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Die Aminosäurestruktur des Peptids ist entschlossen. Das Peptid wird in seine konstituierende Aminosäure hydrolysiert, indem man sie in 6 NHCl an 110°C 24 Stunden lang erhitzt. Stanford Moore und William Stein zeigten, dass Aminosäuren in den Hydrolysaten durch Ionenaustauschchromatographie auf Spalten des sulfonated Polystyrens getrennt werden und quantitativ bestimmt werden können, indem man sie mit Ninhydrin reagiert.
Aminosäuren behandelten diese Methode geben eine intensive blaue Farbe, außer Praline, die eine gelbe Farbe gibt, weil sie eine Sekundäraminogruppe enthält. Die Konzentration der Aminosäure in einer Lösung ist zur optischen Absorption der Lösung nach Heizung es mit Ninhydrin proportional. Diese Technik kann ein Mikrogramm (10nmol) einer Aminosäure entdecken, die über die Menge ist, die in einem thumbprint vorhanden ist.
So wenig, wie ein nanogram (pmol 10) einer Aminosäure mittels des fluorescamine entdeckt werden kann, das mit der ein-Aminogruppe eines in hohem Grade Leuchtstoffproduktes reagiert. Die Identität der Aminosäure wird durch seinen Eluierungdatenträger aufgedeckt, der im Datenträger des Buffers benutzt, um die Aminosäure von der Spalte zu löschen.
Der Amino-terminal Rückstand eines Proteins oder des Peptids kann identifizierent werden, indem man es mit einem Mittel beschriftet, das ein beständiges kovalentes Link bildet.
Fluorodinitrobenzene (FDNB) wurde zuerst zu diesem Zweck von Frederick Sanger verwendet. Dabsyl Chlorverbindung ist jetzt allgemein verwendet, weil sie intensiv farbige Ableitungen bildet, die mit hoher Empfindlichkeit entdeckt werden können. Sie reagiert mit einer uncharged Gruppe a-NH2, um eine Sulfonamidableitung zu bilden, die unter Bedingungen beständig ist, die Peptidbindungen hydrolysieren.
Obgleich die dabsyl Methode für die Bestimmung des Amino-terminal Rückstandes empfindlich und leistungsfähig ist, kann sie nicht auf dem gleichen Peptid wiederholt verwendet werden, weil das Peptid total im Säurehydrolysejobstep vermindert wird. Pehr Edman plante eine Methode für die Kennzeichnung des Amino-terminal Rückstandes und die Spaltung er vom Peptid, ohne die Peptidbindungen zwischen den anderen Aminosäurerückständen zu stören. Die Edman Verminderung löscht sequenziell einen Rückstand auf einmal vom Aminoende eines Peptids. Phenyl- Isothiozyanat reagiert mit der uncharged Terminalaminogruppe des Peptids, um eine phenylthiocarbamoyl Ableitung zu bilden. Dann unter mildy säurehaltigen Bedingungen, wird eine zyklische Ableitung der Terminalaminosäure befreit, die ein intaktes Peptid verkürzt durch eine Aminosäure verlässt.
Analysen der Proteinstrukturen sind deutlich durch die Entwicklung von sequenators beschleunigt worden, die automatisierte Instrumente für die Ermittlung der Aminosäurereihenfolge sind. In einem Flüssigphasensequenator wird ein Dünnfilm des Proteins in einem spinnenden zylinderförmigen Cup der Edman Verminderung unterworfen. Die Reagenzien und die Extrahierunglösungsmittel werden über den stillgestellten Film des Proteins geführt, und die freigegebene PTH-Aminosäure wird durch die flüssige Hochdruckchromatographie identifizierent (auch genannt leistungsstarke flüssige Chromatographie, HPLC).
Eine Schleife der Edman Verminderung wird in weniger als zwei Stunden durchgeführt. Durch wiederholte Verminderungen kann die Aminosäurereihenfolge von etwas fünfzig Rückständen in einem Protein entschlossen sein. Gasphasensequenators können Picomolequantitäten Peptide und Proteine analysieren. Diese hohe Empfindlichkeit bildet es durchführbar, die Reihenfolge einer Proteinprobe zu analysieren, die von einem einzelnen Band eines SDS-Polyacrylamid Gels eluiert wird.
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