarten zu werden. Die Speicherung dieses Mediums entweder in den Reagenzgläsern oder in den Platten, steril oder geimpft, wird folglich viel einfacher als mit Nährboden gemacht.

REFERENZ

VAN DERHEIDE, C.C.: Gelatinose Losungen und Verflussigungspunkt der Nahrgelatine, Bogen. F. Hyg., Bd. 30, 1897, pp. 82-115.

6 GENERAL MIKROBIOLOGIE

ÜBUNG 8. VORBEREITUNG VON NÄHRGELATIN

Apparat. 500 c.c. sterile Fleischinfusion; 500 c.c. Hahnwasser; 150 gms. Gelatin; 10 gms. Pepton, Wittes; 5 gms. Salz; 10 gms. Eialbumen (oder ein Ei); Wasserbad; Thermometer; Eimer mit 3.5 Literachat-Waren; lange schwere rührende Stange; Titrierungapparat; NacOh N/20; N/l NacOh; Phenolphthalein (Anzeige); destilliertes Wasser; grobe bal ances; großer Gasbrenner; großer Trichter; geflochtenes Filterpapier; füllender Trichter; sterile Reagenzgläser; sterile 500 c.c. Erlenmeyer-Kolben; Apparat für Dampfsterilisation; Laufen lassenwasser Bad oder Kühlraum.

Methode. 1. Setzen Sie den Inhalt einer Flasche der Fleischinfusion (500 c.c.) in einem Achateimer und fügen Sie 500 c.c hinzu. vom Hahnwasser.

2. Fügen Sie den 15% Gelatin, 1% Wittes das Pepton und 0.5% Salz der Mischung hinzu.

3. Erhitzen Sie diese Mischung in einem Wasserbad, um den Gelatin, das Pepton und das Salz aufzulösen und gelegentlich rühren.

4. Kühlen Sie bis 40-50 C ab. Dieses ist zwingend.

5. Fügen Sie dann 10 gms hinzu. Vom Eialbumen, das gut mit 100 c.c gemischt worden ist. vom Hahnwasser. (gesetzt dem Eialbumen in eine Trommel, fügen Sie genügend Wasser hinzu, um eine Paste zu bilden und sich zu rühren, bis glatt; fügen Sie dann das restliche Wasser hinzu. Ein gut geschlagenes Ei kann ersetzt werden.) Mischen Sie alle gänzlich.

6. Hitze in flüssigem Dampf für forty-five Minuten oder im autoclav bei 105 C. für dreißig Minuten.

7. Titrieren Sie mit NacOh N/20.

8. Justieren Sie die Reaktion des Mediums bis +15 mit normalem NacOh oder normalem HC1. Re titrieren Sie und justieren Sie wieder wenn notwendig.

9. Counterpoise und beachten das Gewicht.

10. Kochen Sie fünfzehn Minuten über der freien Flamme und gegen stantly rühren.

11. Counterpoise und stellen Sie jeden möglichen Verlust durch Verdampfung mit destilliertem Wasser wiederher.

12. Filtern Sie beim Kochen des heißen durchgehenden geflochtenen Filterpapiers

NÄHRBODEN 37

gerade vorher gewaschen mit kochendem Wasser des 1-/2liters. Führen Sie das Filtrat durch das gleiche Papier, bis es hell und frei ist.

13. Füllen Sie dreißig sterile Reagenzgläser mit ungefähr 8 c.c. vom Medium für jedes Gefäß. Teilen Sie den Rest in zwei gleiche Teile und legen Sie in sterile der 1-/2liter Erlenmeyer-Kolben.

14. Erhitzen Sie in flüssigem Dampf Zwanzig Minuten an drei aufeinanderfolgenden Tagen.

15. Kühlen Sie den Gelatin in einem Laufen lassenwasser Bad, sofort nach jeder Heizung ab. Obacht muß angewendet werden, um den Gelatin so wenig wie möglich zu erhitzen, da der Teil der verfestigenden Energie von Gelatin mit jeder Wärmezufuhr verloren ist.

16. Eine große Flasche Nährgelatin entkeimen, Hitze für Zwanzig Minuten an vier Tagen nacheinander.

NÄHRBODEN

Nährboden oder Agar-Agar (von einer malaysischen Wortbedeutung "vege Tabelle"), die Substanz, die benutzt wird, wenn man eine Art fester Kulturmedium für bakteriologische Arbeit vorbereitet, ist ein Proluftschacht, der aus den verschiedenen Meerespflanzen vorbereitet wird, die nahe dem indischen Ozean und im chinesischen und japanischen Wasser gefunden werden. Dieser Typ der Meerespflanze hat einige geläufige Namen, als Ceylon oder Jaffna Moos, Bengal Fischleim, usw.. Verschiedene Sorten werden für Nahrung verwendet und der Handel ist beträchtlich.

Payen, ein französisches Chemiker -(about 1859), erhielt das Nährbodengelee von der Meerespflanze, Gelidium corneum, in der fol lowing Weise: Die Meerespflanze wurde während einiger Zeit in einer kalten verdünnten Lösung der Salzsäure stehen lassen; die Säure wurde durch das Ausspülen von von mehrmals mit Wasser gelöscht, dann wurde die Meerespflanze in eine kalte verdünnte Lösung des Ammoniaks gelegt; zunächst wurde das Ammoniak durch das wiederholte Ausspülen mit kaltem Wasser gelöscht. Während dieses Prozesses verlor die Meerespflanze 53% seines Gewichts in den Mineralsalzen, in färbenstoff und in den organischen Bestandteilen. Der restliche Teil wurde im Wasser gekocht,

38 GENERAL MIKROBIOLOGIE

während, welches Prozesses das Gemüsegelee extrahiert wurde. Die Lösung also erreicht wurde weg gegossen und nach verließ das unbrauchbare Sediment. Dieses Gelee ist dasselbe im Aufbau wie, der, existierend in den Gemüsegeweben; es ist nicht chemisch geändert worden, wie Kollagen in der Vorbereitung von Gelatin ist. Der kommerzielle Nährboden wird vermutlich vorbereitet, indem man trocken diese Lösung mit unterschiedlichen Mitteln verdunstet.

Nährboden kommt normalerweise in die Hände des bacteriologist als lang, schlanke, graulich-weiße Streifen oder als Blöcke oder besonders in den letzten Jahren, in Form eines grau-weißen Kriegsgefangen der der europäischen Herstellung.

Nährboden, im Gegensatz zu Gelatin, ist ein Kohlenhydrat, d.h. besteht er aus einer Kombination nur des Carbons, des Wasserstoffs und des Sauerstoffes. Spuren des Stickstoffes sind als Verunreinigungen anwesend. Die oben genannten qualitativen Ermittlungen seiner grundlegenden constit uents wurden von Payen, von Parumbaru und von Hueppe gebildet, der ihre Ermittlungen auf Nährboden von den unterschiedlichen Quellen bildete. Insoweit ermittelt werden kann, ist seine empirische Formel nicht noch in irgendeinem Umfang nachgeforscht worden.

Wie Gelatin jedoch ist Nährboden ein umschaltbares Kolloid. Er tränkt oben im kalten Wasser, nach einem langen Kochen löst sich im Heißwasser, zu einer geschmacklosen und geruchlosen freien Lösung und in den festen ifies nach mehr abkühlen zu oder zu weniger undurchlässigem Gelee auf. Seine wäßrige Lösung ist Null- oder fast Neutrales zum Phenolphthalein; noch ist- ein Tropfen oder zwei des zwanzigsten normalen Natriumhydrats genügend, die rosafarbene Farbe wahrnehmbar zu bilden.

Die kolloidalen Eigenschaften des Nährbodens werden nicht durch eine lang-fortgesetzte Heizung an einer Hochtemperatur noch durch die Tätigkeit der gewöhnlichen Mikroorganismen zerstört, wie die von Gelatin sind. Die oben genannten Eigenschaften jedoch werden beeinflußt und können durch die Reaktion der Flüssigkeit insgesamt gehindert werden, in der der Nährboden aufgelöst wird.

Die Reaktion der Flüssigkeit d.h. ob sie sauer oder alkalisch ist, beeinflußt den Nährboden hinsichtlich seiner Löslichkeit, Dichte, Farbe, Transparentes, Filtrierbarkeit und Menge condensa tion Wassers. Wenn Nährboden in einer Flüssigkeit einer Säure aufgelöst wird

NÄHRBODEN 39

Äquivalent zu 0.1% HC1, der Nährboden löst sich sehr betriebsbereit, filtert schnell, das resultierende Filtrat auf, das eine hellgelbe, transparente, glatte, wäßrige Lösung ist, die sich nicht nach dem Abkühlen verfestigt. Wenn ein kleinerer Prozentsatz der chloric hydrosäure verwendet wird, tritt Verfestigung auf (unter 40 C.) aber das Gelee nicht "steht oben" und ist folglich für Nährbodenschräge- oder -plattenkulturen unbrauchbar. Eine große Menge betrügerisches densation Wasser ist auch anwesend.

Wenn Nährboden in einer schwachen alkalischen oder Nullsuppe aufgelöst wird, ist eine starke, rötlichbraune, zähflüssige Flüssigkeit erreichtes, das langsam filtert und sich schnell bei 40 C., zu einem sehr festen, undurchlässigen, trockenen Gelee verfestigt, Haben aber wenig Kondensationwasser; sie behält seine Form gut in den Schrägen und in den Platten bei. So wird der Wert des Nährbodens als fester Kulturmedium entsprechend dem cjegree der Alkalinität oder der Säure angehoben oder gesenkt.

Es muß zusätzlich beachtet werden jedoch daß, wenn einmal die verfestigende Eigenschaft des Nährbodens durch das Vorhandensein eines Überflußes der Säure in seiner Lösung zerstört wird, diese Eigenschaft nie durch Neutralisation mit Alkali wiedergewonnen werden kann; die Säure pro manently zerstört die Umkehrbarkeit des Kolloids.

Der Schmelzpunkt des Nährbodens (von 1.5% in der Nulllösung) ist 97 C. und obgleich sein verfestigender Punkt bei 40 C. ist, wenn, sobald er sich es verfestigt hat, oben im Thermostat bei einer Temperatur von 50 C steht. Für bakteriologische Zwecke nur dieses Formular des Nährbodens kann benutzt werden, der an von 38 bis 40 C. Agar flüssig bleibt, der nur bei einer Temperatur über diesem Punkt würde sein zu heiß wenn in einem flüssigen Zustand für Gebrauch flüssig bleibt; die Vitalität der eingeführten organismen würde durch die Hochtemperatur gehindert oder zerstört.

Schwierigkeiten werden in der Vorbereitung eines festen Kulturmediums vom Nährboden angetroffen, wegen seiner langsamen Löslichkeit, Vis cosity und konsequenten langsamen Filtrierbarkeit. Seine Lösung (Verdauung) wird bewirkt, wie über, durch eine lange Heizung in einem Wasserbad, in einem Dampfsterilisator, in einem autoclav oder in einem Überschuß erwähnt eine freie Flamme. Die Zeitspanne benötigt für komplette Verdauung hängt nach drei Sachen ab: Die Reaktion von

40 GENERAL MIKROBIOLOGIE

Flüssigkeit, in der der Nährboden aufgelöst wird, der Prozentinhalt des Nährbodens und die Methode des Auflösens. Der Einfluß der Reaktion der Nährbodenlösungen ist oben behandelt worden. Für allgemeinen Kulturgebrauch jedoch wird gewöhnlicher Nährboden natürlichere Größe +15 gebildet (Nährboden verfestigt sich mit Schwierigkeit über natürlicherer Größe +30).

Der ein-Prozent-Nährboden ist viel leicht Lösliches unter gleichen Bedingungen als ein höheres Prozent. Ein und ein halbes Prozent ist die Menge, die in den gewöhnlichen Nährbodenmedia verwendet wird und gibt ein ein wenig steiferes und folglich wünschenswerteres Gelee.

Nährboden wird schnell über einer freien Flamme verdaut. Wenn es genug, nicht nach der Filtration und der Sterilisation des Nährbodens durch die zeitweilige Methode erhitzt wird, erscheint ein flockiges precip itate häufig im vorher freien Medium. Dieses kann gebildet werden, um in den meisten Fällen zu verschwinden, indem man der Temperatur des autoclav unterwirft (120 C. 15 Ibs.).

Nährboden für Kulturmedia sollte völlig frei sein wenn Flüssigkeit, und homogen undurchlässig-lichtdurchlässig wenn Körper; er sollte ein translucence haben, das genügend ist, tiefe Kolonien auf den betriebsbereit beobachtet zu werden Platten oder Stabkulturen zu erlauben,; er sollte nicht flockiges Material, Sediment oder Stücke Baumwolle oder Filterpapier enthalten, wie diese typische Kolonieentwicklung der Mikroorganismen und, zum unerfahrenen hindern, einige Male für Kolonien verwechselt werden können.

In den ersten Methoden, die überhaupt für das Bilden von von Nährbodenkulturmedia, anstatt den, heißen Nährboden durch Filterpapier, saugfähige Baumwolle oder Asbest zu filtern verwendet wurden, wurde er abkühlen gelassen, dur ing, die das Sediment verarbeiten, das zur Unterseite vereinbart wird; als Körper das Sediment abgeschnitten wurde. Diese Methode war nicht wünschenswert, da die Klarheit des resultierenden Nährbodens nach der Kinetik des Abkühlens abhängen würde; das langsamer das Abkühlen, vollständig würden Sedimentbildung stattfinden.

Nährboden ist nicht eine Nahrung für Mikroorganismen im allgemeinen, d.h. wird er nicht durch die verdauungsfördernden Enzyme des meisten Bakteriums beeinflußt, wie Gelatin ist. Jedoch bekannt einig Bakterium, die die Energie des verflüssigenden Nährbodens haben, unter der B sind.

VORBEREITUNG NÄHRNÄHRBODENS 41

gelaticus n. SP. (gran) und Bad. Nenckii, von denen beide, wie erwartet würde, im Meereswasser gefunden werden. Diese compara tive Untätigkeit des Nährbodens macht es wertvoll für die Vorbereitung, der festen synthetischen Media, dessen Wert en sein kann hanced, indem er den kommerziellen Nährboden natürlicher Gärung unterwirft während, welches Prozesses alle mögliche Spuren der fähigen substanzen des Nutzens Nahrungsmitteloben durch die vorhandenen Mikroorganismen verwendet werden. (Beijerinck.)

Nährboden ist vom speziellen Gebrauch in der bakteriologischen Arbeit, in der die Bearbeitung der Mikroorganismen bei einer Temperatur über dem Schmelzpunkt von Gelatin geleitet werden muß. Dieses Merkmal hat die großen Fortschr1tte, die in der medizinischen Bakteriologie genommen worden sind, bis zu pathogenes Bakterium kann nur mit Schwierigkeit an den tempera tures unter dem des Körpers lokalisiert werden und gewachsen werden ermöglicht.

REFERENZEN

SMITH, ERWIN F.: Bakterium in Beziehung zu Betriebskrankheiten. Vol.. I,

pp. 31-36. Einige Abbildungen. SCHULTZ, N. K.: Zur Frage von Der Bereitung einiger Nahrsubstrate.

Cent. F. Bakt. I. Orig., Bd. 10, 1891, P. 57.

ÜBUNG 9. VORBEREITUNG DES NÄHRNÄHRBODENS

Apparat. 3.5 Liter Achat-Waren Eimer; 15 gms. Nährboden; 10 gms. Pepton; 5 gms. Salz; 10 gms. Eialbumen (oder ein Ei); 500 c.c. sterile Fleischinfusion; 500 c.c. Hahnwasser; Titrierungapparat; NacOh N/20; N/l NacOh; Phenolphthalein (Anzeige); destilliertes Wasser; großer Trichter; geflochtenes Filterpapier; füllender Trichter; sterile Reagenzgläser; sterile Literflasche; grobe Balancen; großer Gasbrenner; 1-Liter-messendes Cup; Apparat für Dampfsterilisation.

Methode. 1. Ein 3-Liter-Achatwareeimer-Platz 15 in den gms. Vom Nährboden in 500 c.c. vom Hahnwasser.

2. Waschen Sie den Nährboden gut und die Fetzen und das squeez ing es durch die Hände trennen.

3. Füllen Sie das schmutzige Wasser ab und die gegossene Menge messen

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ALLGEMEINE MIKROBIOLOGIE

weg von; ersetzen Sie mit der gleichen Menge des sauberen Hahnwassers.

Wiederholen Sie.

4. Lösen Sie sich über einer freien Flamme und einem Blutgeschwür für fünf Minuten auf und ständig rühren. Das solu tion muß von den Klumpen des Nährbodens völlig frei sein.

5. Fügen Sie 1% Wittes das Pepton und 0.5% Salz dem kochenden Nährboden hinzu.

6. Zu 500 c.c. vom Fleisch im Schmelzverfahren fügen Sie 10 gms hinzu. Vom Eial bumen, das gut mit 100 c.c gemischt worden ist. vom Hahnwasser. (gesetzt dem Eialbumen in eine Trommel und fügen Sie genügend Wasser hinzu, um eine Paste zu bilden. Rühren Sie sich bis glattes und fügen Sie dann das bleiben ing Wasser hinzu. Ein Ei; Vertiefung geschlagen,

Fig. 9. Heißwasser-Trichter für kann ersetzt werden.) Mischen Sie allen filternnährboden oder Gelatin. Gänzlich

7. Gießen Sie die geschmolzene Nährbodenmischung langsam in die Fleischinfusion und ständig rühren. Hitze im autoclav bei 120 C. für forty-five Minuten oder eine Stunde lang in flüssigem Dampf.

Anmerkung. Die Zeit für diese Heizung kann zum Vorteil verlängert werden, aber nie verkürzt werden. Wenn Nährboden nicht genug vor Filtration erhitzt worden ist, bildet sich ein flockiger Niederschlag in den Gefäßen nach der Heizung in flüssigem Dampf. In den meisten Fällen kann dieses veranlassen werden, um zu verschwinden, indem man für kurze Zeit im autoclav bei 15 Ibs erhitzt.

8. Titrieren Sie mit NacOh N/20.

9. Justieren Sie die Reaktion des Mediums bis +15 mit normalem NacOh oder normalem HC1. Retitrate und regulieren die Reaktion wenn notwendig nach.

10. Counterpoise und beachten das Gewicht.

11. Kochen Sie fünfzehn Minuten über einer freien Flamme und gegen stantly rühren,

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12. Counterpoise und bilden Sie jeden möglichen Verlust im Gewicht mit kochendem destilliertem Wasser.

13. Filtern Sie das kochende heiße durchgehende geflochtene Filterpapier gerade vorher gewaschen mit kochendem Wasser. Führen Sie das Filtrat durch das gleiche Papier, bis frei.

14. Reagenzgläser der Fülle 60 bis 70 sterile mit ungefähr 8 c.c. vom Medium für jedes Gefäß.

15. Erhitzen Sie in flüssigem Dampf Zwanzig Minuten an drei suc cessive Tagen.

16. Am Ende der abschließenden Heizung, legen Sie die Gefäße des Nährbodens in eine geneigte Position, um sich zu verfestigen (lassen Sie den Medium den Stecker nicht berühren), damit eine große Oberfläche sented vor für die Bearbeitung der Mikroorganismen ist. Diese werden Nährbodenschrägen genannt.

Anmerkung. Wenn Nährbodengefäße nur für Nährbodenschrägen verwendet werden sollen, wird kleiner des Mediums im Gefäß als benötigt, wenn sie für Überzug verwendet werden sollen.

17. Eine große Flasche Nährboden entkeimen, Hitze für dreißig Minuten an vier aufeinanderfolgenden Tagen.