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ELISA Probe

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Was ist ein ELISA?

Enzym-Gebundene Immunosorbent-Probe oder ELISA, ist eine biochemische Technik, die hauptsächlich in der Immunitätsforschung verwendet wird, um das Vorhandensein eines Antikörpers oder des Antigens in einer Probe zu entdecken. Das ELISA ist als Diagnosehilfsmittel in der Medizin verwendet worden und Pflanzenpathologie, sowie eine Qualitätskontrolle überprüfen innen verschiedene Industrien. In den einfachen Bezeichnungen in ELISA ein unbekannte Menge des Antigens wird zu einer Oberfläche hinzugefügt, und dann wird ein spezifischer Antikörper über der Oberfläche gewaschen, damit er an das Antigen binden kann. Dieser Antikörper wird mit einem Enzym gebunden, und im abschließenden Jobstep wird eine Substanz hinzugefügt, die das Enzym in irgendein nachweisbares Signal umwandeln kann. So im Fall von der Fluoreszenz ELISA, wenn Licht nach der Probe geglänzt wird, fluoreszieren alle mögliche antigen/antibody Komplexe, damit die Menge des Antigens in der Probe gemessen werden kann.

Das Durchführen eines ELISA bezieht mindestens einen Antikörper in Besonderheit für ein bestimmtes Antigen mit ein. Die Probe mit einer unbekannten Menge des Antigens wird auf einem festen Support (normalerweise eine Polystyrenmikrotiterplatte) entweder non-specifically stillgestellt (über Aufnahme zur Oberfläche) oder spezifisch (über Sicherung durch ein anderes Antikörperbesonderen zum gleichen Antigen, in einem "Sandwich" ELISA). Nachdem das Antigen stillgestellt ist, wird der Abfragung Antikörper hinzugefügt und bildet einen Komplex mit dem Antigen. Der Abfragung Antikörper kann mit einem Enzym kovalent gebunden werden, oder Dose selbst wird durch einen Sekundärantikörper entdeckt, der mit einem Enzym durch bioconjugation gebunden wird. Zwischen jedem Jobstep wird die Platte gewöhnlich mit einer milden reinigenden Lösung gewaschen, um alle mögliche Proteine oder Antikörper zu löschen, die nicht spezifisch gesprungen werden. Nachdem der abschließende Wäschejobstep die Platte entwickelt wird, indem man ein enzymatisches Substrat hinzufügt, um ein sichtbares Signal zu produzieren, das die Quantität des Antigens in der Probe anzeigt. Älteres ELISAs verwenden chromogene Substrate, obwohl neuere Proben fluorogenic Substrate mit viel höherer Empfindlichkeit einsetzen.

ELISA Probe Anwendungen

Weil das ELISA durchgeführt werden kann, um entweder das Vorhandensein des Antigens oder das Vorhandensein des Antikörpers in einer Probe auszuwerten, ist es ein nützliches Hilfsmittel für die Bestimmung von von Serumantikörperkonzentrationen (wie mit der HIV test[1 ] oder von von Westnil Virus) und auch für das Entdecken des Vorhandenseins des Antigens. Es hat auch Anwendungen in der Lebensmittelindustrie gefunden, wenn es mögliche Nahrungsmittelallergene wie Milch, Erdnüsse, Walnüsse, Mandeln entdeckte, und eggs.[2 ] ELISA kann in der Toxikologie als schneller vermutlicher Bildschirm für bestimmte Kategorien der Drogen auch verwendet werden.

Der ELISA Test oder das immunoassay Enzym (EIA), waren der erste Siebungtest, der geläufig für HIV eingesetzt wurde. Er hat eine hohe Empfindlichkeit. In einem ELISA Test ist das Serum einer Person verdünntes 400-fold und zugetroffen auf eine Platte, zu der HIV Antigene angebracht worden sind. Wenn Antikörper zu HIV im Serum anwesend sind, können sie an diese HIV Antigene binden. Die Platte wird dann gewaschen, um alle weiteren Bestandteile des Serums zu löschen. Ein besonders vorbereiteter "Sekundärantikörper" — ein Antikörper, der an menschliche Antikörper bindet, — wird dann auf die Platte zugetroffen, gefolgt von einer anderen Wäsche. Dieser Sekundärantikörper wird chemisch im voraus mit einem Enzym gebunden. So enthält die Platte Enzym im Verhaeltnis zu der Menge des Sekundärantikörpers gesprungen zur Platte. Ein Substrat für das Enzym wird angewendet, und Katalyse durch das Enzym führt zu eine Änderung in der Farbe oder in der Fluoreszenz. ELISA Resultate werden als Zahl berichtet; der umstrittenste Aspekt dieses Tests stellt den "Abkürzung" Punkt zwischen einem positiven und negativen Resultat fest.

Eine Methode der Bestimmung eines Abkürzungpunktes ist durch Vergleich mit einem bekannten Standard. Z.B. wenn ein ELISA Test in der Arbeitsplatzdrogesiebung benutzt wird, wird eine Abkürzungkonzentration (z.B., 50 ng/mL der Droge) und eine Probe wird vorbereitet hergestellt, die diese Konzentration des Parameters enthält. Unbekannte, die ein Signal festlegen, das positiver ist, als die bekannte Probe "Positiv" und die, die ein Signal festlegen, das weniger positiv ist, als die bekannte Probe werden benannt "Negativ genannt werden.

Theorie Darwins der Entwicklung

Vor der Entwicklung des EIA/ELISA, war die einzige Option für das Leiten ein immunoassay Radioimmunoprobe, eine Technik mit radioaktiv-beschrifteten Antigenen oder Antikörpern. In der Radioimmunoprobe stellt die Radioaktivität das Signal zur Verfügung, das anzeigt, ob ein spezifisches Antigen oder ein Antikörper in der Probe anwesend ist. Radioimmunoprobe wurde zuerst in einem Papier von Rosalyn Sussman Yalow und in Solomon Berson beschrieben, das in 1960[3 veröffentlicht wurde ].

Weil Radioaktivität eine Gesundheit Drohung aufwirft, wurde eine sicherere Alternative gesucht. Eine verwendbare Alternative zur Radioimmunoprobe würde ein inaktives Signal anstatt des radioaktiven Signals ersetzen. Wenn bestimmte Enzyme (wie Peroxydase) mit passenden Substraten (wie ABTS oder 3.3,’5, 5 -’Tetramethylbenzidine) reagieren, können sie Änderungen in der Farbe ergeben, die als Signal verwendet werden kann. Jedoch muß das Signal auf das Vorhandensein des Antikörpers oder des Antigens beziehen, das ist, warum das Enzym mit einem passenden Antikörper gebunden werden muß. Dieser bindenprozeß wurde unabhängig von Stratis Avrameas und von G.B. Pierce[4 entwickelt ]. Da es notwendig ist, jeden ungebundenen Antikörper oder Antigen zu löschen, indem man wäscht, muß der Antikörper oder das Antigen an der Oberfläche des Behälters befestigt werden, d.h. muß das Immunosorbent vorbereitet werden. Eine Technik, zum dieses zu vollenden wurde durch Wide und Porath in 1966[5 veröffentlicht ]

1971, Peter Perlmann und Eva Engvall an der Stockholm Universität in Schweden, sowie Anton Schuurs und Bauke van Weemen in den Niederlanden, unabhängig erschienene Papiere, die dieses Wissen in Methoden synthetisierten, um EIA/ELISA[6][7 durchzuführen ]

ELISA Protokoll

Elisa Probe Videos

ELISA Probe Bildschirm

ELISA Probe Bildschirm. Ermittlung von Chlorpyriphos Methyl in den Weizenproben durch Enzym band Immunosorbentprobe ELISA von zuhaitz77.

Vorbei hinzugefügt: oBWhat
Marken: elisay Probe Enzym gebundenes Immunosorbent
Datum: 2008-05-04

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