Molekulares Biologie-Forum - Zelle Biologie und Zellkultur http://www.molecularstation.com/forum Zelle Biologie-Forum. Zellkultur-Forum. Geben Sie bekannt und stellen Sie Fragen über Zelle das Züchten, Zelle Lysis, Zelle transfection, Zelle Wachstum und Zelle Biologie. en Gesessen, Jul 19 2008 09:28:57 GMT vBulletin 60 http://www.molecularstation.com/forum/images/misc/rss.jpg Molekulares Biologie-Forum - Zelle Biologie und Zellkultur http://www.molecularstation.com/forum Trypsinisation http://www.molecularstation.com/forum/cell-biology-cell-culture/3592-trypsinisation.html Thu, Jul 17 2008 13:48:43 GMT Hallo möchte ich fragen Sie, daß einige Fragen mir 1X Trypsin hinzufügen sollte, um die Zellen abzutrennen, aber ich Trypsin versehentlich 10X in die Flasche von... hinzufügte Hallo
Ich möchte Ihnen einige Fragen stellen
Ich sollte 1X Trypsin hinzufügen, um die Zellen abzutrennen, aber ich fügte Trypsin versehentlich 10X in die Flasche der Zellen hinzu, also fügte ich immediatly in PBS in die Flasche hinzu, um das Trypsin zu verdünnen und für einige Minuten zu gehen (weniger als 5) als fügte ich im kompletten Medium hinzu, um ihn zu neutralisieren und mit meiner normalen Nebenkulturprozedur an zu tragen
Kann ich fragen, ob ich die Zellen noch benutzen kann?
Danke ] ] > Zelle Biologie und Zellkultur stacia http://www.molecularstation.com/forum/cell-biology-cell-culture/3592-trypsinisation.html Merkwürdige Schauende STO Fibroblasten http://www.molecularstation.com/forum/cell-biology-cell-culture/3544-strange-looking-sto-fibroblasts.html Mon, Jul 07 2008 14:50:56 GMT Hallo,

Ich habe vor kurzem Mühe gehabt, gefrorenes STOs resuscitating. Nach einigen Tagen sehen die Zellen wie ca. geschossene Bohrungen eine in ihnen aus. Ich habe 4 Mikroskopbilder der Zellen angebracht.

Jedermann haben alle mögliche Ideen, was sie veranläßt, wie dieses auszusehen? Ist es irgendeine Sortierung der Verschmutzung? Jeder möglicher Kommentar oder Ideen werden geschätzt.

Danke!
Angebrachte Bilder
Datei-Typ:jpg Fibroblast weirdness1.jpg (95.7 KBS)
Datei-Typ:jpg Fibroblast weirdness2.jpg (87.6 KBS)
Datei-Typ:jpg Fibroblast weirdness3.jpg (89.8 KBS)
Datei-Typ:jpg Fibroblast weirdness4.jpg (85.2 KBS)
] ] > Zelle Biologie und Zellkultur fishdontbounce http://www.molecularstation.com/forum/cell-biology-cell-culture/3544-strange-looking-sto-fibroblasts.html Zelle CAPAN-1 Verschmutzung http://www.molecularstation.com/forum/cell-biology-cell-culture/3543-capan-1-cell-contamination.html Mon, Jul 07 2008 00:15:57 GMT Hallo Kerle,
Ich versuche, Zellen irgendein CAPAN-1 von jemand aufzuwachsen flüssige Nàktien und gefunden zu haben, daß sie sehr langsames Wachsen und kleine schwarze Punkte überall entwickelt zu haben sind, die an der Platte gehaftet werden und nur unter 40x gesehen werden. Sie scheinen nicht umzuziehen und es scheint, daß sie zu klein sind, Bakterium zu sein.
Hat jemand irgendeine Idee, was es sein konnten?

Einige Besonderen:
Morgens, das herauf die Zellen in einem Blitz T25 mit RPMI 1640 Media (+L-glut) wächst + 10% FBS und ein Antimycotic/biotic fügte den Media hinzu. Als ich die schwarzen Punkte beachtete, die ich die Zellen mit PBS wusch und zusätzliche neue Media mit gentimycin zum Versuch und beenden, was auch immer es ist, aber es didnt Arbeit.
Ich weiß, daß diese Zellen natrually mucin absondern, aber ich denke nicht, daß es wie das aussehen sollte... Sein ein Bit zu früh, zum der Zellen passieren zu lassen, da sie wenige und weit zwischen... sind

Irgendwelche helfen?
Danke

Ania ] ] > Zelle Biologie und Zellkultur Ania http://www.molecularstation.com/forum/cell-biology-cell-culture/3543-capan-1-cell-contamination.html DRINGENDE HILFE für Zellkultur http://www.molecularstation.com/forum/cell-biology-cell-culture/3539-urgent-help-cell-culture.html Gesessen, Jul 05 2008 17:03:00 GMT He, da ich vollständig neu bin zu erforschen und besonders Zellkultur, habe ich eine harte Zeit, nach etwas Informationen zu suchen. Mag ich können, Sie wissen normalerweise tun Sie, ob bestimmte Zelle Zeile die Faktoren ausdrücken, die wir wünschen? z.B. züchte ich Neuro2A (N2-A) neuroblastoma Zelle Zeile, und ich möchte bestimmte Wachstumfaktoren einspritzen, sage IGF und werte den Effekt auf den Wachstumfaktor auf der Zelle unter hypoxic Bedingung aus. Wie weiß ich, welchem Zelle line(astrocytes, neuronalem oder microglial usw.) diesen bestimmten Wachstumfaktor ausdrückt?

eine andere Sache ist, die Zellen hypoxic Zustand zu unterwerfen, wie ich konzipieren den Zustand? Sagen für neuroblastoma Zelle Zeile? Ich versuchte, nach Papieren zu suchen, aber couldnt Entdeckung, möglicherweise bin ich nicht gut, wenn man Papierforschung tut? ] ] > Zelle Biologie und Zellkultur stacia http://www.molecularstation.com/forum/cell-biology-cell-culture/3539-urgent-help-cell-culture.html Eigenschaften der cancerous Zellen http://www.molecularstation.com/forum/cell-biology-cell-culture/3453-characteristics-cancerous-cells.html Frei, Jun 13 2008 12:28:34 GMT Hallo


Fast alle Typen unterschiedene Zellen können neoplastische cancerous,or werden. ' der Prozeß der Zelle Änderung, in dem,a Zelle seine Fähigkeit verliert, seine Kinetik der Abteilung zu steuern und folglich eine Tumorzelle wird, wird Zelle Transformation genannt.

Die cancerous Zelle behält im Allgemeinen die strukturellen und Funktionseigenschaften des normalen Zelle Typen von bei, den sie berechnet wird. So fahren cancerous Zellen der Schilddrüsedrüse fort, thyroxin abzusondern. Neoplastische Zellen unterscheiden jedoch sich von ihren normalen Gegenstücken in einigem Respekt.

1. Immortalization. Normale Zellkulturen überleben nicht unbestimmt. Z.B. sterben menschliche Zellkulturen nach ungefähr 50 Erzeugungen, und Huhnzellkulturen haben eine viel kürzere Lebenserwartung. Andererseits sind umgewandelte Zellkulturen unsterblich und können unbestimmt wachsen. Die Zellkulturen, die mit Mäusesarkomvirus angesteckt werden, können so lang beibehalten werden, wie Nahrung zur Verfügung gestellt wird und das Überfüllen vermieden.



2. Verlust der Kontakthemmungen. Normale Zellen in einer Kultur stoppen, zu wachsen, wenn ihre Plasmamembranen in Kontakt miteinander kommen. Wenn zwei normale Zellen in Kontakt kommen, stoppen einer oder beide zu bewegen und fangen dann an, in eine andere Richtung zu bewegen. Diese Hemmung des Wachstums nach Kontakt ist geprügelte Kontakthemmung.

Wenn Mäusezellen in einem Kulturmedium gewachsen werden, verursachen die anhaftenden Eigenschaften der Zelle Membranen die Zellen zum Stock zu den Wänden des Glasbehälters. So lang, wie die Zellen wenige sind, fahren sie, in fort 24 Stunde Abständen regelmäßig sich zu teilen, bis sie eine einzelne Schicht (monomolekularen Film) bilden. Nach dieser ihrer Kinetik der Abteilung verlangsamt. Anscheinend hemmt Kontakt der Plasmamembranen der Zellen Wachstum und Abteilung.

Nach der Formung eines monomolekularen Films umgewandelte Zellen andererseits, normalerweise stoppen nicht sich zu teilen. Abteilung fährt fort, bis einige Schichten Zellen gebildet sind. So umgewandelte Zellen sind nicht imstande, in ein bewegungsloses Stadium einzusteigen und werden ununterbrochen wachsen, bis sie sich beenden.

Umgewandelte Zellen anscheinend, machen eine Änderung in der Eigenschaft ihrer Zelle Membranen durch, die weniger Kleber werden. Diese Änderung aktiviert die Zellen, sich von den benachbarten Zellen zu trennen und andere Organe einzusickern, in denen sie metastatic Tumoren bilden. Krebszellen ermangeln anscheinend korrekte Anerkennung und Kommunikation.

3. Verringerte zellulare Adhäsion. Wenn normale Zellen cancerous werden, gibt es eine Änderung in den ' Klebrigkeit ihrer Zelle Membranen. Normale Zellen zeigen Klebrigkeit oder Klebrigkeit. Wenn Sie in einem Nährmedium gewachsen werden, hielt in einem Glasbehälter, die Zellen haften am Glas anstatt an der Hin- und Herbewegung im Medium. Umgewandelte Zellen zeigen eine verringerte Klebrigkeit und wenn sie in den festen Media gewachsen werden, haften miteinander kleiner, als normale Zellen. Jedoch sind Beispiele der erhöhten Klebrigkeit, die bösartiger Transformation folgt, auch berichtet worden

Klebrigkeit zeigt beträchtliche Besonderheit. So neigen Leberzellen, an anderen Leberzellen zu haften, aber nicht zu anderen Zelle Typen z.B. Nierezellen, wenn die Zellen der Leber und des Pankreas durch das Enzymtrypsin getrennt werden und zusammen ausgebrütet, häufen sie an, um kleine Stücke des Lebergewebes und des Nieregewebes zu bilden.

So haften Nierezellen an den Nierezellen und Leberzellen zu den Leberzellen, Cancerous Zellen zeigen nicht diese Eigenschaft. H werden bösartige Haut-Krebszellen mit normalen Nierezellen gemischt, welche die gebildeten Gesamtheiten Niere enthalten und Hautzellen mischten zusammen. Dieses erklärt vermutlich, warum bösartige Zellen einige normale Organe eindringen können

4 Invasiveness. Eine der wichtigsten Eigenschaften der umgewandelten Zellen ist ihr invasiveness, d.h. die Fähigkeit, andere Gewebe einzudringen. Im Gegensatz zu normalen Zellen können umgewandelte Zellen die chorioaallantoic Membrane des Hühnereies eindringen. Dieses invasiveness konnte das Resultat der Änderungen in der Plasmamembrane und oder in den Proteasen sein, die durch die Zellen freigegeben wurden

6. Verlust der Anchorageabhängigkeit. Die meisten normalen Zellen müssen zu einem steifen Substratum (d.h., sie müssen befestigt werden), angebracht werden um zu wachsen. Umgewandelte Zellen können wachsen, selbst wenn sie nicht zum Substratum angebracht werden, wie, zum Beispiel wenn sie in einem semisolid mittleren enthaltenen Nährboden oder in einer Methyl- Zellulose verschoben werden. Dieser Verlust des Anchorages ist die auffallendste Eigenschaft der umgewandelten Zellen, die bösartige Tumoren bilden. Er wird verwendet, um umgewandelte Zellen von einer normalen Zelle Bevölkerung auszuwählen.

6. Senken Sie Serumanforderungen. Wachstum normalen celß in einem Gewebekulturmedium benötigt eine hohe Konzentration des Serums. Einige Serumwachstumfaktoren (somatomedins) ähneln Insulin beim Einwirken, auf die externen Empfänger der Zelle Membrane, zum der biochemischen Aktivitäten innerhalb der Zelle zu regeln. Umgewandelte Zellen können in einem Kulturmedium wachsen, der viel weniger Serum als durch normale Zellen benötigt enthält.

Z.B. wachsen normale Zellen 3T3 (hergestellte Fibroblasten der Maus, zeichnen geläufig verwendet in der Gewebekultur), optimal 10% im fötalen Kalbserum, während celß, das von SV40 umgewandelt wird (simian Virus Nr. 40) in 1% oder 10 % Serum gleichmäßig gut wachsen kann. Es ist vorgeschlagen worden, daß die niedrigere Serumanforderung der umgewandelten Zellen wegen ihrer wenigen Anforderung der äußeren Substanzen, ihre intrazelluläre Ampere (zyklisches Ampere) Stufe zu senken, um Mitosis zu starten ist

7. Vorgewählte Agglutination durch lectins - Lectins sind die Proteine, die weit in Betriebe, besonders Hülsenfrüchte verteilt werden, aber werden auch in einigen Tieren gefunden. Sie haben die Fähigkeit, an Empfänger, die ausgebrittene Kettenzuckermoleküle (Oligosaccharide) sind, auf der Oberfläche der Zelle Membrane zu binden. Resultierend aus dieser Schwergängigkeit verursachen lectins aggluti*nation oder das Aufhäufen der Zellen. Sie sind folglich, Agglutinine.

In den normalen Zellen liegen die Empfänger oder verbindlichen die Sites des Agglutinins für lectins in einer verbreiteten Weise auf der Zelle Oberfläche und sind unbeweglich. Lectins bilden Juden interzelluläre Brücken, und folglich ist Agglutination nicht möglich. In umgewandeltem celß, das ist, sind Empfänger innerhalb der Membrane beweglicher. Lokale Regionen der hohen Konzentration der verbindlichen Sites werden gebildet. Lectins können folglich, genügende interzellulären Brücken zu bilden, um Agglutination zu ergeben.

8. Molekulare Änderungen in den Zelle Membrane Bestandteilen. Es gibt einige Unterschiede zwischen den Oberflächenzelle Membranen der normalen und umgewandelten Zellen. Die Zelle Membrane besteht aus vier Haupttypen Phospholipide, die das Lipid bilayer bilden, wenn den Glykolipiden und glyco Proteine in dieses bilayer eingesetzt sind. Cancerous Zellen anscheinend unterscheiden nicht sich von den normalen Zellen in ihren relativen Mengen Phospholipiden

Jedoch werden Ganglioside (Glykolipide, die Sial- Säuren enthalten), in bestimmten Mäusekrebszellen verringert. Die Enzyme, die in ihre Biosynthese mit einbezogen werden, werden auch verringert. Normale Zellen besitzen vier Typen Ganglioside, GMla, GM1, GM2 und GM3. Tumorzelle enthalten überwiegend den einfachsten Typen, GM3. Sie ist jedoch, nicht sicher, ob diese Änderungen für den cancerous Zustand hauptsächlich verantwortlich sind, da einige umgewandelte Mäusezelle Zeilen normale Menge Ganglioside enthalten.

Bestimmte Änderungen sind in den Glucoproteiden der cancerous Zellen gefunden worden. Das Oberflächenglucoproteid von MW 46.000 verschwindet früh in der Transformation zum cancerous Zustand. Es gibt auch ein langsames Verschwinden eines Hauptproteins, benannt LÄSST (groß, extern, das Umwandeln empfindlich) Protein (MW -240.0.00).

Vermutlich verschwinden das wichtigste Protein zu, nachdem Transformation die ist, die MW 200.000 hat. Wie vorher erwähnt, erhöht sich die Mobilität der Oberflächenproteine der umgewandelten Zellen und so ermöglicht einfachere Agglutination der Tumorzellen durch lectins.

Desorganisation 9 des Cytoskeleton - normale Zellen haben einen Cytoskeleton (sehr viel wie Muskelfasern) der aus microtubules und Mikrofädchen besteht. Diese Fasern haben eine regelmäßige Anordnung und holen ungefähr koordinierte Zelle Bewegung. In umgewandelten Krebszellen sind die Fasern viele weniger zahlreich und normalerweise viel dünner. Es ist vorgeschlagen worden, daß in umgewandelten Zellen der Cytoskeleton Entpolymerisation durchmacht. Die microtubules zerlegen.

Die Fasern der Mikrofädchen (Actin) machen Entpolymerisation durch und verschwinden, aber verbreiteten Actin Remains. Myosin-wie Heizfäden verschwinden Sie auch. So in umgewandelten Zellen werden die Cytoskeletonproteine weniger organisiert als in den normalen Zellen. Es ist, daß es diese Desorganisation des Cytoskeleton ist, und nicht die geänderte Flüssigkeit der Lipide vorgeschlagen worden, diese Resultate in erhöhter Mobilität der Zelle Membrane Proteine.

Die Desorganisation des Cytoskeleton beeinflußt auch die Zelle Oberfläche in einer anderen Methode. Wenn Krebszellen Note dort ist, ordinated eine Konstante und ein Unco werfen heraus und Rückzug von blebs, von Microvilli und von Rüschen von der Zelle Oberfläche. Tumorzellen haben eine gekräuselte Oberfläche als normale Zellen, mit viel mehr Oberflächenprozessen.

10.Increase in der negativen Oberflächenladung der Zelle Membrane: Der Oberflächenmembrane Ladung durch microlectrophoresis sind zwischen den normalen und bösartigen Zellen geverglichen worden. In den bösartigen Zellen ist aufsteigende Mobilität normalerweise höher und zeigt Zunahme der negativen Oberflächenladung an

11. Erhöhter Zuckertransport: Tumorzellen verbrauchen viel mehr Glukose als normale Zellen, weil sie wachsen und multiplizieren müssen. Es gibt eine große Zunahme der Kinetik des Zuckertransportes durch die Oberflächenzelle Membrane nach Transformation. Dieses erhöht Zuckereinlaß durch bösartige Zellen

12. Aussehen Versetzung-Rückweisungantigene des Virus der spezifischen: Plasmamembranen der meisten umgewandelten Zellen enthalten Antigene, die nicht in den normalen Zellen anwesend sind. So in der Zelle wandelte durch Adenoviren um und papovaviruses das T Antigen ist immer anwesend. Ähnlich enthalten alle Zellen, die durch das Epstein-Barr Virus umgewandelt werden (EB. Virus) ein Antigen, das das EB Kernantigen (EBNA) genannt wird. Tumorantigene können einer ungefähr Immunitätantwort gegen selbst inch genetisch ähnliche Hauptrechner, diesen holen ist im Gegensatz zu normalen Histocompatibilityantigenen.

Die Immunitätantwort brachte durch die Antigenresultate in der Anerkennung und in der Zerstörung der eben gebildeten Krebszellen und ihrer Folgeprozeße hervor. Solch ein Abwehrmechanismus wird immunologische Überwachung genannt und kann zu die Beseitigung der Krebszellen unter vorteilhaften Bedingungen führen. Es ist daß nur in den seltenen Fällen vorgeschlagen worden, wenn dieser Abwehrmechanismus ausfällt, daß Tumoren gebildet werden

13. Defekte elektrische Kommunikation: Elektrische Anschlüsse treten normalerweise zwischen einzelnen Zellen auf. In einigen Krebszellen jedoch ist es berichtet worden, daß solche Anschlüsse defekt sind

14. Erhöhte Absonderung der proteolytischen Enzyme. Große Mengen der proteolytischen Enzyme werden nach allen Typen Krebszellen, ausgenommen die der Blut-bildengewebe abgesondert. Die Krebszelle sondert eine Protease ab, die den Zelle Faktor (MWI, 40,00O) genannt wird, um ein Plasmin, ein proteolytisches Enzym (MW 76.000) zu bilden. Es ist vorgeschlagen worden, daß Plasmin viele Proteine löscht, die von der Zelle Oberfläche durch enzymatische Verdauung sich projizieren und der Zelle in Abteilung signalisiert

Wenn normale Zellen mit Proteasen behandelt werden, die sie viele der Eigenschaften der umgewandelten Zellen zeigen, ist es spekuliert worden, daß Virenproteine die Freisetzung von extrazellularer Protease verursachen. Es gibt keinen unmittelbaren Beweis für dieses, jedoch

15. Aldolasen: In den meisten Säugetier- Geweben existiert das Enzymaldolase in Form von drei Isozymen A, Band C. Isozymes A und C herrschen in den embryonalen Geweben vor, während im Erwachsenen unterschieden Gewebe das B Isozym überwiegend ist. In einigen Tumoren besonders in schlecht unterschiedenen und schnell wachsenden Krebsen mögen Sie bestimmte Hepatomas, Isozym B wird ersetzt durch Isozym A, das embryonale Formular

16. Erhöhte Kinetik von Glykolyse: In den zwanziger Jahren unterstrich das Krieg burg die oxydierende (aerobe) Atmung wird niedergedrückt in den Tumorzellen, und diese Glykolyse (anaerobe Atmung) erhöht sich. Dieses ist durch eine Zunahme der sauren Milchproduktion in den Zellen der festen Tumoren gezeigt worden. Es gibt eine entsprechende Zunahme des Hebens der Glukose, es ist vorgeschlagen worden, daß Zunahme der Glykolyse das Resultat der Verletzung zur normalen Oxidation Einheit der Zelle ist.

Untersuchungen über Atmung in den Tumorzellen haben jedoch kontroverse Resultate erbracht. sind Oxidation und Atp Synthese unverändert in lokalisierten Tumormitochondrien geblieben. Andererseits ist Zunahme dieser Aktivitäten auch beobachtet worden.

Außerdem ist sie nicht frei, ob die Änderungen im Atmungsmetabolismus die Ursachen des Krebses oder die Resultate des Krebses sind. Es ist möglich, daß der hohe Energiebedarf von Krebszellen aktiv teilen die Zelle ergeben kann, die anaerobe Glykolyse als Ergänzung normaler aerober Atmung anpaßt



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aftab ] ] > Zelle Biologie und Zellkultur aftabac http://www.molecularstation.com/forum/cell-biology-cell-culture/3453-characteristics-cancerous-cells.html Transformation Analyse http://www.molecularstation.com/forum/cell-biology-cell-culture/3449-transformation-analysis.html Thu, Jun 12 2008 12:59:18 GMT Hallo nach Transformation der Zellen durch Chemikalie- oder Strahlungsmittel, was die beste und einfache Methode ist, die Transformation des Tieres zu bestätigen... Hallo

nach Transformation der Zellen durch Chemikalie- oder Strahlungsmittel, ist was die beste und einfache Methode, die Transformation der Tierzellen zu bestätigen?



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aftab ] ] > Zelle Biologie und Zellkultur aftabac http://www.molecularstation.com/forum/cell-biology-cell-culture/3449-transformation-analysis.html